全 文 ：收稿日期:2007-03-11基金项目:国家科技基础专项资金项目(2002DEA10006)作者简介:肖海峻(1966-),女 ,内蒙古武川人 ,副教授 ,博士 ,主要从事牧草种质资源研究。
利用 ISSR标记研究鹅观草属种质资源的遗传多样性
肖海峻1 , 2 ,徐　柱2 ,李临航2 ,马玉宝2 ,曹授俊1
(1.北京农业职业学院 ,北京　102442;2.中国农业科学院草原研究所 ,内蒙古 呼和浩特　010010)
　　摘要:为进一步了解鹅观草属种质资源的遗传背景和拓宽牧草育种的遗传基础 , 科学指导鹅观草属种质资源的
收集 、评价和利用 , 利用 ISSR(Inter simple sequence repeat marker)标记对鹅观草属 20 个种 , 6个变种 ,共 60份材料进行了
遗传多样性检测。结果发现 ,被测材料间 ISSR标记的多态性较高 , 在 20 个引物中 ,有 16 个引物可扩增出清晰且重复
性好的 DNA 片段 ,共产生 125 条 DNA 片段 ,其中 104 条具有多态性 , 多态性比率为 83.20%;每个引物可扩增出 6 ～ 10
条 DNA片段 ,平均 7.81 条 ,材料间遗传相似系数 GS 变幅为 0.188 ～ 0.879 , 平均值为0.375;聚类分析表明 ,在遗传相似
系数为 0.441的水平上 , 60份材料可以聚为5 类 , 属于同种 、同组 、同系的不同材料首先聚在一起 ,然后再与其他种的
材料聚在一起 ,此外 , 材料的聚类还表现出一定的地域性规律。
关键词:鹅观草;ISSR标记;种质资源;遗传多样性
中图分类号:S543.235.3　　文献标识码:A　　文章编号:1000-7091(2007)04-0146-05
Genetic Diversity of Roegneria Genera Studied by ISSR Markers
XIAO Hai-jun1 ,2 ,XU Zhu2 , LI Lin-hang2 ,MA Yu-bao2 ,CAO Shou-jun1
(1.Beijing Agriculture Vocational College ,Beijing　102442 ,China;
2.The Grassland Institute ,Chinese Academy of Agriculture Science ,Huhhot　010010 ,China)
Abstract:In order to acquire more information about genetic backgrounds on Roegneria and broaden genetic bases
for forage breeding , and give more exactly guide on Roegneria germplasm collection , evalution and utilization , genetic di-
versity of 60 accessions of Roegneria genera representing 20 species and 6 subspecies was evaluated using inter-simple se-
quence repeat(ISSR)markers in this paper.Twenty ISSR primers were used for the PCR amplification of genomic DNA
and 16 primers could produce clear and polymorphic bands.A total of 125 bands were amplified from 16 primers , of which
104 bands(83.20%)were polymorphic.6 to 10 polymorphic bands could be amplified from each primer ,with an average
7.81.The mean genetic similarity(GS)value based on ISSR markers among 60 accession of Roegneria genera was
0.375 , ranging from 0.188 to 0.879.Cluster analysis showed all materials could be classified into 5 groups , the different
accessions belongs to the same species could be clustered together at first , and then combined with other accessions , the
accessions from the same origin also could be classified into the same groups first.These results suggested that ISSR mark-
ers could be used as an effective molecular technique for forage germplasm diversity research and species identification.
Key words:Roegneria;ISSR marker;Germplasm resources;Genetic diversity
　　由于微卫星标记为共显性标记 ,具有丰富的多
态性 ,且重复性好 ,被认为是研究遗传关系的理想标
记之一。 ISSR标记(Inter simple sequence repeat mark-
er)的基本原理是利用一条包含简单重复序列并在
3′或 5′锚定的寡聚核苷酸引物 , 对微卫星之间的
DNA序列进行 PCR扩增 。与 RAPD相比 , ISSR标记
重复性好 ,产生的多态性更丰富;与 SSR相比 , ISSR
技术不需要预先知道基因组序列信息 ,因此大大减
少了多态性分析的预备工作;与AFLP 相比 , ISSR技
术具有程序简单 、快捷和成本较低的优点[ 1 , 2] 。目
前 , ISSR标记已广泛应用于玉米 、油菜 、小麦 、水稻
和大豆等许多作物的品种鉴定 、系统分类 、遗传多样
性检测 、基因定位和遗传图谱构建等研究中[ 3-9] 。
但应用 ISSR标记对鹅观草属植物进行遗传多样性
华北农学报·2007 , 22(4):146-150
研究还未见报道 。
鹅观草属(Roegneria C.Koch)是中国小麦族种
质资源的一个重要植物类群 ,主要分布在西北 、西南
和华北地区 ,青藏高原的东北部是鹅观草属类群分
布最为集中的地区[ 10～ 12] 。该属植物多为草原和草
甸的组成成分 ,饲用价值很高 ,是优良的牧草 ,其间
蕴藏着丰富的抗病 、抗寒 、耐旱 、耐碱及长穗 、多粒等
基因[ 13 ,14] ,是麦类作物及牧草品种改良的重要基因
资源 。中国的科学工作者很重视对小麦族种质资源
的异地保护 ,然而在小麦族遗传资源的收集和评价
中存在两个不容忽视的问题[ 15] ,一是在进行种质资
源收集时 ,由于不同植物种或种群的数量 、成熟性以
及生境的局限性 ,不能完全根据种质资源遗传多样
性的原理去取样 ,因此 ,收集的种子材料不能代表该
物种的所有生态类型和遗传变异类型 ,另一个是对
已经入基因库保存的小麦族种质资源的评价和鉴定
多沿用以前的形态或生化标记 ,对性状表现及控制
性状的基因尚未深入研究。目前 ,对鹅观草属植物
遗传多样性的研究多集中在形态学[ 16 , 17] 、细胞
学[ 18]和同功酶[ 19 ,20] 方面 , 在 DNA 水平上多采用
RAPD标记[ 21] ,本研究利用 ISSR标记对鹅观草属植
物进行遗传多样性检测 ,为进一步拓宽牧草育种的
遗传基础以及更好的指导种质资源的收集 、评价 、利
用提供科学依据 。
1　材料和方法
1.1　材料
本研究中鹅观草属采用狭义的概念 ,选择鹅观
草属植物分布较为集中的 10个省区 60份材料(表
1),其中包括 20个种 ,6个变种 ,试验材料由中国农
业科学院草原研究所提供(表 1)。
1.2　方法
1.2.1　DNA提取 每份材料取 10 ～ 15 个植株上
的新鲜叶片 ,在液氮冷冻下研磨成粉末状 ,然后随机
取1 ～ 2 g ,置于50 mL离心管中 ,加入 15 mL 65℃预
热的 2×CTAB 提取缓冲液(100 mmol/L Tris -HCL ,
pH 8.0;10 mmol/L EDTA;2%β-巯基乙醇 V/ V),
65℃水浴保温 1 ～ 2 h ,其间轻轻倒转数次 ,取出离心
管冷至室温 。加入等体积氯仿/异戊醇(24/1 , V/
V),混匀。冰浴 30 min后 ,3 500 r/min离心 15 min 。
取上清液加入等体积的异丙醇沉淀 DNA , 70%乙醇
冲洗 2 ～ 3次 , 95%乙醇清洗 1次 ,空气中干燥后用
TE(Tris-EDTA)溶解后 ,4℃冰箱中保存备用。
1.2.2　ISSR扩增　利用 2份来自内蒙古和新疆的
材料进行预备试验 ,从 20个 ISSR引物(上海生物工
表 1　供试材料的名称 、产地及生境
Tab.1　Varietis , origins and enviorments of Roegneria
materials in this study
编号
No.
种名　　
Name　　
产地　　
Producing area　　
生境
Habit
1 肃草 内蒙古兴安盟 山 脚
2 大肃草 内蒙古呼盟 农 田
3 大芒鹅观草 内蒙古兴安盟阿尔山 山 上
4 长颖鹅观草 内蒙古阿盟贺兰山南寺 山 坡
5 狭叶鹅观草 内蒙古阿盟贺兰山南寺 山 上
6 狭叶鹅观草 内蒙古阿盟贺兰山南寺 山 上
7 粗糙鹅观草 内蒙古阿盟贺兰山北寺 山 顶
8 中华鹅观草 内蒙古阿盟贺兰山北寺 山 坡
9 毛叶毛盘草 内蒙古卓资山 山 坡
10 缘毛鹅观草 内蒙古阿盟贺兰山北寺 山 坡
11 毛节缘毛草 内蒙古阿盟贺兰山北寺 山 坡
12 多杆鹅观草 内蒙古清水河县 公路边
13 五龙山鹅观草 内蒙古通辽科左后旗 山 坡
14 细穗鹅观草 山西省偏关 公路边
15 细穗鹅观草 山西省偏关 公路边
16 直穗鹅观草 山西省吉县 农 田
17 大芒鹅观草 山西省五台山佛母洞 山 上
18 百花山鹅观草 山西省五台山 山 上
19 直穗鹅观草 陕西省延安地区南尼湾 农 田
20 纤毛鹅观草 甘肃省西峰 树 林
21 百花山鹅观草 甘肃省西峰 树 林
22 垂穗鹅观草 甘肃省碌曲县 树 林
23 缘毛鹅观草 甘肃省碌曲县 树 林
24 大芒鹅观草 新疆伊犁州特克斯县 山地草甸草原
25 偏穗鹅观草 新疆伊犁州特克斯县 草 原
26 扭轴鹅观草 新疆伊犁州果子沟 沟谷
27 低株鹅观草 新疆泥勒克县乔尔玛 沟谷
28 大芒鹅观草 新疆伊犁州昭苏县 沟谷
29 偏穗鹅观草 新疆尼勒克县 河边
30 短柄鹅观草 新疆博力赛里木湖 山地草原
31 大芒鹅观草 新疆昭苏县 农 田
32 毛节缘毛草 四川潘松县 高山疏林
33 中华鹅观草 四川潘松县 高山密林
34 鹅观草 四川炉霍县 高山密林
35 鹅观草 四川茂县 高山疏林
36 普兰鹅观草 四川马尔康县 山坡
37 普兰鹅观草 四川红原县 高山草场
38 垂穗鹅观草 云南维西县 高山稀疏林
39 垂穗鹅观草 四川红原县 高山稀疏林
40 小颖鹅观草 四川松潘县 河边湿地
41 垂穗鹅观草 西藏江达县 高山山坡
42 垂穗鹅观草 西藏江达县 高山、疏林
43 垂穗鹅观草 西藏丁青 高山草甸
44 垂穗鹅观草 西藏拉萨市曼竹工卡县 高山草甸
45 小颖鹅观草 云南丽江 河边
46 垂穗鹅观草 西藏巴青县 高山草地
47 短柄鹅观草 四川马尔康县 高山草地
48 短柄鹅观草 青海湟源县 农田旁
49 低株鹅观草 西藏曲松县 山间
50 低株鹅观草 西藏曲松县 河谷
51 短柄鹅观草 西藏曲松县 路边
52 短柄鹅观草 四川甘孜州色达县 高山峡谷
53 短柄鹅观草 四川甘孜州色达县 路 边
54 扭轴鹅观草 西藏江达县 高山混交林
55 扭轴鹅观草 西藏江达县 高山草甸
56 短颖鹅观草 西藏丁青县 高山峡谷
57 短颖鹅观草 四川松潘县 高山峡谷
58 短颖鹅观草 云南中甸 沟　谷
59 毛叶鹅观草 西藏米林县 灌丛、路边
60 纤毛鹅观草 北京百望山 山 坡
4期 肖海峻等:利用 ISSR标记研究鹅观草属种质资源的遗传多样性 147　
程公司合成)中选取出 16个能获得清晰条带 ,反应
稳定的引物(表 2)进行下一步分析 。PCR扩增参照
Nagaoka等[ 21]的方法 。反应总体积 25μL ,其中包含
1 U Taq DNA 聚合酶(上海 Promega), 1×Buffer(10
mmol/L Tris-HCl , pH 8.3;50 mmol/L KCl;0.001%
gelatin),1.5 mmol/L MgCl2 ,dNTPs 各 0.2 mmol/L ,引
物0.2 μmol/L。上覆 25 μL 液体石蜡油后 ,按下列
程序进行扩增反应:94℃预变性 2 min ,每循环 94℃
变性 1 min ,50℃退火 1min ,72℃延伸 2 min ,共 45个
循环 ,完成最后 1个循环后 ,在72℃延伸 10 min。在
MJPTC-200PCR仪中进行扩增反应 ,以 1×TAE为
缓冲液 ,将扩增产物在含有 0.5 个/L 溴化乙锭的
2.0%琼脂糖凝胶电泳中以 5 V/cm的电压电泳进行
分离 ,在凝胶成像仪上观察记录。
表 2　用于鹅观草属种质资源 ISSR 标记的
引物序列及扩增结果
Tab.2　Sequence and amplification results of ISSR
引物
Primer
　　序列
　Sequence
总谱带条数
Number of
amplification
多态性条带数
Number of
polymorphic
bands
ISSR-1 5′-(GACA)4-3′ 7 6
ISSR-3 5′-(CA)8TA-3′ 6 4
ISSR-4 5′-(CA)8TC-3′ 7 7
ISSR-6 5′-(AC)8GA-3′ 9 5
ISSR-7 5′-(AC)8C-3′ 8 7
ISSR-8 5′-(AC)8T -3′ 7 5
ISSR-9 5′(TG)8TC-3′ 8 8
ISSR-10 5′-(GGAGA)3-3′ 9 7
ISSR-11 5′-(ATGATG)3-3′ 6 5
ISSR-12 5′-(TCC)5TG- 3′ 8 6
ISSR-13 5′-(AG)8GC-3′ 7 6
ISSR-14 5′-(AG)8T-3′ 8 7
ISSR-15 5′-(CT)8G-3′ 10 9
ISSR-16 5′-(TC)8C-3′ 8 7
ISSR-19 5′-(AC)8GT-3′ 9 8
ISSR-20 5′-(TC)8G-3′ 8 7
总数 Total 125 104
平均Average 7.81 6.50
1.2.3　数据处理　每个样品电泳条带按有无记录 ,
电泳条带存在时赋值为 1 ,否则赋值为 0。按Nei和
Li的方法计算材料间遗传相似系数(GS),计算公式
为:GS=2N ij和(N i +Nj),其中 N ij 为材料 i 和材
料j 共有的扩增片断数目。根据 GS 值按照不加权
成对群算术平均法(UPGMA)进行遗传相似性聚类 ,
统计分析在NTSYSpc(2.10)软件系统下进行 。
2　结果与分析
2.1　扩增产物的多态性
60份鹅观草属种质资源的 ISSR-PCR部分引物
的扩增结果见图 1。在所研究的 20个 ISSR引物中 ,
有 16个引物能产生清晰的谱带 ,从 ISSR扩增谱带
统计结果(表 2)来看 ,每个引物可扩增出 6 ～ 10 条
DNA片段 ,平均7.81条 , 16 个引物共产生 125条谱
带 ,其中 104条具有多态性 ,多态性比率为 83.20%,
这些结果说明 , ISSR 标记能够揭示材料间的多态
性。
材料编号同表 1, M代表 GeneRulerTM2 000 bp DNA Ladder Plus marker
Notes of 1-23 same as Tab.1 ,M Stands for GeneRulerTM2 000 bp DNA
Ladder Plus marker
图 1　ISSR-7 扩增产物电泳图谱
Fig.1　Amplification results of ISSR-7
2.2　遗传相似系数
利用 16个 ISSR引物产生的 125条DNA片段计
算供试材料间的遗传相似系数(GS),结果表明 ,60
份鹅观草属间的遗传相似系数 GS 值变化范围为
0.188～ 0.879 ,平均值为 0.375 ,表明鹅观草属间遗
传变异很丰富 。其中 ,来源于山西偏关的 2份细穗
鹅观草的遗传相似系数(0.879)最大 ,说明亲缘关系
最近 ,来源于新疆的扭轴鹅观草和来源于内蒙古的
长颖鹅观草之间的遗传相似系数(0.188)最小 ,表明
亲缘关系最远 ,遗传差异最大 。
2.3　聚类分析
统计结果显示 ,60份供试材料间遗传相似系数
为 0.188 ～ 0.879 ,表明所选材料间具有丰富的遗传
多样性 ,利用 16 个 ISSR引物能将这些材料完全分
开。根据材料间的遗传相似系数对 60份材料进行
聚类(图 2),从聚类图可以看出 ,在遗传相似系数为
0.441的水平上可分为 5类 ,第 Ⅰ类包括 21份材料 ,
可以分为 2个亚类 ,其中第1亚类的 12份材料全部
来源于内蒙古 ,材料13与其他材料之间亲缘关系较
远 ,第 2亚类中的 9 份材料来源于山西 、陕西和甘
肃 ,地理位置较近 ,其中材料 14和 15来源于山西偏
关县 ,合并成为 1份材料;在第 Ⅱ类群中 ,共包括 7
份材料 ,除材料38外 ,其余均来源于四川省;第 Ⅲ类
材料的产地为四川 、西藏和云南 ,包括 22份材料 ,在
聚类时出现交叉 ,可分为 3个亚组 ,虽然产地不同 ,
但这些材料都属于矮草系植物 ,包括普兰鹅观草 、垂
穗鹅观草 、低株鹅观草 、短颖鹅观草和短柄鹅观草;
第Ⅳ类群由9份来自新疆的材料组成;第Ⅴ类由材
料 4单独组成。因此 ,从聚类图可以得出两点 ,一个
148　 华　北　农　学　报 22卷
是属于同种 、同系 、同组的不同材料首先聚在一起 ,
然后再与其他系 、组的材料聚在一起 ,如上文所述的
第Ⅲ类材料中的第 3亚类 ,材料 47和 48 均为短柄
鹅观草 ,它们首先聚为一类 ,然后再与材料 46(垂穗
鹅观草)聚在一起 ,短柄鹅观草和垂穗鹅观草均属于
矮草系再聚在一起;另外一点表现为明显的地域规
律 ,即地理来源相同的材料首先聚在一起 ,如上文提
到的第Ⅰ类和第Ⅲ类材料 ,第 Ⅰ类中的第 1亚类 ,材
料全部来源于内蒙古 ,第 Ⅲ类材料来源于新疆。
图2　ISSR标记聚类图
Fig.2　Dendrogram of the genera Roegheriabased on ISSR markers
3　讨论与结论
3.1　鹅观草属不同材料间存在着丰富的多态性
对所收集材料中可能存在的遗传多样性进行评
估是有效地利用和保护种质资源的关键环节 ,分子
标记技术的发展将会对种质资源的评价起到极大的
推动作用 。ISSR标记具有程序简单 、操作快速 ,成
本低等优点 ,因而已被广泛的应用于植物遗传多样
性研究中 。侯永翠等[ 22]利用 RAMP 和 ISSR标记分
别对 60份大麦种质资源的遗传多样性进行了检测 ,
结果发现这两种标记都能揭示材料间较高的遗传多
样性 ,而且 ISSR标记的多态性又高于 RAMP 标记 。
张木清等[ 23]选用24个 ISSR引物分析我国 8省区的
30多个斑茅种质资源 ,发现我国斑茅具有丰富的遗
传多样性 ,同一地区的斑茅基本聚在一起 ,呈现出一
定的地域分布规律 。钱韦等[ 4]利用 ISSR标记技术
探讨了我国野生稻的遗传背景 , 12 个引物扩增出
122条 DNA片段 ,多态条带比率为 72.95%。尚海
英等[ 24]利用 ISSR技术分析黑麦属 4 个种 8个亚种
共16份材料的遗传多样性 , 7个引物扩增出 269条
谱带 ,其中 229条(占 85.1%)具有多态性 。本项研
究利用 16个 ISSR引物扩增出 125 条谱带 ,每个引
物可扩增出 6 ～ 10条 DNA片段 ,平均 7.81条 ,其中
104 条具有多态性 ,多态性比率为 83.20%,60份材
料相似系数为 0.188 ～ 0.879 ,平均为 0.375 ,这表明
在鹅观草属不同材料间存在着丰富的多态性。这种
多态性将为牧草种质资源异地保存 、鉴定 、适应性评
价以及生态型研究奠定可靠 、稳定的基因基础。
3.2　ISSR标记对于鉴定鹅观草属植物的科学价值
ISSR技术比 RFLP 、SSR、RAPD等技术更多地揭
示基因组中的多态性 ,是一种很好的 DNA 指纹标
记 ,因此 ,该技术在种质资源鉴定方面显示出比其他
方法更高的优越性 ,目前已广泛的应用在种质资源
的鉴定中 。杜金昆等[ 25]利用 11个 ISSR引物就将所
有供试的 47份小麦品种明显区分开来 ,并准确地确
定各个基因型之间的遗传差异和亲缘关系。Prevost
等[ 26]利用4个 ISSR引物即可对34个马铃薯品种进
行鉴别 ,其中有 2 个引物单独使用即可区分出所有
品种 ,4个引物中任何 2个引物组合 ,扩增结果也呈
现出品种特异性 ,并且全部检测工作可以在 9 h 内
完成 。本研究利用 16个引物可以将 60份材料完全
区分开 ,表明 ISSR标记是一种快速 、有效 、可以提供
4期 肖海峻等:利用 ISSR标记研究鹅观草属种质资源的遗传多样性 149　
有关基因组丰富信息的 DNA指纹技术 。在遗传相
似系数为 0.441的水平上 ,可对 60份材料进行不同
组 、系 、种的划分 ,这与形态学研究的结果一致 ,即在
DNA水平上 ,利用 ISSR标记技术对鹅观草属不同物
种进行聚类分析 ,对各物种划分的结果基本与依据
《中国植物志》检索表按形态学性状进行物种组 、系 、
种划分的结果相吻合 ,其次 ,聚类图还可揭示出材料
间的地理关系 ,来源于同一地区的材料其遗传差异
较小 ,亲缘关系较近 ,如在本研究中出现来源于同一
地区的不同种聚在一起的现象 ,这是由于鹅观草属
植物分布范围广 ,生境条件复杂 ,物种在长期适应环
境的过程中会出现某些性状趋同的现象 ,造成不同
物种性状间的交叉 ,因而对鹅观草属种及种下等级
的划分 ,要综合考虑形态学 、细胞学和分子生物学等
方面的资料 ,才能更加有效地解释它们的真实的系
统关系 ,这一结论与侯永翠等[ 22]在研究大麦种质资
源遗传多样性时得出的结论相同。这一研究结果对
种质资源的收集 、评价和保存具有重要的指导意义 。
此外 ,在本试验中发现 ,来源于山西省偏关县的 2份
细穗鹅观草遗传图谱完全相同 ,并且聚为一类 ,再次
证明 ISSR标记在种质鉴定中的有效性。
参考文献:
[ 1] 　McGregor C E , Lambert C A , Greyling M M , et al , A compar-
ative assessment of DNA fingerprinting techniques(RAPD , IS-
SR, AFLP and SSR)in tetraploid potato(Solanum tuberosum
L.)germplasm [ J] .Euphytica , 2000 , 113:135-144.
[ 2] 　高凤云 ,张　辉 ,斯钦正特尔.亚麻分子标记技术研究
进展[ J] .内蒙古农业科技 , 2006(2):30-31.
[ 3] 　肖海峻 , 孟利前 ,李玉冰.ISSR分子标记及其在植物遗
传育种中的应用[ J] .内蒙古农业科技 , 2006(4):31-
33.
[ 4] 　钱　韦 ,葛　颂 , 洪德元 ,等.采用 RAPD和 ISSR标记探
讨中国疣粒野生稻的遗传多样性[ J] .植物学报 , 2000 ,
42(7):741-750.
[ 5] 　Wolhf K , Zietkie Wicz E , Hofstra H , et al.Identification of
chry santhemum cultivars and stability of fingerprint patterns
[ J] .Theor Appli Genet , 1995 , 91:439-447.
[ 6] 　Joshi S P.Gupta V S , Aggarwal R K , et al.Genetic diversity
and phylogenetic relationship as revealed by inter simple se-
quence repeat polymorphism in the genus Oryza [ J] .Theor
Appl Genet , 2000 , 100:1311-1320.
[ 7] 　Kojima T , Nagaoka T , Noda K , et al.Genetic linkage map of
ISSR and RAPD markers in eikorn wheat in relation to that of
RFLP markers[ J] .Theor Appl Genet , 1998 , 96:37-45.
[ 8] 　周福平 ,孙黛珍 , 王曙光 ,等.六倍体小黑麦种质资源遗
传多样性分析[ J] .华北农学报 , 2006 , 21(6):33-36.
[ 9] 　郭光艳 ,李瑞芬 ,张敬原 , 等.利用 SSR鉴定普通小麦-
多枝赖草二体异附加系 Line24中外源染色体同源群的
归属[ J] .华北农学报 , 2004 , 19(4):14-17.
[ 10] 　耿以礼 ,陈守良.国产鹅观草属之订正[ J] .南京大学
学报 , 1963 , 3:1-92.
[ 11] 　郭本兆.中国植物志[ M] .第 9 卷 , 第 3 分册.北京:科
学出版社 , 1987 , 9(3):7-104.
[ 12] 　蔡联炳.中国鹅观草属的分类研究[ J] .植物分类学
报 , 1997 , 35(2):148-177.
[ 13] 　顾佳清.小麦赤霉病抗性遗传的研究[ J] .中国农业科
学 , 1983 , 20(6):61-64.
[ 14] 　翁益群 , 刘大钧.鹅观草与普通小麦属间杂种 F1 的形
态 、赤霉病抗性和细胞遗传学研究[ J] .中国农业科
学 , 1989 , 22(5):1-7.
[ 15] 　卢宝荣.小麦族遗传资源的多样性及其保护[ J] .生
物多样性 , 1995 , 3(2):63-68.
[ 16] 　蔡联炳.根据外部形态特征试论鹅观草属的亲缘演化
关系[ J] .西北植物学报 , 1988 , 18(4):606-612.
[ 17] 　杨瑞武 ,周永红 , 郑有良.披碱草属 , 鹅观草属何猬草
属模式种的形态学变异和酯酶同工酶分析[ J] .四川
农业大学学报 , 2000 , 18(4):291-295.
[ 18] 　卢宝荣 , 颜　济 ,杨俊良.鹅观草属三个种的染色体分
析与同工酶分析[ J] .云南植物研究 , 1988 , 10(3):261
-270.
[ 19] 　卢宝荣 , 颜　济 ,杨俊良.分布于日本和中国的鹅观草
及其杂种的形态学和细胞学研究[ J] .云南植物研究 ,
1990 , 12(3):237-246.
[ 20] 　周永红 , 郑有良.小麦特异种质资源研究[ M] .成都:
四川科学技术出版社 , 1999:111-135.
[ 21] 　周永红 , 杨俊良 , 郑有良 , 等.用 RAPD 分子标记探讨
鹅观草属的种间关系[ J] .植物学报 , 1999 , 41(10):
1076-1081.
[ 22] 　侯永翠 , 颜泽洪 ,兰秀锦 ,等.利用 RAMP 和 ISSR标记
分析大麦种质资源的遗传多样性[ J] .中国农业科学 ,
2005 , 38(12):2555-2565.
[ 23] 　张木清 ,洪　艺 , 李奇伟 , 等.中国斑茅种质资源分子
多态性分析[ J] .植物资源与环境学报 , 2004 , 13(1):1
-6.
[ 24] 　尚海英 , 郑有良 ,魏育明 , 等.应用 ISSR标记研究黑麦
草属植物遗传多样性[ J] , 西南农业学报 , 2004 , 17(3):
273-277.
[ 25] 　杜金昆 , 姚颖垠 , 倪中福 , 等.普通小麦 、斯卑尔脱小
麦 、密穗小麦和轮回选择后代材料 ISSR 分子标记遗
传差异研究[ J] .遗传学报 , 2002 , 29(5):445-452.
[ 26] 　Prevost A , Wilkinson J.A new system of comparing PCR
primers applied to ISSR fingerprinting of potato cultivars
[ J] .Theor Appl Genet , 1998 , 98:107.
150　 华　北　农　学　报 22卷