全 文 ：广西植物 Gu i五 ai a s( 4 ) : 3 89一3 96 . 1 9 85 3 9 8
几种植物组织及其原生质体过氧化物酶
同 工 酶 的 比 较 研 究
何 若 天
( 广西农学院林学系 )
摘要 对马尾松幼苗子叶和胚轴 、 甘蔗 、 小麦 、 烟草、 黄花菜等幼叶及其原生质体的过氧化物酶 同工
酶( O PI) 分别作比较研究 . 观察到凡经纤维素酶处理的各植物组织 O I P酶带数均多于未经纤维素酶处理的
组织的酶带数 ; 除个别例外 , 后者一般又比无壁原生质体的酶带数多 . 此种差异随植株生长年龄 而增大 ,
表明植物组织内大部分 P O I 主要存于质外体中 .
植物过氧化物酶 ( E . C . 1 . 1 1 . 1 . 7) 不仅存在于原生质体内 , 且有相当数量呈游离态或 以
离子键和共价键与胞壁结合 而存在于质 外 体 中 [ ’ , ` , 。 , ` “ , “ 1 。 B i r e e k a 和 M i l l e r ( 1 9 7 4 ) 及
B i r e e k a 和 C a t a l f a m o ( 1 9 7 5 ) 认为原生质体和胞壁的 过 氧 化 物 酶 同 工 酶 ( P O I ) 是 不 同
的 1 7 , 吕 1 。 本文报告我们对经过和未经过纤维素酶处理的组织及用酶法脱壁后的原生 质 体 的
P O I 比较研究的初步结果 。
材 料 与 方 法
一 、 植物材料
2
. 烟草 ( N i e o t i a n a t a b a e u m )在硬石加沙子中盆栽 , 每周加 1 一 2 次合成培养液 , 生
长在自然漫射光下 。 生长 2一 3 个月后 , 取上部第 2 一 3 片全伸展叶为材料 。
2
. 甘蔗 ( S a e e h a r u m o f f i e i n a r u m L . 品种为粤蔗 7 号 5 7 / 4 2 3 )为田间栽培 。 从株高达
0
。
5米开始分期取样 , 切取茎梢内层幼叶为材料 。
3
. 黄花菜 (H e m e r o e a l l i s f u l v a )盆栽在自然漫射光下 , 取幼叶为材料 。
4
. 小麦 ( T r it i o u m ae s t iv u m .L ) 播于硬石中盆栽 , 自然漫射光下萌发生长 , 苗高 14 厘
米左右取上部已充分伸展的第 l 片叶为材料 。
5
. 马尾松 ( iP n us m as s o in a n a L a m b . ) 播于硬石中盆栽 , 自然漫射光下萌发生长 , 当
出现子叶 、 苗高 5 一 6 厘米时 , 分别切取子叶和胚轴为材料 。
二 、 醉液处理和原生质体制备
(一 ) 酶液配制 : 1 或 3 %纤维素酶 (提取自绿色木霉 E A 3一87 , 含有果胶 酶 , 上 海 酒
精二厂产品 )溶于 O . 5( 或0 . 6) M甘露醇和 10 m g % C a CI : 混合溶 (含抗坏血酸和半胧氨酸 )中 ,
调 P H 为 5 。 6~ 5 . 8 。
(二 ) 酶液处理和原生质体的分离及 P O I 的提取
1
。 取烟草叶片冲洗干净后 , 用吸水纸吸干表面水分 , 切取半叶挂于室内令萎蔫 1 。 5一 2
小时 。 另半叶置冰箱内冷存供作不经酶处理的鲜组织测定用 。 把前者置70 %酒 精 中0 . 5分钟
我系覃伟同志参加部分技术工作 。
39。 广 西 植 物 乐卷
后转至 0. 1 % Hg C I 。溶液 (含约万分之一吐温 8 ) 0内灭菌1 5分钟 , 用无菌蒸馏水冲洗 4 ~ 5 遍 ,
于超净工作台中用无菌吸水纸吸干表面水分 。 用摄子撕去下表皮 , 切取已撕掉下表皮的叶肉
部分浸没于酶液中 。 酶液盛于 15 毫升三角瓶内 , 于 30 ℃中保温 3 一 4 小时 。
黄花菜幼叶作同样处理 , 一半冷存外 , 另一半横切成厚约 1毫米薄片 , 置酶液内 , 子相
同条件下保温 3 一 4 小时 。
2
, 甘蔗梢部被剥去外层老叶鞘 , 然后切去两端 , 选取只含柔软幼叶的 切 段 。 置 7 0 %酒
精中 1 分钟后 ,用无菌蒸馏水冲洗 3 一 4 遍 。 切去两端切 口 , 再剥掉外层较老叶片 , 露出内部
黄白色柔软叶段 。 用手术刀 纵切成三份 。 其中一份置冰箱内保存 , 供作不经处理的鲜组织测
定用 , 另一份经研碎后置酶液中保温酶解 , 第三份横切成厚约 l 毫米薄片 , 置 3仓℃ 中保温
1
,
5一 2 小时 。
3
. 每次从约 15 株小麦苗上选取上部第一片全仲展叶 , 马尾松则每次取即株 幼 苗。 如上
法表面灭菌后各分成三份 , 其 中一份冷存供鲜组织测定用 ; 另一份研碎后置酶液 内保 温 酶
解 ; 第三份横切或厚约0 . 5毫米薄片 , 置酶液内于 30 ℃中保温 3 一 4 小时 。
上述各植物组织保温酶解结束后 , 分别将其中供分离原生质体用的那份用细玻棒轻压碎
片促使原生质体尽量解离出来 。于 8 0r . p . m 转速下离心 3 一 5 分钟 , 去上清液 。 用 O , 5( 或爪 6)
M甘露醇和 I O 0 m g % C a C I : 混合液洗涤原生质沉淀物 , 再离心 3 一 5 分钟 。 如此反复洗涤二
遍 。 第三遍改用不含 C a C 12的O . 5( 或O . 6) M甘醇溶液洗一遍 。 最后将沉于离心管底的原生质
体团 (经显微镜捡查 , 98 % 以上为已去壁的球状原生质体 )悬浮于冷的 0 . 4一 0 . 5毫升含抗坏血
酸和半跳氨酸的 o . I M T r is 一H C I缓冲液 (P H 8 . 0) 中 , 用胶头吸管予以机械冲击 , 原生质体因
受渗透和机械冲击而迅速破碎 , 释出全部内含物 。 于 4 0 0 0r , p . 。 转速下离心巧分钟 , 吸 取上
清液加入 2 一 3 滴浓蔗糖液 , 作为原生质体 P O 工粗提取液 。
供作酶处理的那份材料经进一步磨碎成浆后 , 于 40 O0r . p . m 下离心 1 5分钟 , 上清液 作为
原生质体和存于质外体的全部 P O I 组份粗提取液 , 调 p H 为8 . 0 。
三 、 未经醉处理的组织过叙化柳醉的提取 按吴少柏 ( 1 9 7 9) 介绍的方法 I “ ` 。 分别将经
冰冻 2 一 4 小时后的植物的另一份材料切碎后 , 置预冷的研钵中加适量预冷的含蔗糖、 抗坏
血酸和半脱氨酸的 0 . IM T r i卜H CI 缓冲液 ( p H S . 0) , 研磨成匀 浆 。 于 4 0 00r . p . m 转速下离心
10 分钟 , 吸取上清液作适度稀释 , 以便使所得粗酶浓度尽量和原生质体提取液中葱浓接近 。
后者用双缩尿法检定 。
四 、 过氛化物醉同工醉谱的测定 按吴少柏 ( 1 9 79 ) 法 I “ 三, 用不连续盘状聚丙烯酸 胺雄
胶电泳法分离 P O I 。 分离胶浓度为 7 . 2% , 成层胶为 2 . 5% 。 每管 电流 1 。 7或 2 毫安。 用 抗 坏
血酸一联苯胺显色液显色 。
试 验 结 菜
一 、 马尾松幼苗子叶和胚轴组织及其游离像生质体的 P ol 阵谱 马尾松幼苗子 叶 和胚
轴组级及其无费灼游离原生质体内 P O 工酶潜均呈现明显差别 ( 图 l ) 。 经纤维素酶处 理 的子
叶组级 ( 图 1 : C 人 ) 计有 8 条酶带 , 未经酶处理的子什组织 ( 图 1 : C B )有 5 条酶带 , 缺 C : 一 。酶
带 , 而其无夔灼系主质体 (图 1 : C C ) 只具 3 条晦带 , 即 C 、 、 C 。和 C 7 。 经纤维素酶处理约胚轴
组识 ( 图 1 : P A )育 i0 条酶带 , 未经晦处理的胚袖组织 ( 图 :1 P B ) 有 8条酶带 , 缺 P 7和 P : 。侮带 ,
4期 何若天 :几种植物组织及其原生质休过氧化物酶同工酶的比较研究
其无壁的原生质体 (图1 :PC ) 酶谱与
来经酶处理者相同 , 唯显色稍弱 。
二 、 小会苗叶组奴及其游离原生
成体的 PO I . 份 经纤维素酶处理的
小麦幼苗叶组织 (图 2 : A )有 9条酶带 ,
而未经酶处理的叶组织 ( 图2 : B ) 及其
无壁 原生质体 (图2 : C )均只有 4 条酶
带 , 后二者谱酶完全相同 , 均缺 t ` 。
等酶带 。
三 、 甘旅梢部幼叶组织及其游离
康生质体的 PO . 晚姗 在甘蔗不同生
长期取样 , 所得幼叶组织的 P O I酶谱
很不相同 。 9 月27 日取样的 , 经过和
未经过纤维素酶处 理 的 叶 组 织 ( 图
:
A
: 和 B : ) 均有 3 条酶带 。 唯无壁的
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(子叶〕 (胚轴 )
O
。
2 5 图 1 马尾松幼苗子叶和胚轴组织及其游离
原生质体内过氧化物酶同工酶谱
C人和 P A一经纤维素酶处理的组织 ,C B和 P B一奋 未经纤维素酶处理的组织 ,
CC和 P C ~ . ~ 今 无壁的原生质体。
E 19
.
1 P e r o x i d a s e i s o z y rn e p a t t e r n s i n
d o n a n d P l u m u l 、 r a x i s t i s s u e s
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PA一 d i g e s t e d b了 e e l l u l a s : ;C B , P B一 n o t d i g e s t e d b y e e l l o l a s e ;C C . P C . . 口小 i s o l a t e d p r o t o p l a s t s
图 2 小麦幼苗叶组织及其游离原
生质体内过氧化酶同工酶谱
人 一~令 经纤维素酶处理后的组织 ,
B
. .
e 补 未纤经维素酶处理的组织 ,
C 无壁的原生质体 。
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.
2 P e r o x i d a s e i
s o z y m e p a t t e r n s
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.
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. ~ .~ 卜 d i g e s t〔 d b y e e l lu l a s e ;
B一 n o t d i g e s t e d b了 e e l lu l a s e :
9
. , , 令 i s o l a t` d p r o t o p l a s t s
原生质体 ( 图 3 , C : ) 只有 1 条酶带 , 缺 S : 和 S 。酶带 。
1 月 1 4 日取样的各处理的酶带增多 , 彼此呈现较大差
别 。 经纤维素酶处理的叶组织 (3 : A : )有 6 条酶带 , 未
经酶处理者 ( 3B : )有 5 条酶带 , 缺 S 。酶带 , 而其无壁
原生质体 (图3 : C : )只有 S , 一 : 3条酶带 。 12 月 4 日取样
时 , 酶带数增加更多 。 经纤维素酶处理的叶组织 (图 :3
A : ) 9 条酶带 , 未经酶处理者 (图3 : B : )有 7 条 酶带 ,
缺 S , 和 g 。 , 而无壁原生质体 ( 图:3 C 3 )只有 4 条酶带 。
可见 , S 、 , S : 和 5 3酶带先出现 , 其余迁移较快的酶
带是后产生的。
5卷
t净S忿 570
、函 i勿。匕带.
西 植 物
暇国 . . . 口 一
曰. . . ! .口脚
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班 翌 阅. 臼
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口翻 . . 口
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. 门口
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图 3 不同生长期的甘蔗梢部幼叶组织及其游离原生质体内过氧化物酶同工酶谱
A,
、
A :
、
A : 一 经纤维素酶处理后的组织 ,
B :
、
B :
、
B
: 一 未经纤维素酶处理的组织 ,
C 、
、
C
: 、 C , 一 已脱壁的原生质体 。
P e o x i d a s e i s o z y m e P a t t e r n s i n t h e y o u n g l e a f t i s s 仁 e s a 班d t五e i r i砰 l a t e d
p r o t o p l a s t s o f S u g a r
一 e a n e a t d i f f e r e n t g r o w t h P五a s e .
A i
,
A Z
,
A 3 一 d i g e s t e d b了 e e l i u la s e ; B l , B Z , B 3 一 n o t d i g e : 亡e d b了 e e l王“ I扭朋里
C l
,
C Z
,
C 3 一 i s o l a t o d p r o t o p l a s t s
四 、 烟草和黄花菜叶组叙及其游离原 生 质休 的p OI 醉带 烟草叶和黄花莱幼叶未经纤
维素酶处理的组织 P O I 酶带均比其无壁原生质体的酶带多 ( 图 4 和 6 ) 。 其中烟草叶组织 ( 图
:4 )B 具 9 条酶带 , 唯 1 : 一 。 等带不太明显 , 而其无壁原生质体 (图 4: C )只有 n 。 、 厂场和二 . 3 条
酶带 。 黄花菜叶组织 ( 图 : S B ) 有 7条酶带 , 其无壁原生 质 体 (图 : S C ) 亦只有 3 条酶 带 (五2 ,
h
: 和 h ` ) 。
讨 论
1
。 按 iB r e o ka 和 M il le r ( 1 9 7 4 ) 的看法 , 经纤维素酶处理后的组织 , 可将与胞壁 结 合
( 包括以离子键和共价键结合 ) 的 P O I 分离出来 ,而未经酶处理的鲜组织提取物只含象生质体
P O I工了 l 。 我们试验结果表明 , 除马尾松幼苗的胚轴和小麦幼苗叶组织的新鲜组织提取 物 与
其 无 壁 原 生质体的 P O I 相同外 , 其余所测材料均有明显差异 。 一般是经纤维素酶处 理 后
的组织 P O I 酶带数多于未经酶处理的组织 , 后者又比无壁原生质体的多 。 这表现细驹 内有
一部分 P 0 1存于质外体 , 而共质体内一般所含 P O I 较 少 。 考虑到我们处理组织和分离原生
质体用的纤维素酶制剂很不纯 , 可能混有一些外来 P O I 。 但经多次电泳检查均未见有可见的
酶带 , 不存在外来干扰 。 对分离的原生质体进行三次洗涤 , 残存的纤维素酶和从胞壁和释出
的过氧化物酶均可全部清除 , 所得原生质体 P O I 基本上属于共质体的 。
戮 r c改 a 和 C at al fa m o ( 1 9 7 5 ) 用他们的方法测得烟草幼茎髓部原生质体过氧化物酶只
4 期 何若夭 : 几种植物组织及其原生质体过氧化物酶同工酶的比较研究
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图 4 烟草叶组织及其游离原生质体内过
氧的物酶同工酶谱
图 5
B一今 未经纤维素酶处理的组织 ,
C
. .~ ~ 卜 无壁的原生质体。
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。
4 P e r o x i d a s e i s o z y m e p a t t e r n s i n t h e E i g
.
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t o p l a s t s o f t o b a e e o
.
B 一 d i g e s t e d b了 c e l l u l a s e ;
C 一 i s o l a t e d p r o t o p l a s t s
黄花菜幼叶组织及其游离原生质体
过氧物酶同工酶谱
B一 未经纤素酶处理的组织 ,C . . - 争 无壁的原生质体。
P e r o x i d a s e i s o z y m e P a t t e r n s i n t h e
y o o n g l e a f t i s s u e s a n d t五e i r i s o l a -
t e d p r o t o p l a s t s o f d a y l i l v
.
B 一 d i g e s t e d b了 e e l l u l a s e ;
C 一 i s o l a t e d p r o t o p l a s t s
占细胞过氧化物酶总活性的 10 % , 胞壁内占90 % 【. 1。 胡萝 卜根原生质体过氧化物酶活 性只
占细胞过氧化物酶总活性的 5 % [ “ l 。 我们所得的 P O I 比较结果亦可助证 。 但他们未 见原生
质体内和细胞壁的酶带有实质性差异 。 主要原因是他们没有把原生质体分离出来单独测定 ,
而仅把未经纤维素酶处理的组织提取物代表原生质体组分 , 这就难免可能有部分胞壁的可溶
性组分包括在内 。 我们的结果表明测定无壁原生质体的 PO I才能真正代表原生质体 (或共质
体 )的 P O I 组分 。
2
。 不少试验证明植物的 P O I 具有明显的组织多型现象 〔 3 · ’ 。 l 。 尤其在植物生长 发育过
程中 , 其 P O I酶谱会发生很大变化 【` 自` 5 1。 本试验从甘蔗不同生长期取样所测结果 亦 可 助
证 。 不论是原生质体或完整组织 内 P O I 酶带数均随生长进程而增多 。
3
.
B ir ce k a 和 M川 er ( 1 9 7 4 ) 认为原生质体 内 P O I大都呈游离态而不是与膜结 合 的 ,
细胞质膜对 P O I 是高度可透的 1 7 1。 因此 , 胞壁中的 P O I显然是从原生质体内释放出来的 。
胞壁和那么多的同工酶是在原生质体 内转录后直接释放出来的原始形式抑是转录后的原始形
式经次生修饰 [ ` “ 1或与细胞内的不同酚化合物发生结合而形成的不同复合物 [ ` 吕】而出现的膺
品 ? 因为这些变化均会改变同工酶的 R二值 。 而留于原生质体内的 P O I 是否为翻译 后 的 原
始形式 ? 均值得进一步阐明 。
4
, 由于 P O I多型现象的存在及原车质体与具壁细胞的 PO I有较大差异 , 那么 育 种 工
广 西 植 物 5卷
作者常用 PO I 变化看作不同基因活动的标志就很值得商榷 。 倘不考虑 多 型现象 , 只从常用
P O I
`提取方法来看 , 所得提取物到底能代表那部分 F O I组分 ? 以共价键与胞壁结合 的 P O I
是不易释离出来的 。 因此所得 P O I 没有包括这些组分在内 , 如果胞壁 P O I 组分亦能代表基
因活动的标志 , 所得结果岂非很不可靠 ! 倘若只有原生质体内 P 0 1组分才是基因活动的原始
形式 , 其余均属次生修饰或人为膺品 , 那么用一般提取法所得 P O I 制备物就不一定能代表原
生质体内的 P O I 组分 。 故我们认为在没有弄清各酶带的基因位点之前 , 以 P O I作为不同基
因活动的生化指标未免有点冒险 。
5
。 有关胞壁中 P O I 的生理功能已有一些研究 , 汰为它与胞壁木质化有 密 切 关系 蔚` 。 ,
, 念” 。 l , 它可能是木质素形成的媒介 t ` ” 1 , 在木质素聚合中起催化作用 「。 , 。 它还能催化体内
I A A 的氧化 ￡” l , 从而在胞壁生长 、 分化中起重要调节作用 〔` 7 1 。 丁宝莲等 (1 98 2 ) 观察到
烟草叶片质外体中过氧化物酶活性随叶片老化而增强 迈’ 全。 我们也观察到油茶幼苗 P O I酶带
数随组织老化而增多 , 组织愈老 , 靠近阳极的酶带出现得愈多 [ ` lo 本试验所见甘蔗 生 育期
愈晚的幼叶亦是迁移较快的近阳极酶带出现得愈多 , 这意味着近阳极的酶带可能与植株和组
织老化有密切关系 。 这些事实是否意味着过氧化物酶调节细胞生长 、 分化的作用机理与胞壁
变化有直接关系 ? 即过氧化物酶通过调控胞壁形成 、 增厚和木质化等速度 与程度从币i稠按细
胞生长与分化进程 ? 这 尚待大量实验证明 。 为阐明有关机理 , 利用完整组织和无壁的原生质
体对比研究 , 尤其是追踪培养的原生质体再生胞壁过程中 P O I 的变化无疑是很有帮 助 的。
有关试验 , 我们仍在进行中。
参 考 文 献
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〔 3 〕 梅慧生 , 1蛇 ! : 植物同工酶研究的某些进展 , 植物生理学通讯 , ( 3 ) : l 一 7 。
〔 4 〕 何若天等 , 工, 8` : 汕茶幼苗生长早期过氧化物酶同工酶的多型现象及某些因子对其影响的研究 , 广西农学舒学
报 ` 1 ) : 1 0 3一 10 8。
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胜 I t : a 、 亡川 。 t盯 a l l o e a 更i z a t i o n o f t o m a t o C e l l w a l l p e : o x 王d a : e , . J . C e l l B j o l . 3 , : s a
〔 6 〕 A li卜。 r t , G , R a n je , a , R . e t B o u d e t , A . M , i , 7 7: o r g a o i z a t i o 。 : u b e e l u xa i r e d e s v o i e s 血 : 了红 t旋` 。
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〔 8卫 B i : 。 。 k a , H . o t C a t a l f a m o , J . L . 1 97 5 : C e l l 下 a i l a n d p r o t o p l a s t 15 0训 r o 笼 i d a s o s o f C 。执 l 。扭丫。 s
i 二 r e ja t i。 二 士。 。 。 t i o j盯 y a o d i o f e e t i o 二 , i t五 H e l仍 ”` 才几o s Po r “` , 衍。 夕 d :` , lP a o t P五` 10 1. 亏5:
6 0 7一6 1 0 .
〔。 1 D e Jo 皿 g , D ` W . x 9 6 7: A n i n v e s t i q a t i o n o f t h o r o l。 。 f p l a n t p , r o 叉 i d a s e i n e o l l 节缸 l d e v 。壬。 -
p m e n t b y 士h e h三s t o 。五e m i e a l 切 e t五o d , J , H i , t o c 五e皿 . a o d C y t o e五e几 . 1 5 : 3 3 5一 3 4 6.
红1 0〕 H a : k i n , J . M . o t o b s t , J . R . 1 9 7 3: L i g n i f i e a t i o n i且 t r e e , : i n d i c a t i o n o f o x e l u s iv 仑 p e r。笼 i d基鱿
p a r t i e i p a士i o n , S e i e n e e 1 80 : 2 9 6一 2 9 5 .
〔1 1〕 H i o n 扭 a 皿 , R . L , e t L a n g , J . 1 0 65 : Pe r o x i d a 、 e 。 a 于a l y z e d o x i d a t i o n o f i n d o l e 3一 a o e t i c 最。 i d ,
B i
o 。 五e m i , t r y 浮: 1 44一 1 5 5 .
〔 12 〕 L i p o t z , J . e t G a r r o , A . J . 1 9 6 5 : Io n i o . ff o e t s o n li g n if i e a t反。 n a n d p e r o 盆五d a s e i n t i , ,姐 e 。以 l比 r 。: ,
4期 何若夭 :几种植物组织及其原生质体过氧化物酶同工酶的比较研究 3 9 5
J
。
C e l l Bi o l
.
5 2 :1 09一1 1 6 .
〔1 3〕 M o o e r, T . 1 9 7 3: A n e x t r a e o l l u l a r 也 a e or 位 o l e e胜 l a r e o m p l e x f r o 瓜 t五e s u r f a c o o f 5 0 了b e a公 s u s伴 -
皿 s
i o
n e o l t “ r e s , P l a n t p五了5 10 1. 5 2 : 52 。一5 3 6 .
〔1 4〕 R i d g e , L . e t O s b o r n e . D . J . 1 9 70 : H y d r o x v p r o l云n e a 公 d 尹 r o x i d a s e s , i n e e l l , a l l s o f P ` s“ m
忍 a f`口“ 用 : er g u l a t i o n b了 e th y l e n e , J . E x p . B o t . 2 1 : 。4 5一住5 6 .
〔 1 5〕 S e a n d a l i o s , Jo 五n G . 1 0 7一: I s o z y m e s i n d e v e l o p m e n t a n d d i f f e r e n t i a t i o n , A . n . R e v . Pl a n t
p h y s i o l
.
2 5 : 2 2 5一2 5 8 .
〔 1 6〕 S i e g e l , 5 . M . 1 9 54 : S tu d i o s o n t h e b i o s y n t卜e s i s o f l i g n i n s , P h 了5 10 1. P l a n t . 7: 4 1一5 0 .
〔1 7〕 S i e g ; l , B . Z , e t G a l s t o n , A , W . 1 96 7 : T 五e i s o p e r o x i d a s e s o f P i s 。衍 。口 t i 口u 杭 , P l a n t p五了5 10 1.
4 2: 2 2 1一 2 2 6 -
〔 z幻 S r iv a s t a v a , 0 . P . e t v a n H u y s t e e , R . B . i , 7 7: In t e ar e t i o n s a口 o n g p h e n o l i e s a o d P e r o x i d a s e
i s o z y m e s
,
B o t
.
G
a z
.
1 3 8: 3 5 7一4 6 4 .
〔1幻 丫 a n H u y s t e e , R . B . e t G a i r n s , W . L . 1 9 80: A p p r a i s a l o f s t u d i e s o n i n d u e t i o . o f P e or x i d a s e
a n d a
s s o e i a t e d P o r p h y r i o m e t a b o l i s m
,
T h e B o t
,
R e 7 魂6: 42 9- 召4 6 .
C OM PARAT IVE S T U DIE S ON P E ROX IDAS E !SOZY ME PAT T E R NS
IN T H E T ISSU E S AND P RO T OP LAST S O F F !V E SP E C !E S
H e R a卜 t i a n
( D e P a r t m e n t o f F o r e s t G u a n g x i C o l l e g e o f A g r i e u l t u r e )
B y u s i n g p o l y e r y l a m i d e g e l e l e e t r o p h
o r e s i s m e t h o d
, p e r o x i d
a s e i s o z y m e
( P O I ) f
r o m t h e l e a f t i
s s u e s a n d p r o t o p l a s t s o f f i v e s P e e i e s
,
1
.
e
.
, e o t y l e d o n
a n d p lu m
u l a r a x i s o f m a s s o n 一p i n e ( P i n u s 二 a s s o n i a n a L a 二 b . ) a n d l e a v e s o f
w h
e a t ( T
r i t i e u m a e s t i v u m L
.
)
, s u g a r一 e a n e ( S a e e h a r o m o f f i e n a r u m )
,
t o b a e e o
( N i
e o t i a n a t a b a
e u m )
a n d d a y l i ly (H
e m e r o e a l l i s f u l v a ) ,
e r e o
b t a i
n e d:
PO I
o f e o t y l e d
o n t i s s u e s o f m a s s o n一 p i n e t h a t a r e d i g e s t e d a n d th a t a r e
n o t d i g e
s t e d b y e e l l u l a s e h a d 8
a n d 5 b
a n d s r e s p e e t i v e ly
,
b u t t h
e i r i s o l
a t e d
p r o t o p l
a s t : h
a d 3 b a n d s
.
P O I
o f p l
u m u l a r a x i s o f m a s s o n 一 p i n e t h a t a r e
d i g e s t e d b y
e e
l l
u l a s e h
a
d 1 0 b
a n d s
,
b u t t h e P O I p a t t
e r n s o f th
a t a r e n o t
d i g e s t e d b y
e e l l u l a s e a n d t h
e i r i s o l a t e d p r o t o p l
a s t s a r e i d e n t i e a l
a n d a l l h
a d
8 b a n d s
.
P O I
o
f l
e a
f t i
s s u e s o f w h
e a t s e e d l i n g t h
a t a r e d ig e s t e d e e l l u la s e h a d g
b
a n d s
,
b u t t h
e P O I P a t t e r n s o f t h a t a r e n o t d i g e s t e d b y e e l l
u l a s e a n d t五e i r
i s o l a t
e d p r o t o p l
s a t s a r e id e n t i e a l
a n d a l l h a d 4 b a n d s
.
P O I p
a t t e r n s o f v
o u n g l
e a f t i s s u e s o f s u g a r一 e a n e a t d i f f e r e n t g r o w t h
p h a s e a r e d i f f e r e n e e
.
P O I
o
f l
e a f t i s s u e s th a t a r e d i g
e s t e d a n d t h a t a
r e n o t
d i g e s t e d b y e e l l u l
a s e a l l h a d 5 b a n d s
,
b u t t h
e i r i s o l a t
e d p r o t o p l a s t s h
a d o n ly
4 b a o d s 0 0 S
e
P t
e m b e r t il e t w e n t了一 s e v e n t五, p o l o f l e , f t i s s ; e ; t h a 今 ; r。
3 96 广 西 植 物 6 卷
di g e, t e d a n d t h a t a r e n o t d i g e s t o d b y e e l l u l a o e h
a d 6 a n d 5 b a n d s r e : p母 e t i v e 互y ,
a n d t h e i r i , o l a t e d P r o t o P l a s t s h
a d 3 b a n d s o n N o v e m b e r t h e f o u r t e e n th
.
P O I
o f l e a f t i s s u e s t h a t a r e d i g e s t e d a n d t h a t a r e n o t d i g e s t e d b y e e l l u l各冬e h澳 d g
a n d 7 b a n d s r e s P e e t i v e ly
, a n d t h e i r i s o l a t e d P r o t o p l a s t s h a d 4 b a n d s o n
D e e e m b e r t h e f o u r t h
.
P O I o f l e a f t i s s u e s o f t o b a e e o t il a t a r o n o t d i g e s t e d b y e e l l牡 i a o e a n d
t h e i r i , o l a t e d p r o t o p l a s t s h a d 9 a n d 3 b a n d , : e s p 。 。 t i v e ly .
P O I o f y o u n g l e a f t i s s u e s o f d a y川了 t h a t a r e n o t d i g e o t e d b y c e l l牡 l a , e
a n d t h e i r i s o l a t e d p r o t o p l a s t s h a d 7 a n d 3 b a n d s r e s P e c t i v e l y
.
T h e a b o v e m e n t i o n e d r七s u l t , s h o w e d m o s t o f P O I w e r e l o e a t e d 的 t h e
a p o p l a s t
, a n d P O I i s o l a t e d f r o m n o n 一 e e l l w a l l p r o t o p l a s t s a r e o n l了 r e P r e s e n t
e o tn p o n e n t s o f P O I i
n t h e s y m P l a s t
,