全 文 ：第 9卷 第 3期
1 9 9 d年 9月
中 国 病
V IR O L O C IC A
毒 学
S IN ICA
V o l
.
9
S
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.
N o
.
3
1 9 9 4
豆科植物上分离的黄瓜花叶病毒 C( M V )
五个分离物的比较研究
周雪平 蹼祖芹 ’ 方中达 `
(浙江农业大学生物技术研究所 , 杭州 3 1 00 2 9)
.
(南京农业大学植保系 ,南京 2 10 01 4)
提要 从豌豆 、 扁豆 、 菜豆和赤豆分离到五个 c M V 分离物 ,除寄主反应及核酸组分外 , 5 个分离物在
体外抗性 、 蚜虫传毒 、 提纯病毒粒体形态和稳定性 、 衣壳蛋白分子童和病毒粒体迁移率等方面无明
显差异 . 在琼脂糖双扩散试验 `! ,五个分离物与 C卜f认抗血清形成的沉淀线相互融合 ,在 A 蛋白双抗
体夹心 EL sI A 测定` ! , ,也无明显差异 . 根据在四种豆科植物上的症状反应 ,五个分离物可归为两个
型 : I型在豌豆 、 蚕豆 、 菜豆和班豆上产生局部枯斑症状 ; l 型在这四种植物 卜产生系统症状 。 五个分
离物 `卜 , C h几甲 : 含有五个核酸组分 ,其它分离物为四个组分 ,即 C M V p Z可能含有卫星 R N A .
关键词 豆科植物 ,黄瓜花叶病毒 ,株系比较
黄瓜花叶病毒 ( C h IV )株系繁多 , 寄主范围十分 J’ 一泛 , 且能在多种经济作物 卜引起严重危
害 。 近年来 ,我国已先后在菜豆 lj[ 、 豌豆图 、 虹豆阁 、 扁豆叫 、 蚕豆困 、 花生困和大豆叭等豆科作物
_
h 发现有 C 入I V 侵染 ,但对侵染豆科作物的 C h 4V 分离物之 1jJ尚没有系统的比较 ,为此 ,作者对
豌豆 、 扁豆 、 菜豆和赤豆上分离的五个 C M v 分离物进行了生物学特性 、 病毒粒体形态 、 生化特
性和血清学关系等方面的比较 , 现将结果报道如 卜:
材料与方法
l 毒原的分离 、 纯化与鉴定 5 个 以V[ 分离物来自豌豆 、 扁豆 、 菜豆和赤豆 ,编号分别为 C入Iv p Z 、 c 卜Iv p 3 ,
C卜Iv l lB , C入伪唱 和 C卜伪卫 B 。 各分离物都经览色要。珑 ,` ,2心如。 , 。 丫“ 、咖 )二次单斑分离纯化 ,并经血清学测定
确证为 C入r y 。 纯化后的各分离物保存在番茄 (孙明* , 。面如“ ) 卜。
2 生物学测定 寄主范围 、体外抗性和蚜虫传毒试验均按常规方法进行 。
3 病毒提纯 、电镜观察和稳定性测定 病毒提纯参照裴美云等的方法 8[] 。提取的病毒悬浮于去离子水 , }, . 取沙
量提纯病毒滴于蜡盘 ,将铺有 F o nr al r 膜的铜网放于液滴上 , 2 分钟后用滤纸吸干 ,用 2 % PI 巧 . 0 的醋酸铀负染
后电镜观察病毒粒体形态 、 大小 。 提纯病毒适当稀释后接种昆诺要 ( C . 卿 ,阴 ) , 测定病毒的稳定性 。
4 血清学试验 采用琼脂糖双扩散法和 A 蛋白双抗体夹心 E LI s A 法〔, , 。 试验用 A 蛋白纯品为上海生物制品
所产品 ,辣根过氧化物酶联 A 蛋白为 卜海荣盛生物试剂厂产品 。 试验用 c入w 抗血清及 c 入r铲分离物 P 一川 由上
海农科院植保所哀贤溶先生惠赠 。
5 病毒外壳蛋白亚基分子量测定 采用 S DS 一聚丙稀酞胺凝胶电泳法 。 标准蛋白为` ! ,科院上海生化所产品 ,分
子量分别为 :磷酸化酶 B ( P h us p l[ o r y l` B ) 9 4 k o ,牛血清白蛋白 ( A l b u n 劝, 1 ) 6 7 k D ,肌动蛋白 ( A e t i f l ) d 3 k D , 碳酸醉酶
( C冶r比、 se 劫b y d r` ) 30 k D 和烟草花叶病毒夕l、壳蛋白 ( T 入W 、 r p r o : e i . 1 ) 17 . s kD 。
本文于 1 99 3年 6 月 8 日收到 . 9 月 2 7 日修回
第 3 期 周雪平等 :豆科植物上分离的黄瓜花叶病毒(c M v )五个分离物的比较研究 2 3 3
6 病毒粒体迁移率比较 采用琼脂糖水平平板电泳 ,胶浓度为 0 . 8 % ,电泳缓冲液为 T BE ( 0 . 09 m ol / L rT ist
0
.
09 、 lL/ 硼酸 、 Zm orn l/ L E D T )A . 取提纯病毒 1 5以 (月m s/ 时 )加入各孔后 50 mA 稳流电泳数小时 , 计算迁移距
离 。
7 病毒核酸的提取及电泳 纯化的病毒 40 卿 (刁m s /间 )加入 10 伽 1 p H g . o 的 。. 1、 l/ L 甘氨酸 (内含 0 . 05 nor l/
L Na cl
、
0
.
ol lno l/ L Na
Z E D T A 和 2 % S璐 ) , 37 ℃孵育 10 分钟 ,速冷至 月℃ ,用饱和酚和氯仿依次抽提后乙醇沉
淀 ,抽干后溶于 5。以去离子水 ,进行琼脂糖水平平板电泳 ,胶浓度为 1 . 2% .
表 1 CM v 各分离物在寄主植物上的反应及症状
aT 比 1 S y n 一区 o ms 众l d u o 以」妇一 idf f e er r一t P切 、 t 3详又 l伪 by 石v e CM V 蜘匕吻
植物
P la n t
症状
S , n 1 Pro m
C M V P Z C M V P, C M V l l B CM V B (垫d V R H
豆科 蚕豆 F。 不斌目 浏 /Br c比 /价 一 / N L 一 / N L 一 / N L
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~
觅豆 F翻夕 J 卿冲 ,` 白 M /伪 I M /伪 l 一 / N L 一 / N L 一 / N L
豌豆 矛、 曲 ” 及岌公。 n泪 / vc m M /vc 一 / N L 一 / N L 一 / N L
菜豆 才、 峨议翻 浏 g` , 耐 /比 I M /浇 1 一 / N L 一 / N L 一 / N L赤豆 矛伪“ 饿泊胡 山 , ` r . m M / o n湖 /o m M / o M / o M /o
绿豆 产么 “ 1血 , 州 口明 一 / N L 一 / N L 一 / N L 一 / N L 一 / N L
扁豆 Iu `如` , `斌“ M / (、 巴 M / o M / Y s . N L M / Y s . N L M / Y S . N L
大豆 翻梦` 护 ~
. 一 /一 一 / 一 一 /一 一 /一 一 /一
琴科 昆诺葵 C . 切~ 一 / N L 一 / N L 一 / N L 一 / N L 一 / N L。 c on 环以山~ 览芭要 `
. 。 `。 ` 韧应尸 一 / N L 一 / N L 一 / N L 一 / N L 一 / N L
甜菜 “ 勿 。匆 犷。 一 / N L 一 / N L 一 / N L 一 / N L 一 / N L
菠菜 `户。 , 、 : 山甲 。翔 u n 1M / o n 1M / o n 1 M / o n 1M / o n 1M / o
菊科 。 m娜 iat c 一百日菊 二勺幻四 城叨 。 M / o M / o M / O M / O M / o
葫芦科 黄瓜 凸` 胡公 汕。 mM / o n侧 / o M / o M / O M / o
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e u r b i at 幽 丝瓜 细方 . C户以` 刀 M / Y S M / YS M / Y S M / Y S M / Y S
览科 扣伐比 an tha ~ 干 日红 队川 z护叭
” 必人幽刃 0 0/ 0 0/ 0 0/ O0/ 0 0/
十字花科 rC u以社 er ac 青菜 产介 “ , ` 刀 吸细 “~ 一 /一 一 /一 一 /一 一 /一 一 /一番杏科 A j z“ ,~ 番杏 , , 扔脚如 二脚叨 一 / Y s 一 / Y s 一 / Y s 一 / Y s 一 / Y s茄科 oS 纽 an ~ 番茄 I乎甲
宁胡切` ` , ,月八功“ 刀 n 飞M / n l价 F N /价 刚 /。 F N , s t / cr F N , s t / e r
辣椒 伪尹叨妙刀 ` , ~ M / N L M / N L M / N L M / N L M / N L普通烟 入`“ `阳 `去~ n
1
M / o M /o M /o M /o M / o
二生烟 N . 应办。 朋一 ` 口几 ,胡刁 m M / o M / o M /O M / O M / o
心叫烟 N . 妙廿~ m M / 0 M
.
cr 0/ M
. 。 0/ M . 。 /O M , 。 / v N
矮辛牛 I憾。 四 州r 汹如 n 1M / o M / o M / o M / o M / o
大千生 入加目卜刁 州少嫩山 , n 1M / o M / o M / o M / o M / o
蔓陀罗 八凶仍】 减乃叨
~
M (/ 、 I M /浇 I M /伪 I M /汽 I M /你 I
伞 J衫花科 青芹菜 彻。翻 护 。动 , n、 M / o n 1M / o n 1 M / o mM / o 。 IM / o
U n l比 1迁 e份 e
注 : 系统叶症状 /接种叶症状 ; Br : 褐色环斑 ; 。 l : 褪绿点 ; (丫 :皱缩 ; 刚 : 蔗叶 ; NL :坏死斑 ; M : 花叶 ; m。 : 轻微皱缩 ; m M :
轻花叶 ; tS ;矮化 . v c : 脉明 . VN : 脉坏死 . Y S : 黄斑 , 一 : 不浸染 ; o : 无症带毒
N o t e : s y s t e n妞e s y n l p t o n二 / l o c O I s y : 11p r o n扮 ; 一k : b r o w , u : 、 g r妇飞岁闪 r ; (、 l : e址 or o r i e 一。 一。 ,。 ; 价 : e r u 。以 e ; F N : 士e r ,、 l“ ; N L : r、 c r o t i e 一e
5 1“ 15 ; M : m `义“ u e ` n l价 : n ul d 。 妇I kl e ` n l M : n五l d n 一~
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: s t u 一 t ; V e : v e i r一 e l口 d r z g ` V N : v e Lr l : I c r肥治 ; Y S : y e l l o w s po t s 各一 : rl o
妇 l f ct i o n ; 0 : s y m p t阴 11樱
第 3期 周雪平等 :豆科植物上分离的黄瓜花叶病毒 (c M v )五个分离物的比较研究 2 3 3
6 病毒粒体迁移率比较 采用琼脂糖水平平板电泳 ,胶浓度为 0 . 8 % ,电泳缓冲液为 T BE ( 0 . 09 m ol / L rT ist
0
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09 、 lL/ 硼酸 、 Zm orn l/ L E D T )A . 取提纯病毒 1 5以 (月m s/ 时 )加入各孔后 50 mA 稳流电泳数小时 , 计算迁移距
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7 病毒核酸的提取及电泳 纯化的病毒 40 卿 (刁m s /间 )加入 10 伽 1 p H g . o 的 。. 1、 l/ L 甘氨酸 (内含 0 . 05 nor l/
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淀 ,抽干后溶于 5。以去离子水 ,进行琼脂糖水平平板电泳 ,胶浓度为 1 . 2% .
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6 病毒粒体迁移率比较 采用琼脂糖水平平板电泳 ,胶浓度为 0 . 8 % ,电泳缓冲液为 T BE ( 0 . 09 m ol / L rT ist
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注 : 系统叶症状 /接种叶症状 ; Br : 褐色环斑 ; 。 l : 褪绿点 ; (丫 :皱缩 ; 刚 : 蔗叶 ; NL :坏死斑 ; M : 花叶 ; m。 : 轻微皱缩 ; m M :
轻花叶 ; tS ;矮化 . v c : 脉明 . VN : 脉坏死 . Y S : 黄斑 , 一 : 不浸染 ; o : 无症带毒
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第 3期 周雪平等 :豆科植物上分离的黄瓜花叶病毒 (c M v )五个分离物的比较研究 2 3 3
6 病毒粒体迁移率比较 采用琼脂糖水平平板电泳 ,胶浓度为 0 . 8 % ,电泳缓冲液为 T BE ( 0 . 09 m ol / L rT ist
0
.
09 、 lL/ 硼酸 、 Zm orn l/ L E D T )A . 取提纯病毒 1 5以 (月m s/ 时 )加入各孔后 50 mA 稳流电泳数小时 , 计算迁移距
离 。
7 病毒核酸的提取及电泳 纯化的病毒 40 卿 (刁m s /间 )加入 10 伽 1 p H g . o 的 。. 1、 l/ L 甘氨酸 (内含 0 . 05 nor l/
L Na cl
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.
ol lno l/ L Na
Z E D T A 和 2 % S璐 ) , 37 ℃孵育 10 分钟 ,速冷至 月℃ ,用饱和酚和氯仿依次抽提后乙醇沉
淀 ,抽干后溶于 5。以去离子水 ,进行琼脂糖水平平板电泳 ,胶浓度为 1 . 2% .
表 1 CM v 各分离物在寄主植物上的反应及症状
aT 比 1 S y n 一区 o ms 众l d u o 以」妇一 idf f e er r一t P切 、 t 3详又 l伪 by 石v e CM V 蜘匕吻
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3 28中 国 病 毒 学 第 9卷
参 考 文 献
l周益军 .淮祖芹 .非蚜虫传播的黄瓜花叶病毒菜豆株系的研究 .江苏农业学报 , 19 87 ; 3( l ) : 31 一 36
2 曹琦 , 淮祖芹 .许志刚 . 江苏省豌豆病寿病的病原鉴定 . 南京农业大学学报 . 1986 . 9 (3 ) : 125 一 1 26
3 温孚江 , 王清和 , 吴建华 ,等一个引起长虹豆黄花叶的病毒分离物生物学性质的研究 . 病毒学报 , 1 98 6 . 2( 3) : 27 8一 28 1
4 周国义 , 陈永置 · 南京地区扁豆病毒病主要毒原的鉴定 · 病毒学报 · 19 9 。 , 6 (3 ) : 2 3 一 2 38
5 许志刚 .王道文 .方中达 . 侵染蚕豆的黄瓜花叶病毒的分离和鉴定 . 南京农业大学学报 , 1 98 9 ; l 2( l ) ; 60 一 6
6 许泽永 ,张宗义 , 陈金香一种引起花生严重矮化的黄瓜花叶病毒的株系鉴定 . 植物病理学报 . 19 89 ; ] 9 (3 ) : 141 一 1 4
7 沈淑琳 , 王树琴 , 陈燕芳 . 大豆种传黄瓜花叶病毒的分离和鉴定 . 植物病理学报 . 19 84 ; 14 ( 4 ) : 2 51 一 2 52
3 裴美云 ,邱并生 , 谢浩 ,等 . 哈密瓜花叶病毒病的研究 I 、 病原学 . 植物病理学报 , 19 82 ; 12 (4 ) : 27 一 32
9 团 w ar d M L , (义旧详 r J 1 . P la n r vir us 山 t戊t i凹 u￡功 9 a n e w f j m of 心l idl c ted E L】S A . J V ir o l M e ht , 19 8 5 ; 11 : 3 09一 3 19
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14 刘焕庭 , 朱汉城 ,严敦余 , 等 . 侵染番茄的黄瓜花叶病毒( c MV) 株系特性的比较研究 . `卜国病毒学 , 19 9 2 ; 7( 2) ; 21 6一 2 23
C o m P a r a t i v e S t u d i e s o n F i v e C M V I s o l a t e s f r o m 玫g u m i n o u s C r o P s
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(八 “ 己曲 of 刀友义。 人,`趁戒价歹, Z加了。 n夕 月少吸`之止左。 ·叮 Z了、 。二威犷, aI , ,夕劝。 u 3 10 0 2 9 )
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C o m Par a t i
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C M V P
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K e y w o r d s L e g u n 飞i n o u s e r o P s , C u e u 工n be r n 飞osa
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