全 文 ：药物分析杂志 C h in J P h a mr A n a l 2 )0( 8 , 2 8 ( 7 ) 10 7 5 一
部分马兜铃科药材中马兜铃酸 A 的含量测定研究
周跃华 ’ ,周娟’ , 黄莎莎 , ,伍玉娥 2 , 王野 ’ , 杜晓曦’ , 路金才“
( 1
. 国家食品药品监督管理局药品审评中心 ,北京 10 00 38 ;2 . 四川省药品检验所 , 成都 6 or O36 ;
3
. 四川大学华西药学院 , 成都 61 0 04 1 ; 4 . 沈阳药科大学 ,沈阳 11 001 6)
摘要 目的 :在已有文献报道的基础上 , 通过比较研究进一步优化了实验条件 ,建立灵敏度高 、重现性好的马兜铃酸 A 含量测
定方法 ,并对部分马兜铃科马兜铃属 、细辛属的药材中马兜铃酸 A 的含量进行测定 。 方法 : 采用高效液相色谱法 。 色谱柱 :
K or m a s il C !: 柱 ( 4 . 6 m m x 2 00 m m , 5 林m ) ; 流动相 : 0 . 3% 碳酸钱 (用稀盐酸调 p H 至 7 . 5 ) 一 乙睛 ( 7 5 : 2 5 ) , 流速 : 1 m L · m in 一 ’ ;
检测波长 : 2 50 n m ;柱温 : 35 ℃ 。 结果 :马兜铃酸 A 进样量在 1 . 02 一 5 l i ng 范围内线性关系良好 , 回归方程为 : Y 二 5 . 7 34 x 10 , x
+l
.
23 9 xl 0
, , ; = 0
.
9 9 (
n 二 20 ) ;方法的回收率 ( n 二 18) 为 102 . 3% 。 结论 :建立的含量测定方法准确 、灵敏 ,专属性强 、 重现
性好 , 为含马兜铃酸 A 的药材及制剂的质量控制等研究 ,提供了可供借鉴的实验方法 ; 同时 ,检测结果也为相关马兜铃科药材
的合理使用提供了参考。
关键词 : 马兜铃酸 A ; 含量测定 ;高效液相色谱法
中图分类号 : gR l 7 文献标识码 : A 文章编号 : 0 254 一 179 3 ( 200 8 )0 7 一 107 5 一 06
R P 一 H P L C d e t e r m i n s t i o n o f a r i s t o l 0 C h i c a c i d A
A r i s t o l o c h i 8 C e a e C h i n e s e h e r b a l m e d i C i n e
I n S O l l e
z H O U Y u e 一 h u a , , Z H O U J u a n Z
,
H u A N G s h a 一 s h a 3 , w u P i 一 e Z
w A N G Y
e , , D u x i a o 一 x i , , L u Ji n 一 e a i 4
( 1
.
C e n t e
r
fo r D ur g E
v a lu a t i o n
,
S F D A
,
B e i j i
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,
(二h i n a :
2
.
In s t i t u t e of
r
D ru g C
o 贾l t or l 盯 S i e h u a n p or v i n e e , Ch e li gd u 6 10 0 3 6 , C h i n a :
3
.
W
e s t Ch i n a S e h o o l Of Ph a rm
a e y
,
S i e hu a n U n i v e r s i t y
,
C h e n g d u 6 10 0 4 1
,
C h i n a :
4
.
S e ho o l o f T r a d i t i o n a l C h i n e s e M a d i e a
,
S h e n y a n g Ph a n
a e e u 一i e a l U n i v e r s i ry , S h e n y a n g 1 10 0 16 , Ch i n a
A b s t r 8 C t
A e o n t e n t
o bj
e c t iv e : T o e s t a b l i s h t h e s e n s i t i v i ty a n d g o o d re p ro d u e i b i l i t y m e t h o d o f d e t e rm i
n a t i n g a r i s to l o e h i e a e id
a n d t o a n a l y z e t h e l e v e l s o f a r i s to l o e h i e a e id A i n s o m e A r i s to l o e h i a e e a e H e rb
s
.
M
e t h o d s : R P 一 H PL C
m e t h o d
0
.
3 %
、 V a S a d o p t e d
.
K r o m a s i l C
【: e o l u m n ( 4
.
6 m m x 2 0 0 m m
,
5 林m ) w a s u s e d a n d th e m o b i l e p h a s e ( o n s i s te d o f
a l l l l】10 n l U l l l
o f 1 m L
·
m i n
e a r b o n a t e (
a
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u s t e d t o p H 7
.
5 w i th d i l u t e h y d r o e h lo r i e a e id )
一 a e e t o n i t r i l e ( 7 5 : 2 5 ) a t a fl o w r a t e
hT
e U V 一 d e t e e t i o n w a v e l e n g t h w a s 2 5 0 n m a n d e o l u m n t e m p e r a t u r e w a s 3 5 ℃ . R e s u l t s : T h e l i n e -
a r ar n g e w a s l
.
0 2 一 5 1 1 n g a n d t h e r e g er s s i o n e q u a t i o n w a s y = 5
.
7 3 4 x l o
, X + l
.
2 3 9 x l o ,
, r = 0
.
9 9 9 9 (
n = 2 0 ) ;
t h e r e e o v e叮 ( n
a b l e
.
I t e a n b e
= 18 )
o f t h e m e th o d w a s 10 2
.
3%
.
C o n c l u s i o n : Th e
u s e d fo r th e q u a l i t y e o n t r o l o f a r i s to l o e h i e a e id A i n
m e t h o d
C h i n e s e
15 a e e u r a t e
, s e n s i ti v e
, s p e e iif e a n d s u i t
-
t r a d i t i o n a l m e d i e i n e ; T h e s e r e s u l t s a r e
h e lp fo l fo r t h e a p p l i e a t i o n o f s o m e A ir s t o l o e h i a e e a e H e r b s
K e y w o r d s : a r i s t o l o e h i e a e id A : a s s a y : H P LC
马兜铃酸 ( a r i s t o l o e h i C a e id )主要存在于马兜铃
科的马兜铃属 和细辛属植物中。 据不完全统计 , 中
国法定药材标准收载的马兜铃属中药材共有 巧 种 ,
细辛属 12 种 。 国家食品药品监督管理局在 2 0 03 年
4 月以国药监注 仁2 003 〕121 号文发布《关于取消关
木通药用标准的通知》 , 禁止关木通药材在市场上
流通 , 中成药处方中含有的关木通以木通替换 ; 2 0 04
年 8 月以国药监注 [ 20 04 」3 7 9 号文发布《关于加强
防己等 6 种药材及其制剂监督管理通知》 , 取消广
防己和青木香的药用标准 ,用防己 、 土木香分别替换
* 第一作者 T e ] : ( 0 10 ) 6 8 5 8 5 5 6 6 一 4 8 6 : E 一 m a i l : z h o u y h@ e d e . o嗒 e n
DOI : 10. 16155 /j . 0254 -1793. 2008. 07. 008
10 7 6 一 药物分析杂志 C h in J P h a rm A n a l 2 0 0 8 , 2 8 ( 7 )
广防己 、 青木香 , 同时规定含马兜铃 、 寻骨, 风 、 天仙
藤 、朱砂莲的中药制剂严格按处方药管理 , 目前除 了
国家明令禁止使用的关木通 、 ) “ 防己 、 青木香外 , 细
辛 、 马兜铃 、 天仙藤收载于中国药典 2 005 年版一部 ,
寻骨风收载于卫生部部标准 (中药材 )第一册 , 其余
品种收载于各地地方药材标准 , 作为地方习用药材
使用 。
含马兜铃酸的中药材大部分已有马兜铃酸含量
测定方法的文献报道 ,但较少对含量测定方法进行
全面系统的考察 。 目前文献报道的马兜铃酸含量测
定力一法 主要有 H IP ￡ 法 } ’ 一 ’ } 、 L c 一 M s 法 L6 1 、 T Lc s
法 一7 ’ 、 毛细管电泳法 【8川等 , 其中以 H P LC 法应用最
多 。 本研究以宜宾防己为代表药材 ,采用 H P L C 法 ,
以分离度 、 最低检测限及定量限为指标对流动相进
行 r 考察 ,对样品的前处理方法和条件进行了研究 ,
并按照中国药典 2 005 年版一部附录新增的 “ 中药质
量标准分析方法验证指导原则 ” , 进行了含量测定
方法学验证 ,以期建立具有较好检测灵敏度和重现
性的含量测定方法 。 此外 , 对部分药材进行了马兜
铃酸 A 的含量测定 , 以考察该方法的适用性 。
1 仪器 、试药及样品
W a te r s 5 15 高效液相色谱仪 , W a t e r s 2 4 8 7 紫外
检测器 , C h r ( , m s t a t i o n 2 0 0 0 色谱工作站 ;北京普析通
用仪器有 限责任公 司紫外可见分光光度仪 T U -
19 0 1
。
马兜铃酸 A 对照 品 (批号 1 10 7 4 6 一 2 0 0 2 0 4 ) 购
于中国药品生物制品检定所 , 马兜铃酸混合对照 品
(含马兜铃酸 A 27 % 、 马兜铃酸 B 65 % ) 购于美 国
51 GM A 公司 ;甲醇 、 乙睛为色谱纯 ,其他试剂均为分析
纯 ;宜宾防己采于 四川省宜宾地区琪县 ,经四川省食
品药品检验所主任药师黎跃成鉴定为马兜铃科 ( rA is -
t o l o e h i a e e a e ) 植 物 川 南 马 兜 铃 A isr t o l o e h i a a 。 -
t or sez
e人u a n ie a e h i e n e t c . Y . C h e n g 的干燥根 。 其他试
验样品分别来源于四川省食品药品检验所标本室 、 四
川大学华西药学院标本室 、 乐山市药品检验所标本
室 、 广西壮族自治区药品检验所 、荷花池中药材专、恤
市场等 。 试验用药材样品均经黎跃成主任药师鉴定 。
2 色谱条件
色谱 柱 : K r 〔)m a s i l C ; 8 ( 4 . 6 m m x 2 0 0 m m , 5
协m ) ;流动相 : 0 . 3% 碳酸钱溶液 (用稀盐酸调 p H 至
7
.
5 )
一 乙睛 ( 7 5 : 25 ) , 流速 : 1 m L · m i n 一 ’ ; 检测波
长 : 2 5 0 n m ;柱温 : 3 5 ℃ 。
3 溶液制备
3
.
1 马兜铃酸 A 对照 品溶液 精密称取马兜铃酸
A 对照 品适量 , 加 甲醇制成 10 林g · m L 一 ’ 的溶液 ,
即得 。
3
.
2 供试品溶液 取宜宾防己 , 粉碎 ,过 3 号筛 ,取
0
.
5 9
,精密称定 ,精密加人 I尹醇 一 11{酸 ( 9 8 : 2 ) 2 5 m L ,
称定重量 ,加热回流 120 m in ,放冷 , 一再称定重量 ,用甲
醇 一 甲酸 ( 9 8 : 2 )补足减失的垂量 ,摇匀 , 滤过 ,取续滤
液 , 6。汉 ) r · m i n 一 ’ 离心 5 m i 。 ,取 上清液 ,即得 。
4 实验条件的确定
4
.
1 色谱条件的确定
4
.
1
.
1 马兜铃酸 A 测定波长 的选择 取马兜铃酸
A 对照品适量 , 以乙睛 一 0 . 3% 碳酸钱溶液 (用稀盐
酸调 p H 至 7 . 5 ) ( 25 : 75 )制成一定浓度的对照 品溶
液 , 在 20 一 7 0 n m 波长范围内进行光谱扫描 , 分别
在 2 2 3 , 2 5 0 , 3 1 8 , 3 9 3 n m 波长处有吸收 ,其中 2 5 o n , n
为最大吸收波长 , 故选择 2 5 0 n m 作为马兜铃酸 A
的测定波长 。
4
.
1
.
2 流动相的筛选 对已有文献报道 的流动相进
行综合分析 ,选定 3 种应用较为 )一泛的流动相进行
比较试验 :①乙睛 一 0 . 05 m ol · L 一 ’ 磷酸二氢钠溶液
(用 l % 磷酸调 p H 至 3 . 0 ) ( 4 0 : 6 0 ) ; ②乙睛 一 0 . 3%
碳酸钱溶液 (用稀盐酸调 p H 至 7 . 5 ) ( 25 : 75 ;) ③甲
醇 一 水 一 醋酸 ( 7 :0 2:9 1 ) 。 采用马兜铃酸 A 对照 品
溶液对 3 种流动相 的检测 限 (信噪 比法 ) 、 定量 限
(信噪比法 )进行考察 , 采用 马兜铃酸混合对照品 甲
醇溶液 ( 20 林g · m L 一 ’ ) 对 3 种 流动相 中马兜铃酸
A
、 马 兜铃酸 B 的分离度进行考察 。 结果 , 流动相
① : 马兜铃酸 A 的检测限为 1 . 56 ng ,定量限为 5 . 2
n g
,马兜铃酸 A 、 马兜铃酸 B 的分离度为 5 . 7( 在样
品中马兜铃酸 A 与相邻峰的分离度为 2 . 7 ) ;流动相
② : 马兜铃酸 A 的检测限为 0 . i3 gn , 定量限为 1 . 04
gn
,马兜铃酸 A 、 马兜铃酸 B 的分离度为 8 . 2( 在样
品中马兜铃酸 A 与相邻峰的分离度为 1 . 7 ) ;流动相
③ : 马兜铃酸 A 的检测限为 1 . 02 gn , 定量限为 3 . 41
n g
,马兜铃酸 A 、 马兜铃酸 B 的分离度为 4 . 4( 在样
品中马兜铃酸 A 与相邻峰的分离度为 4 . 9 ) 。 最后
确定以乙睛 一 0 . 3% 碳酸铰溶液 (用稀盐酸调 p H 至
7
.
5 ) ( 2 5
: 7 5 )为流动相 。
4
.
2 样品前处理方法的确定
4
.
2
.
1 提取溶剂的考察 取宜宾防己 , 粉碎 , 过 3
号筛 ,取 0 . 5 9 ,精密称定 ,分别采用不同的溶剂「甲
醇 一 甲酸 ( 9 8 ` 2 ) 、 甲醇 一 10% 甲酸 ( 8 0 : 2 0 ) 、 甲醇 、
乙醇 、 三氯甲烷 一 甲醇 一 醋酸 ( 2 :0 5 : 1 ) 、 甲醇 一 水
( :7 3 )
、 二氯甲烷 一 甲醇 一 醋酸 ( 2 :0 5 : 1 ) 〕进行考
察 , 超声处理 6 0 m i n (功率 2 5 0 W , 频率 3 3 k H z ) , 按
药物分析杂志 C h in Jp h a rm A n a l 2 5 0 0, 25 ( 7 ) 1 07 7 一
“ 2 ” 项下色谱条件进行测 定 , 结果马兜铃酸 A 含量
( n = 2 )分别为 1 . 10 2 , 0 . 8 7 7 , 0 . 7 3 8 , 0 . 5 2 0 , 1 . 1 3 1 ,
1
.
06 2
,
0
.
63 3 m g
·
g
一 ’ 。 结果表明 , 以甲醇 一 甲酸
( 98
: 2 )
、 三氯甲烷 一 甲醇 一 醋酸 ( 2:0 5 : l) 为提取溶
剂的测定结果最高 , 故考察提取方法时 ,选择甲醇 -
甲酸 ( 98 : 2 )和三氯甲烷 一 甲醇 一 醋酸 ( 20 巧 : l) 同
时进行比较 。
4
.
2
.
2 提取方法的考察 取宜宾防己 , 粉碎 , 过 3
号筛 ,取 0 . 5 9 , 精密称定 ,按表 1 的提取溶剂及提取
方法进行提取 ,按 “ 2 ” 项下色谱条件进行测定 , 结果
(表 l) 表明 ,采用索式提取和加热回流 60 m in 的方
法测定结果无明显差异 ,超声处理 60 m in 的测定结
果偏低 , 甲醇 一 甲酸 ( 9 8 : 2 )和三氯甲烷 一 甲醇 一 醋
酸 ( 20 : 5 : )I 提取结果也无明显差异 。 考虑到三氯
甲烷毒性较大 ,最后选定以甲醇 一 甲酸 ( 9 8 : 2) 为提
取溶剂 ,采用加热回流的方法进行提取 。
表 1 不同提取方法的考察结果 《n = 2)
T a b 1 I n v e s it ga t i o n o n v a r io u s e x t r a c t i n g m e t h o d s
马兜铃酸 A含量 ( 。 r i , 一。 l。 。· 11 1。 。 。 i d A ( 。 n *e n t ) / m g · g 一 ]
提取方法
(
e x r la t t 一n g
m e Lh o d )
二抓甲烷 一 甲醇 一 醋酸 ( 2:0 :5 1)
「。 111. ) r( 〕几, r : n 一 : , ,。一h a , 10 1一 a 。二 t i (
a 、 、 i〔 l ( 2 0 : 5 : l )」
甲醇 一 甲酸 ( 9 :8 2)
[
: n e Lh a n o l 一 fo r: n ie
a 《 i毛l ( 98 : 2 ) 〕
索式提取 1 . 14 1 1 . 138
(
、 ` , rI , i一i一
t
、
x t r。 。· [ 1. , r、 )
加热回流 1 . 1 24 1 . 1 32
(卜, o一 比 fl u x i n g )
60 n i i l -
超声处卫}【 1 . 0 70 0 . 8 2 1
(
u l一ar s ` , n ,`
七,x t r a ( ` t i〔j n )
60 【n In
品溶液各 or 林 L ,按 “ 2 ” 项下色谱条件进行测定 , 以
对照品的进样浓度为横坐标 , 以对应的峰面积为纵
坐标 , 得出峰面积与进样量的线性关系 , 回归方程
为 :
Y = 5
.
7 3 4 x 10 , x + 1
.
2 3 9 x 10
, ; = 0
.
9 9 9 9 ( n = 2 0 )
线性范围为 1 . 0 2 一 5 1 1 n g o
5
.
2 重复性考察 取宜宾防己 ,粉碎 , 过 3 号筛 , 取
12 份 ,取样量在 0 . 25 一 0 . 75 9 范围内 , 按 “ 3 . 2 ” 项
下 的方法制备供试品溶液 , 按 “ 2 ” 项下色谱条件进
行测定 ,结果马兜取铃酸 A 含量 ( n = 12) 为 1 . or m g
·
g
一 ’ ,
R S D 为 1 . 6 % 。
5
.
3 重现性考察 取宜宾防己 , 在四川省药检所
中药室实验室 、 四川大学华西药学院实验室 和沈阳
医科大学实验室 ,分别按 “ 3 . 2 ” 项下 的方法制备供
试品溶液 , 按 “ 2 ” 项下色谱条件进行测定 。 结果马
兜取铃酸 A 含量分别为 1 . 10 , 1 . 13 , 1 . 06 m g · g 一 ’ ;
平均 l . l o m g · g 一 ’ , R s D 为 3 . 2% ( n = 3 ) 。
5
.
4 准确度考察 取已测含量 (含 量 1 . 10 m g ·
g
一 ’
)的宜宾防己样品约 0 . 25 9 , 18 份 , 平均分为 3
组 ,每组分别加人马兜铃酸 A 对照 品溶液适量 , 按
“
3
.
2
” 项下的方法制备供试溶液 , 按 “ 2 ” 项下色谱条
件进行测定 。 结果见表 2 ,平均加样回收率 ( n = 18)
为 10 2 . 3% 。
表 2 加样回收试验考察结果 ( n = 6)
T a b 2 I n v e s it g a it o n o n t h e er P e a t a b i li yt
加人 马兜铃酸 A 的以
(
a ( I《l e 。] ) / n l g
平均回收率
(
a v , 、 r a g , r ( 、 . ,v e 卿 ) / %
R S )I
/ 味
ǐ尹气气了…八、气乙勺、20 7225 900 . 30 18 103 . 510 0 . 110 3 . 2
4
.
2
.
3 提取时间的考察 取宜宾防己 , 粉碎 , 过 3
号筛 ,取约 0 . 5 9 , 精密称定 , 精密加人 甲醇 一 甲酸 .5 5 耐用性试验
( 98
: 2 ) 25 m L
, 分别在不 同提取 l讨间 ( 30 , 60 , 90 , .5 .5 1 稳定性考察 精密吸取马兜铃酸 A 对照 品
120
,
150
,
180 而 n )进行提取 ,按 “ 2 ’ ,项下色谱条件进 溶液 (浓度为 10 . 2 哪 · m L 一 ’ ) 10 林L 及供试品溶液
行测定 ,结果马兜铃酸 A 含量 ( 。 = 2) 分别为 1 . 01 1 , 5 林L ,分别在 O , 1 , 2 , 3 , 18 , 24 , 48 h , 按 “ 2 ” 项下色谱
1
.
08 0
,
1
.
12 3
,
1
.
13 4
,
1
.
13 7
,
l
.
140 gm
·
g
一 ’ 。 结果 条件进 行测 定 , , 计算 峰 面积 值 的 R SD 分别 为
表明 ,加热回流 90 一 18 0 m in , 测定结果没有明显的 0 . 87 % 和 0 . 9 % 。
差异 ,最后确定加热回流时间为 120 m in 。 5 . 5 . 2 流动相比例的考察 取同一宜宾防己供试
5 方法学验证 品溶液 , 在流动相 0 . 3% 碳酸钱溶液 (用稀盐酸调
5
.
1 线性范围的考察 精密称取马兜取铃酸 A 适 p H 至 7 . 5) 一 乙睛不同比列 ( 7:0 3 0 ; 7 5 : 25 ; 8:0 20)
量 ,加甲醇制成浓度为 0 . 10 2 , 0 . 2 04 , 0 . 307 , 0 . 4 09 , 时按 “ 2 ” 项下色谱条件进行测定 。 结果马兜铃酸 A
0
.
5 一l , 1 . 0 2 , 1 . 5 3 , 2 . 0 4 , 2 . 5 6 , 3 . 0 7 , 3 . 5 8 , 4 . 0 9 , 含量分别为 1 . 10 8 , 1 . 12 5 , 1 . 12 1 m g · g 一 ’ ; R SD 为
4
.
6 0
,
5
.
1 1
,
7
.
6 7
,
10
.
2
,
15
.
3
,
2 0
.
4
,
3 0
.
7
,
5 1
.
1
,
10 2 0
.
8 0% (
n = 3 )
。 结果表明 :该方法耐用性较好 。
哪 · m L 一 ’ 的系列对照品溶液 。 精密吸取上述对照 5 . 5 . 3 流动相中 p H 变化的考察 取同一宜宾防
1 07 8 一 药物分析杂志 C h i n J P h a r m A n al 200 8 , 2 8 ( 7 )
己供试品溶液 , 在流动相 0 . 3% 碳酸钱溶液 一 乙睛 溶液 ,分别采用不同色谱柱 [ Kr o m as il C I: ( 20 m m
( 7 5
: 2 5 )不同 p H ( 7 · 2 , 7 . 5 , 7 . 8 ) 时按 “ 2 ” 项下色谱 x 4 . 6 m m , 5 林m ) , D i e k m a C .: ( 2 0 0 m m x 4 . 6 m m ,
条件进行测定 ,结果马兜铃酸 A 含量分别为 1 . 0 8 0 , 5 林m ) , p h e n o m e n e x C I , ( 15 0 m m X 4 . 6 m m , 5
1
.
12 2
,
1
.
09 7 m g
·
g
一 ’ ; R SD 为 1 . 9% ( 。 = 3 ) 。 结果 卜m ) 」按 “ 2 ” 项下色谱条件进行测定 。 结果马兜铃
表明 : 该方法耐用性较好 。 酸 A 含量分别为 1 . 129 , 1 . 1 06 , 1 . 1 18 m g · g 一 ’ ;
5
.
5
.
4 碳酸铰溶液浓度的考察 取同一供试品溶 R SD 为 1 . 0 % ( n 二 3 ) 。 结果表 明 : 该方法耐 用性
液 , 在流动相碳酸钱 (用稀盐酸调 p H 至 7 . 5) 一 乙 较好 。
睛 ( 7 5 : 2 5 ) 的 碳 酸钱不 同浓 度 ( 0 . 25 % , 0 . 3% , 5 . 5 . 6 结论 根据 以上考察 的结果可知 , 该方法
0
.
3 5 % )时按 “ 2 ” 项下色谱条件进行测定 。 结果马 的耐用性较好 。
兜铃酸 A 含量分 别为 1 . 0 97 , 1 . 1 19 , 1 . 1 1 m g · 6 样品测定
g
一 ’ ; SR D 为 1 . 0 % ( 。 = 3 ) 。 结果表明 : 该方法耐用 取药材 ,按 ,’3 . 2” 项下 的方法制备供试品溶液 ,
性较好 。 按 “ 2’ 项下的色谱条件进行测定 , 按外标法以峰面
5
.
5
.
5 不同品牌色谱柱的考察 取同一供试品 积计算样品含量 ,结果见表 3 。
表 3 样品测定结果
T a b 3 eR
s u l st o f d e t e r m i n a it o n Of s a m P le s
拉丁学名
( aL 一in n a m e )
名称
(
n a m e )
样品号
(
s
o p l
e
N 。 )
收载标准
(
S ta ,1 .l a ,〔1 e o l l e o t )
药用部位
( m
e d i e a rn e n*
p o ir j o n s )
马兜铃酸 A含量
(
a ir s一o lo e h i ( a e id
A o o n 一e ” r ) / %
A r厉20 10〔 h i (乙
I了之。即乙n e n ` 乙人 F r a n ( J l
冕 J犷防己
( M
,a , , ;、 i「、9 Fa ,1周 i )
,了4ǎXé川057
淮通 ( H u a i to n g )
四川省 中药材标 准 ( is hc ua n
C川 d e D ur g S ta n dar d , 19 87 )
四川省中药材标 准 ( S ihc ua n
C r u d o D tu g s L
a n d a r( l
,
1 9 57 )
四川省 中药材标 准 ( is( h ua n
C r u d e D ur g s l
a n d a dr
,
19 57 )
四川省 中药 材标准 ( is (3h ua n
C r u d e D ur g S一a : l d训 , 19 87 )
四川省 中药 材标准 ( s ie h u a n
C r u ol e D几 9 S ta n (玉ar d , 一9 57 )
四川省 中药材标 准 ( iS ch ua n
C r u d e D ur g S r a n d a dr
,
19 87 )
四川省 中药材标准 ( is c hua n
C r u d e D nr g s 一a n d词 , 19 57 )
四川省 中药材标 准 ( iS hc u an
C r u d e D ru g s 一a n d a r o l , 一95 7 )
四川省 中药材标 准 ( S i c h u a n
C ru d
e D ru g S l
a n d a rd
,
19 87 )
四川省 中药材标准 ( iS ch ua n
C r u `l e D 二 9 S t a l l 。{ar d , 195 7 )
四川省 中药材标 准 ( is hc u an
C
r u d e D ru g S以 n d a rd , 一98 7 )
四川省 件, 药材标 准 ( S i e h u a n
C r u d e Dur g S t
a n d a dr
, 一95 7 )
四川省 中药材标 准 ( iS hc ua n
C ru d
e D ru g S l an d
a r d
,
1 98 7 )
C h i n e s e 根或块根 ( r〔 ,o L 。 , 。 , (》 t t u be r ) 0 . 27 8
C h i n e s e 根或块根 ( or o 。 。 r or o * 一u be r ) 0 . 25 8
C h i n e s e 根或块根 ( r o 。〕* o : or o : 一u be r ) 0 . 1 30
C h i n e s e 根或块根 ( r o o l o : 10 0 一 l u b e r )
C h i n e s e 藤茎 ( v i n o s一e r n )
C h i n e s e 膝茎 ( v i n e s te m )
C h i n e s e 藤茎 ( v i n e 。 Ie m ) 0 . 2 1 5
几r臼`“ 10 ￡h i a h e et
onr hyl
l a 广元防己
H e m s l
.
( G
u a n群 u a n Fa n引 i )
C h i n e s e 根或块根 ( r 。、。, 1 0 】 or o l t u h e r ) 0 . 2 86
C h i n e s e 根或块根 (。 oI ) 0 . 32 6
C h i n e s e 根或块根 ( or o一 o r or o t t u be r ) 0 . 156
C h i n e s e 根或块根 ( r( ) o一 o r or o * z u be r ) 0 . 4 5
C h ln e s e 根或块根 ( or o l 。 : or o , tu bo r ) 0 . 132
A心 to lo ch 记 a瀚 J八 ,5 2 . c h au n 优 a
C h i e n e 一 C . Y . C h e n g
宜宾防己
( Y ib i
n g F a n 目 i )
C h j n e s e 根或块根 ( or o一 。 r or o一 t u b e r ) 0 . 105
A rL’ 勿 2。 ` h她 de b以比 中国药典 2以〕5 年版一部 ( ChP . 20 5
V o l l )
果实 (加 i t ) 0 . 09 5
S i e b
.
e t Z u e e
马兜铃
( M
a
d
o u l i n g )
药物分析杂志 C hi n J P ha m rA a n l 2) 0( s, 28 ( 7 ) 一 107 9 一
续表
拉丁学名
( 肠一i n n a m e
名称 样品号
(
s a m pl e
N o
.
)
收载标准
(
s t an d
a r
d
e o l l e e 一)
药用部位
(
n l e d i(二a m e n *
P o r r i o : 1。 )
马兜铃酸 A 含量
(
a r i s to lo e h i o a e i d
A o o n t e n t ) / 肠
A用 t o lo c h i a 口1 0 1湍i m a
H a n e e
寻骨风
( X
u n g u fe n g )
四川省 中药材标准 x 9 87 增补版 ( 51-
e h u a n C h i n e s e C ur d
e D ur g S Lan d耐 S u p -
p l e m e n 一, 198 7 )
地 卜部分
(
a e ir a l p a rt )
0
.
0 05
卫生部部标准 ( 中药材 )第一册 ( D ru g
Sp e e iif e a *i o n p or m ul 罗t e d b y lh e M i n i s r口
Of P
u b li e H e al ht
,
P R
.
C h i n e s e C ur d
e
D o g
.
V o l 1
.
19 92 )
全草
( I
, e r l , )
0
.
0 07
Aisr
t o lo eh ia c i n n a b a ir n a
C
.
Y
.
C h e n g e 一 J
.
L
.
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u
A占 a ur m h e zeor
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des
朱砂莲
( Z h
u s h al i a n )
0
.
2 1 0
F r
.
S e h m一(11 v a r
m a n d s h
u r ie u m
( M ax im
.
) K i一即
北细辛
( B
e i X i x i n )
块根
(
r o o t )
全草
( h
e r
h )
0
. 《M闷
根及根茎
or o t an d ht i
z o m e )
0
.
00 3
A s a ur m
C
.
Y
.
C h e n g e -
C
.
5
.
Y a n g
苔叶细辛
( Sh
a o y e X ix i n )
四川省 中药材标 准 ( S i o h u a n C h i n e s e
C ur d
e D ur g S t an dadr
,
198 7 )
中国药典 2 0 5 年版一部 ( C h P . 2 0 5 .
V o l l )
中国药典 2 0 5 年版一部 ( c h P . 2 0 .5
V o l l )
四川省中药材标准 19 87 增补版 ( iS -
(三h u a n C h i n e s e C ru d e D ru g S t a n d a rd S u p
-
P l e ,n e n 一, 198 7 )
全草
( h
e
rb )
0
.
0 06
四川省 中药 材标 准增 补版 ( is hc u an
C h zn e s e C ru d e D r u g S一a n d a ld S u p p le -
m e n 一, 19 87 )
全草
( h
e
rb )
0
.
0 35
A s a ru m h im
a l a ic u m 0
.
04
H一〕o k
.
F
.
e t T卜o m s . e x
乃s a ru ln 却 u l i门君已似 e C . F
南坪细辛
( N
a n p i n g X l x i。 )
湘细辛
( X i
a n g X i石n )
山慈姑
( S h
a n e i g u )
四川省中药材标 冷( ( S i t h u a n C h i n e 、 e
C r u ` i e D ru g S t a o d a o l , 19 57 )
湖南省 L}, 药 材标 准 ( H u n a n C h l n e s e
(二ur 〔 10 D ur g s *a n dadr
, 一99 3 )
广 酉 中药 材标 准 ( G u a n邵 5 e h i n e s e
C r u d e D r u g S一a r一d a rd , 1 99 0 )
全草
( h
e r b )
A s a ru m
`鳍 z`遥a rlo i面
C
.
F
.
L i a n g
全草
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.
05 9
0 0 0 7
E 人
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B 三
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图 l 药材样品的 H P L C 图
F ig 1 HPL C e h lo m a to sla m
s o f s a m p l
e s
A
. 马兜铃酸 A 对照占.,: ( a r i s to lo e h i C a e id A : ef r e n e e s u b s ta n 、 e ) B . 冕
寸,防 己 ( l 号样品 ) ( M i a n n i n g F a n目 i , s a m p l e N o . l ) C . 厂一元防己 ( 2
号样品 ) ( c u a n 罗u a n F a n目 i , S a m p l e N o . 2 ) D . 荞 !` f细辛 ( 3 号样 .万产; )
( S h a o y e X i x i n
, s a m p le N o
.
3 ) E
. 北细辛 ( 19 号样品 ) ( B e s x i x i n ,
s a m p l e N o
.
19 ) F
. 淮通 ( 10 号样品 ) ( H u a i r o n g , s a m p l e N o . 10 ) G .
宜宾防己 ( 8 号样占{: ) ( Y ib i n F a n日 i , 、 a m p l e N o . 8 )
1
. 马兜铃酸 A ( a r i s t o lo e h i e a e i d A )
7 讨论
7
.
1 本研究采用 的宜宾防己为自行采集并经鉴定
的药材 , 马兜铃酸 A 含量相对较高 , 便于进行方法
学研究 ,故以宜宾防己为对象进行研究 。
7
.
2 本研究在查阅大量国内外文献资料的基础上 ,
以马兜铃酸 A 与马兜铃酸 B 的分离度 、 马兜铃酸 A
的检测限及定量限为评价指标 , 对 H P L C 法测定马
兜铃酸 A 常用的 3 种流动相进行了比较研究 , 研究
结果表明 ,流动相乙睛 一 0 . 3% 碳酸铰溶液 (用稀盐
酸调 p H 值至 7 . 5 ) ( 25 : 75 )的适应性较好 。
7
.
3 本研究对样品的前处理方法进行了较全面的
研究 ,在综合分析国 内外文献报道所采用提取溶剂
的基础上 , 选择 8 种提取溶剂进行比较研究 ;同时对
提取方法 、提取时间进行了考察 。 确定以 甲醇 一 甲
酸 ( 9 8 : 2 )为提取溶剂 , 加热回流提取 120 m in 为样
品的前处理方法 。 研究结果表明 : 三氯甲烷 一 甲醇
一 醋酸 ( 2:0 :5 1 ) 、 甲醇 一 水 ( 7 : 3) 的提取效率与甲
醇 一 甲酸 ( 9 8 : 2 )基本一致的 , 其他提取溶剂提取效
率相对较低 ,考虑到三氯 甲烷 一 甲醇 一 醋酸 ( 2 0 : 5
一 10 80 一 药物分析杂志 C h in J p h a : nI A n a l 2 0 08 , 28 ( 7 )
: l) 的毒性较大 , 甲醇 一水 ( 7 : 3) 提取的杂质相对较
多 , 故进行方法学研究时 ,采用 甲醇 一 甲酸 ( 98 : 2)
为提取溶剂 。
7
.
4 由于马兜铃科植物所含成分各不相同 ,保留时
间与马兜铃酸 A 相同的色谱峰可能有杂质干扰 ,故
在对不同种属 的植物进行含量测定研究时 , 需对色
谱峰的专属性进行研究 。 本试验中采用二极管阵列
检测器对马兜铃酸 A 对照品 及样品中相同保 留时
间的色谱峰进行 了光谱扫描 , 确认二者的一致性 。
此外 ,还采用 L C 一 M S 法对宜宾防己样品中与马兜
铃酸 A 对照品相同保留时间的色谱峰进行了考察 ,
确认为马兜铃酸 A 。
7
.
5 样品含量测定结果表明 , 马兜铃属药材中马兜
铃酸 A 的含量高于细辛属药材 ; 以根及根茎人药的
马兜铃属药材中马兜铃酸 A 含量较高 ;同一植物来
源 、 不同的药用部位 ,可能都含有马兜铃酸 A , 但其
分布情况有待进一步研究 。
7
.
6 马兜铃酸的急性毒性 、 长期毒性实验研究结果
以及含有马兜铃酸的药品临床研究结果显示 , 马兜
铃酸叮引起肾脏毒性 。 此次测定用样品均为国家现
行中药材标准或地力一中药材标准收载的品种 , 马兜
铃属 7 种药材 、细辛属 5 种药材均检测出马兜铃酸
A
, 由于历史原因 , 药材标准中均未规定 马兜铃酸的
控制指标 , 该研究为建立药材中马兜铃酸 A 的含量
测定方法及制定合理限度 、 规定合理的药材使用剂
量和时间 ,提供了实验基础和参考数据 。
7
.
7 本试验首次对湘细辛 A . 二 ul igen n se c
.
F
.
iL
-
a n g
、苔叶细辛 A . e a u d ig e le ll u m C . Y . C h e n g e t C . 5 .
Y a n g
、
r妇慈姑 A . s鳍i t t a r io id e s C . F . L i a n g 3 种已有法
定药材标准的马兜铃科药材进行 了马兜铃酸 A 的
含量测定 , 为合理用药以及相关品种的安全评价提
供了参考依据 。 并再次证实马兜铃属植物中含有马
兜铃酸的普遍性 。 除了中成药生产中应尽量避免使
用含马兜铃酸的药材 , 在地方习用药材的使用中也
应充分关注含马兜铃酸药材的使用状况 , 尽量改用
功效相同的其他药材代替 , 以避免不良反应 的发生 。
7
.
8 梁于马兜铃酸 B 在 马兜铃科的药材中相对较
低或不含 ,故此次试验未测定马兜铃酸 B 的含量 。
参考文献
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青木香和细辛中马兜铃酸 A 的含量 ) . cl ian 了hC in aM te r Me d( ` }`
l ,q
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t
,药杂志 ) , 2 0 0 4 , 2 9 ( 5 ) : 4 0 8
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Ch
e n g X L
,
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s a n ( l `l飞e i了
一
(
·
(一rl l rn e rt · i a l l 〕 or d u c t s b y H p L C -
p A D 一 E S I/ M S
.
p l`皿。 。 `h e z n A , , a l , 2 0 0 5 , 16 : 2 2 2
7 F U G u i 一 x i a r , g (付水卜吞 ) , Z H A O S h i 一 万, j n g ( 赵 Jl t萍 ) , C H E N W e n
(陈文 ) , e z a l r l · C S d e * e r m i n at i o n o f a r i s t o lo (、 h i (· a e id i n oL n gd a n x i e -
ga
n
[,i ls (薄层扫描法测定龙胆泻肝丸中 `当兜铃酸的含景 ) . hC in
J P h
a rm An a l (药物分析杂志 ) , 2 0 0 2 , 2 2 ( 3 ) : 17 -
8 L I W
,
C o n g S X
,
W e n l) W
, e t a l
.
R a P id d e t e mr i
n a t i o n o f a it s t o l o e h i e
a e i d 1 a n d 11 i n A
r
i s t o l o e h i a p l a n r s for m d ife er
n t r e g i o n s b y月一 e y e l o -
d e x t r i n 一 m o d i if e d e即i l la仃 z o n e e l e e t or p }l o r e s i s , J Ch or o a t o g r 滩 ,
2 0() 4
,
104 9
: 2 1 1
9 H s i e h S C
,
H u a n g M F
,
L i n B S
,
et a l
.
D e 之e r m i n a t i〔 ,n o f a ir s t o lo c h i e a e id
i n Ch i n e s
e
h e r b a l m e d i e i n
e
b y e a P i l l a仃 e l e e t or p ho r e s i s w i th l a s e r -
i n d u e e d fl u o er
s e e , I c e d
e t e e t i o n
.
j Ch or m a tog
r A , 2 0 06
,
110 5
:
12 7
(本文于 2 0 0 7 左l三3 ) J 2 6 11收到 )