全 文 ：广西植物 Gu i 五 ai as ( 4 ) :4 0 5一4 0 5 . 19 8 5 4 0 5
甜叶菊中 St e v io s ide 的测定
韦 永 成
(广西亚热带作物研究所 )
摘要 在硅胶 G薄层板上用氯仿 :甲醇 :水(3 8 :12 :)2 分离出 S t ev ios i de , 用蕙酮一 硫酸试剂显
色 . 然后用上海 72 型一分光光度计在6 20n m 波长比色 , 测出甜叶菊中 S et 叭 os id e 的含量 . 本法回收 率为
96
.
50土0 . 53 9万。
前 言 -
甜叶菊 ( s t e v la : e b a u d i a n a B e r t o n i ) 是菊科多年生草本植物 。 原产南美巴拉圭 、 ’巴西
等热带地区 。 其叶中含有比蔗糖甜 1 00一 30 0倍的甜味物质一甜菊贰 ( tS e vi os id e ) , 是四环二
菇类化合物 。 近年来 , 我国许多地方引种栽培。 据报道 , 甜叶菊中 S t e vi os i de 的含量 测 定
方法有 : 气相色谱法 、 薄层一气相色谱联合测定法 , 薄层扫描测定法 、 薄层层离诱 光 光 度
法 。 本文介绍改良测定方法 : 即将干燥甜叶菊叶粉用甲醇提取 , 经 T L G 极分离 , 把相 应的
S t
e vi os id
e斑点刮出提取 , 用蕙酮试剂来显色测定吸光度。 其显色过程的化学反应式如下 .
实 验 部 分
一 、 仪 . 及试荆 72 型一分光光度 计 (上海分析仪
器厂 )微量进样器 ( 1 0一 2 0 u l )层析板 ( 1 7 x 4 . s e m ) 乙醇
( 9 5% )
、 氯仿 、 甲醇 、 浓硫酸 (均 A · R ) 蕙酮 ( C · P )甜
菊试(影e心o s id e )纯品
} 二 、 标准曲魏的制作
.
1
. , 精确称取甜菊贰 ( S t e v i o s i d e )纯品 i o o m g , 用双性
蒸水溶解移入 10 0m l 的容量瓶中 , 并用双蒸水稀释定 容
至刻度 , 密闭低温保存。 此液为每毫升含 l 毫克的基准
溶液 。 ·
2
。 精确吸取上述标准溶液 0 . 2 5 、 0 . 50 、 0 . 76 、 1 . 0 、
1
.
25
、
1
.
50 和2 . Om l , 分别移入 50 m l的容量瓶中 , 用双蒸
水稀释定容至刻度 。 上述分别得到浓度为 0 . 50 。、 。 . 0 1。 、
0
.
0 1 5
、
0
.
0 2 0
、
0
.
0 2 5
、
0
.
0 3 0和 0 . 0 4 0m g /m l的标准溶液 。
下H o 。 , , , ·
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3
。 吸取上述标准溶液各 2 m l , 分别移入 10 m l的具塞刻度试管中 , 同时吸 2 m l双燕水于
另一试管中作空白 。 然后把试管置冰浴中 , 每支试管准确加入 0 . 2 %的蕙酮一硫酸试 剂 4 m l ,
将试管塞紧剧烈摇匀 , 放回冰浴中冷却后取出放入沸水浴中准确加热 10 分钟取出迅速放入冷
水中冷却至室温后用 10 m m 的比色皿 , 在 6 2 On m 波长测定各自的光密度。 所得结果列于表 1 :
4 06 广 西 植 物5 卷
编 号 1 { }2 ! 8 6 } 6
浓度 m g / m l 0。 0 05 0。 01 0
( x )
吸 光 度 0。 05 0。 1 0生 0。 3 1 0 0。 4 1(( y ) l {
O
。
5 15
;
0
. 2 15
胜
.
。一:.一6一
计算结果得回归方程为 :
y = 0
。
0 0 02 7 8 6 + 1 0
。
2 86 8 85
x ,
` , 、 。 * 、 。 一 万丁- 二云玄歹行一了万夕万分。 _ 。 。 。 。 , 。 。 尸绍」刀丈钊、 `译之艺 J = 一 I 、 l 一 1 1— 一下歹 . 一一 = U . U v V I O O Q 。y n 一 石这表明 , 所确定的回归方程有意义 , 精密度高 , 适用于含量测定 。 据所确定的回归方程 , 绘制标准曲线图如图 1 。
三 、 样品洲定
1
. 提取 : 精确称取通过 60 目筛 孔 的干燥甜叶菊叶粉 2 0 0一 50 m g , 置 于 滤纸简放到提
取器中 , 加入 甲醇50 m l , 装上冷凝管在水浴上加热回流 6 小时 , 回收甲醇得提取物。 将残余
甲醇蒸干后 , 用 95 % 的乙醇溶解洗入 s o m l的容量瓶中 , 并用9 5%的乙醇定溶至刻度 。
入 薄层分离 : 用微量进样器精确吸取样品的乙醇溶液 10 一 30 ul , 在 5 x 17 o m 的 硅胶一 G
薄层板 (王姐硅胶 G 加水 30 m l 制板 4 块 ,风干后于1 05 ℃活化 1 小时置干燥器备用 ) 成点点样 ,
点两个点 , 同时点 一 s t ey i os ide 纯品定位 。 待溶剂干后 , 用 C H C工3 : M e O H : H : O (抬 , 捻
: 2 ) 展开 , 时间约 70 分钟 , 取出挥发展开剂后用碘蒸汽显色定 位 ( 见图 2 ) 。 待 碘 挥 发
后 , 将 S t o v io s id e 斑点准确刮出移入直径为6m 。 , 长 1 c0 m 玻璃滴管中 (尖端用小 许脱 脂棉
塞住以一防硅胶漏掉 ), 用 4 m l的双蒸水洗脱于 6 m l 的容量瓶中并定容至刻度 。 洗脱 时 , 同
时取样做空白 。
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纯品 ; 叶片样
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纯品 外片样
图 1 标准曲线图 图 2 板层显色
4期 韦永成 : 甜叶菊中 t se朽 。 抓 d e 的测定
3
。 测定 : 吸取上述洗脱液 2m l 于10 m l 的具塞试管中 , 将试管置于冰浴加入 O。 2 %的葱
酮一硫酸试剂 4 nl l , 按制作标准曲线操作步骏 , 最后在 6 2 Om m 波长测定吸光度 , 据下 列 公
式计算含量 :
S 。二 , O· ,d。 含量% 二 `糯 .溉票 x l。。
st ve ids 讨 . 加 样 回 收 率
原 样 品
干 叶 粉 }
纯品加人盘 ! 测 得 总 盘 加样回收串
( m g ) (% )
013467
n甘0nU0ó29
,湘29
00
óē1ùn臼巴d工b51勺ō台碑2 5 0 0
2 5 0 0
2 5 0 0
2 5 0 0
2 5 0 0
2 5 0 0
鼠 ( m 砂
含甜菊试
2 4 1
。
5 6
2 41
。
5 6
2 4 1
。
5 6
2 4 1
。
5 6
2 4 1
。
5 6
2 4 1
。
5 6
( m g )
29 0
.
01
总 和
平 均 值
标 准 差
加样回收里
(m g )
4 8
。
0 3
4 8
。
0 3
4 8
。
3 6
皿分。 0轰
4 8
。
6 9
4 8
。
3 6
2 8 9
。
5
4 8
一
2 5
0
。
2 65
9 6
。
0 6
9 6
。
0 6
9 6
。
7 2
9 6
。
0 6
9 7
。
3 8
9 6
。
7 2
阶9 . 0 0
匀6 。 5 0
0
.
5 39
J工342
五 、 甜叶菊叶工业提取产品的定 , 此法测定产品可直接称取样品溶解于乙醇中稀释定
容后进行板层分离测定 。 具体步骤 : 称取甜叶菊叶工业提取产品 0 . 2一。 . 4 0 0 0 9, 用 s9 %乙醇
溶解移入 10 m l 的容量瓶中 , 并加乙醇定容至刻度 , 用微量进样器吸取待 测 液 20 一 4 0 ul , 点
板分离 , 按上述操作测定 。
实验结果与讨论
1
。 本文采用薄层层离一分光光度法测定甜叶菊叶中 S t e vi os ide , 所需的均为常规仪器 ,
操作较简单 , 实验过程如能控制好实验条件 , 结果还是比较好的 , 全过程加样回收率在 9 6 。 5
士 0 。 5 3 9% 。
2
。 本分析方法对叶片提取液未经任何除杂处理而即行板层分离 , 层离过后叶片样 点 甜
菊贰所在的位置略夹杂些黄色色带 , .该色素是否影响下一步的显色 , 有待进一步研究。
本文承蒙广西农学院龙秦教授审阅 , 特致谢意 :
4 0 8广 西 植 物 5 卷
今 考 文 做
〔笼〕 H a r : 了 B . Wo o d . R J. , R . A l l e r t o m , H a r r y W . D i e五I , a n d H e w i t t G . F l e te 五e r , J R . 1 , 5 5 , S t钾 i。 ,记 e
1
.
T h o S t r u e t u 比 o f T il e G l u e o s e M o i e t i e s . Jo u r n a l o f o r g a 皿 10 1 C h吧也 i s t r了 . U . S . 加 , 8巧一 8 73 .
〔2〕 E . M o , e川。 g , U . B e g l i o g e r , F . D o l d e r , H , iL e h t i , P 、 Q u i t t a n d J . A , W a te r s . 1 0 63 , T五亡 A b , o ·
l o t
, C o n f玉g u , a t i o n o f S t o v i o l a n d l s o s t e v i o l . Jo u r n a l o f T五e A位 e ir e a n Ch e坦 i e a l s 。 。 io t了、 , U ` 5 .
A
.
8 5: 2 3 0 5一2 3 0 9 .
〔3〕 中国医学科学院药物研究所编著 , 1 9 7 2 : 中草药有效成分的研究 (第一分册 ) , 1 6 5 、 2 05 一 06 、 3那页。 人民卫生
出版社 。
D E T E RM !NAT ION O F ST EV tQS . D E .N
ST EV IA RE B AUO IANA 日E RT QNI
W
e i Y o n g一C h e n g
( G u a n g x i I n s t i t u t e o f S u b t r o p i e a l C r o p s )
Ab s t r a e t S t e v i o s id e
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e r o n一 s u l f盯 i e a e id
m i n e d b y e o l o r i m e t r i e
r e e o v e r y P e r c e n t a g e o f
e a n b e s e P a r a t e d o n S i l i e a g e l G w i t h e h l o
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1 2 : 2 )
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e s p o t。 二e r e d e t e 心亡e d w i t五
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T h e e o n t e n t o f S t e v i o s i d e i n t h e l e a v e s 可 a s d e t e r 一
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5 士 0 . 5 3 9%
.