全 文 ：南京农业大学学报 2014，37(1) :60 － 67 http:/ /nauxb． njau． edu． cn
Journal of Nanjing Agricultural University doi:
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10． 7685 / j． issn． 1000 － 2030． 2014． 01． 011
收稿日期:2013 － 04 － 28
基金项目:国家自然科学基金项目(30970081，30800156)
作者简介:张红侠，硕士研究生。* 通信作者:王志伟，教授，从事植物微生物学研究，E-mail:zwwang@ njau． edu． cn。
张红侠，纪燕玲，陆涛，等．不含花序的禾本科植物样品的鉴定［J］．南京农业大学学报，2014，37(1) :60 － 67
不含花序的禾本科植物样品的鉴定
张红侠，纪燕玲，陆涛，王永，刘宝虎，王志伟*
(南京农业大学生命科学学院，江苏 南京 210095)
摘要:2011 年 9 月，从内蒙古科尔沁地区采集长有真菌子座、却不长花序的禾本科植物 26 株。提取植物基因组 DNA，合成
引物扩增植物叶绿体 DNA中的 trnT-trnL基因间间隔序列。结果表明:内蒙古带子座植物样品与羊草的目的片段长度均为
740 bp，仅 4 个碱基的差异;而新麦草属的 Psathyrostachys fragilis目的片段长度为 1 750 bp，与带子座样品及羊草的碱基差
异较大。系统发育树分析表明带子座植物样品与羊草聚为一支，自展值 95%。利用组织透明法观察植物的叶表皮微形态，
内蒙古带子座植物样品同样与羊草叶表皮微形态一致。结合植物学形态特征、trnT-trnL 基因片段分析及叶表皮微形态，内
蒙古带子座禾本科植物被鉴定为羊草(Leymus chinensis Trin．)。野外条件下，具有宿主特异性的内生真菌能在羊草植株上
形成子座，国际上还未见相关报道，也显示羊草植株的特异性。
关键词:羊草;鉴定;子座;trnT-trnL;组织透明
中图分类号:Q949 文献标志码:A 文章编号:1000 － 2030(2014)01 － 0060 － 08
Identification of grass without inflorescence collected from
Korqin，Inner Mongolia
ZHANG Hongxia，JI Yanling，LU Tao，WANG Yong，LIU Baohu，WANG Zhiwei*
(College of Life Sciences，Nanjing Agricultural University，Nanjing 210095，China)
Abstract:On September 2011，26 infertile grasses with stromata were collected from Korqin，Inner Mongolia． A PCＲ-based approach
was used to identify these plants． Alignment analysis conducted by DNAssist indicated sequences of these plants and Leymus chinen-
sis were 740 bp，with only four bases different in coverage，while sequence of Psathyrostachys fragilis was 1 750 bp with distinct base
difference． Phylogenetic tree based on trnT-trnL intergenic space from cpDNA region revealed that these plants clustered with Leymus
chinensis with a bootstrap value of 95% ． Leaf epidermis micromorphology was observed by tissue clearing method． Micromorphology of
these plants was also consistent with Leymus chinensis，different from others． In combination of trnT-trnL intergenic space analysis and
leaf epidermis，plants with stromata collected from Korqin were identified as Leymus chinensis Trin． The host specific fungal endo-
phyte which develops stromata on Leymus chinensis in nature had no record． This could be another criterion to distinguish Leymus
chinensis plants from other plants．
Key words:Leymus chinensis;identification;stromata;trnT-trnL;tissue clearing
禾本科植物的鉴定基本上依据花序的形态学特征进行。此外，叶、花粉粒、花瓣等的微观形态特征，植
物体内合成的化合物，染色体核型分析及基因扩增产物的差异等也作为植物的分类依据［1 － 4］。鉴定过程
中，常依据植物材料的不同而选用不同的方法［5 － 6］。然而，在植物样品有限的情况下，难以获得满足植物
分类所需要的花序。在全部分蘖都形成子座的情况下，植株也无法抽穗，不能形成花序。在无法获取有效
花序的情况下，则需要借助其他鉴定方法进行鉴定［7］。
植物在亿万年的进化过程中形成了自身固有的形态结构特征，这不仅表现在根、茎、叶、花、果实上，同
样也表现在微观形态如叶表皮细胞微形态上［8］。叶表皮上有气孔及气孔副卫细胞，气孔及气孔副卫细胞
控制气孔的开关，调节植物体内的离子浓度及 CO2 浓度，影响植物体内渗透压及光合作用，因此植物体内
气孔器类型比较稳定，其在植物分类学及系统学中发挥重要作用。禾本科植物叶片上气孔排列比较规则，
受基因控制，具有种属特异性，不同种间叶表皮结构存在差异，可作为分类依据［9 － 10］。由于组织透明过程
中，试剂处理对植物组织会产生一定影响，并且该方法对经验存在依赖性，因此鉴定时需参考其他方法。
DNA作为生物体主要的遗传物质，不同的遗传物质决定不同的生物体，因此，DNA条码已作为一种重
要的分类工具［11］。AFLP、ＲAPD等遗传多样性分析方法被用于植物分类，然而这种方法的可靠性和重复
第 1 期 张红侠，等:不含花序的禾本科植物样品的鉴定
性受到许多因素的影响［12］。核糖体 ITS 是较早发展起来，用于分类研究的一种方法，然而在一些情况下
ITS并不能明确区分不同属种。Taberlet等［13］于 1991 年针对叶绿体非编码区设计了 3 对引物，扩增植物
叶绿体 DNA(chloroplast DNA，简称 cpDNA)的非编码区，这些引物能用于区分不同植物，进而反映植物的
进化关系。随后，不同学者相继依据叶绿体 DNA的编码区及非编码区设计引物，对植物进行鉴定。叶绿
体作为植物中特有的细胞器，目前已受到越来越多的关注，其中的 DNA 序列成为植物中较有效的分类依
据。但是，依据叶绿体 DNA的系统发育学分析来进行植物学分类依然还有一些缺陷，部分亲缘关系较近
的种间分辨率不高［14］。依据以上不足，我们将基于植物微形态的分类以及基于叶绿体 DNA 的系统发育
学分析的植物学分类结合起来，用于鉴定植物的分类地位。
本课题组于 2011 年 9 月从内蒙古科尔沁地区采集带子座禾本科植株，由于其不含花序，难以用常规
方法进行植物鉴定。本研究采用基因片段分析及组织透明法对该植物样品进行鉴定，确定其分类学地位。
1 材料与方法
1． 1 植物样品及其基本形态特征
2011 年 9 月，从内蒙古科尔沁地区发现了带子座禾本科植物。这些样品均处于植株成熟后的凋亡
期，因此没有发现完整植株，也没有采集到花序。同时采集植株周围的一种禾本科植物样品。样品迅速运
回实验室，4 ℃冰箱保存。
选取实验室保存的鹅观草(Ｒoegneria kamoji(Ohwi)Keng and Chen)、披碱草(Elymus sp．)、臭草(Meli-
ca scabrosa Trin．)、早熟禾(Poa sp．)、大雀麦(Bromus magnus Keng)及苇状羊茅(Lolium arundinaceum
(Schreb．)Darbysh． = Festuca arundinacea Schreber)等植株作为对照(表 1)。植物样品茎秆及叶片的外部
形态特征，参照文献［15］进行观察和记录。
表 1 供试植物样品来源
Table 1 Plants used in this study and their sources
类群
Taxon
采集时间
Sample time
采集地点
Site
叶表皮微形态分析
Micromorphological analysis
系统发育分析
Phylogenetic analysis
苇状羊茅 Lolium arundinaceum 2011 － 06 江苏南京 Nanjing，Jiangsu + ND
大雀麦 Bromus magnus 2011 － 06 安徽黄山 Huangshan，Anhui + ND
早熟禾 Poa sp． 2011 － 05 江苏南京 Nanjing，Jiangsu ND +
臭草 Melica scabrosa 2011 － 06 北京紫竹院 Zizhu Park，Beijing ND +
鹅观草 Ｒoegneria kamoji 2011 － 06 江苏南京 Nanjing，Jiangsu + +
披碱草 Elymus sp． 2011 － 09 内蒙古科尔沁 Korqin，Inner Mongolia ND +
羊草 Leymus chinensis(生长在待鉴定植
物周围 Plants nearby stromatal plants)
2011 － 09 内蒙古科尔沁 Korqin，Inner Mongolia + +
内蒙古带子座植物 Stromatal plants 2011 － 09 内蒙古科尔沁 Korqin，Inner Mongolia + +
注:+:用于分析 Applied in analysis;ND:未测定 Not done
1． 2 植物叶绿体 cpDNA中的 trnT-trnL序列分析
用 IQS法［16］提取内蒙古带子座禾本科植物及其周围生长的一种植物、鹅观草、臭草、披碱草及早熟禾
等禾本科植物样品的基因组 DNA。合成扩增 cpDNA中的 trnT-trnL基因间间隔序列所用的引物［17］。将含
目的条带的 PCＲ扩增产物委托上海美吉生物医药科技有限公司纯化及测序。所得序列在 GenBank 数据
库中进行 BLAST比对，确定为需要的序列。根据比对结果，选取早熟禾亚族各属中的代表性种的 trnT-
trnL基因间间隔序列，利用 DNAssist 2． 2 与 Clustalx 1． 81 对序列进行多重比对，采用 MEGA 4． 0 软件［18］以
最大简约法构建系统发育树。
1． 3 植物叶表皮微形态特征的显微观察
取内蒙古带子座植物及其周围生长的一种植物、鹅观草、大雀麦及苇状羊茅等植物的叶片，95%乙醇
处理去除植物叶片的叶绿素，75%乳酸处理直至叶片完全透明［19］。取出组织透明后的植物叶片，分别撕
取上、下叶表皮，制作水浸片，在光学显微镜下观察长细胞、短细胞、硅细胞、气孔副卫细胞及表皮毛等植物
叶表皮微形态特征，并进行比较分析。
2 结果与分析
2． 1 植物样品的采集及形态观察
2011 年 9 月，从内蒙古科尔沁地区共采集带子座植株 26 株(图 1)。植株茎秆直立，无毛;叶片线形，
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南 京 农 业 大 学 学 报 第 37 卷
扁平展开，长 7 ～ 15 cm，宽 3 ～ 7 mm，边缘粗糙;叶舌纸质，顶端具齿裂;叶鞘平滑。
依据文献［15］，将采集自带子座植物周边的禾本科植物鉴定为羊草(Leymus chinensis) (图 1 － B)。同
时选取实验室已有植物样品披碱草(2 株)、鹅观草(1 株)、臭草(1 株)、大雀麦(1 株)、苇状羊茅(1 株)及
早熟禾(1 株)用于后续试验(图 1)。
图 1 供试植物形态学特征
Fig． 1 Morphological characteristics of the tested plants
A:内蒙古带子座植物 Stromatal plants;B:羊草 L． chinensis;C:披碱草 Elymus sp．;D:鹅观草 Ｒ． kamoji;
E:臭草 M． scabrosa;F:大雀麦 B． magnus;G:苇状羊茅 Lo． arundinaceum;H:早熟禾 Poa sp．
2． 2 植物目的基因片段的比对及系统发育学分析
用 IQS法成功提取植物样品的总 DNA，提取的植物总 DNA条带明亮，足以用于后续试验。
采用引物扩增 13 株宿主植物样品的 trnT-trnL 基因间间隔序列［17］，不同宿主植物扩增片段长度为
630 ～ 870 bp。对测得的序列在 GenBank数据库中进行 BLAST比对，所得结果表明序列均为目的片段，其
中内蒙古带子座植物样品的目的片段与 GenBank数据库中原有新麦草属的 Psathyrostachys fragilis 相似度
最高，这表明内蒙古带子座植物属于早熟禾亚科。
图 2 部分植物 cpDNA中的 trnT-trnL片段序列比对
Fig． 2 Alignment of trnT-trnL intergenic spacer sequences from some plants
W9:内蒙古带子座植物样品 Stromatal plants;Lc1:羊草 L． chinensis;Pf1:新麦草属植物 Psathyrostachys fragilis
用 DNAssist软件比对相关序列显示:本研究获得的内蒙古带子座植物样品(W 9)与羊草 L． chinensis
(Lc 1)的目的片段长度均为 740 bp，仅 4 个碱基的差异;而新麦草属的 Psathyrostachys fragilis(Pf 1)目的片
段长度为 1 750 bp，与待鉴定样品的目的片段碱基差异较大(图 2)。
26
第 1 期 张红侠，等:不含花序的禾本科植物样品的鉴定
根据比对结果，从 GenBank数据库中选取各属代表植物的 trnT-trnL 基因间间隔序列(表 2)构建系统
发育树(图 3) ，结果显示:内蒙古带子座植物与羊草聚为一支，自展值(bootstrap value)为 95%，和 Psathy-
rostachys fragilis共同分布于小麦族的大支上(图 3)。
表 2 用于 trnT-trnL序列分析的植物及其 GenBank登录号
Table 2 Plants and GenBank accession numbers for their trnT-trnL sequences
植物
Species
属
Genera
族
Tribe
地理起源
Geographic origin
GenBank登录号
GenBank accession number
Psathyrostachys fragilis 新麦草属 Psathyrostachys 小麦族 Triticeae 北美 North America AF519169
Psathyrostachys juncea 新麦草属 Psathyrostachys 小麦族 Triticeae 北美 North America AF519170
Hordelymus europaeus 三柄麦属 Hordelymus 小麦族 Triticeae 欧洲 Europe FJ793070
Elymus canadensis 披碱草属 Elymus 小麦族 Triticeae 北美 North America AF519132
Triticum baeoticum 小麦属 Triticum 小麦族 Triticeae 北美 North America AF519168
Lolium multiflorum 黑麦草属 Lolium 早熟禾族 Poeae 北美 North America EF379022
Lolium perenne 黑麦草属 Lolium 早熟禾族 Poeae 北美 North America EF379025
Lolium arundinaceum 黑麦草属 Lolium 早熟禾族 Poeae 北美 North America AY450934
Festuca rubra 羊茅属 Festuca 早熟禾族 Poeae 欧洲 Europe EF585097
Festuca longifolia 羊茅属 Festuca 早熟禾族 Poeae 北美 North America EU119364
Secale montanum 黑麦属 Secale 小麦族 Triticeae 北美 North America AF519163
Agropyron cristatum 冰草属 Agropyron 小麦族 Triticeae 北美 North America AF519116
Hordeum brevisublulatum 大麦属 Hordeum 小麦族 Triticeae 北美 North America AF519121
Aegilops markgrafii 山羊草属 Aegilops 小麦族 Triticeae 北美 North America AF519111
Eremopyrum bonaepartis 旱麦草属 Eremopyrum 小麦族 Triticeae 北美 North America AF519148
Haynaldia villosa 簇毛麦属 Haynaldia 小麦族 Triticeae 北美 North America AF519129
Pseudoroegneria spicata 拟鹅观草属 Pseudoroegneria 小麦族 Triticeae 北美 North America AF519158
Achnatherum inebrians 芨芨草属 Achnatherum 针茅族 Stipeae —a —a
Agrostis tenuis 翦股颖属 Agrostis 翦股颖族 Agrostideae —a —a
Calamagrostis villosa 拂子茅属 Calamagrostis 翦股颖族 Agrostideae —a —a
Echinopogon ovatus 刺茅草属 Echinopogon 燕麦族 Aveneae —a —a
Koeleria cristata 艹洽草属 Koeleria 燕麦族 Aveneae —a —a
Sphenopholis obtusata Sphenopholis属 燕麦族 Aveneae —a —a
Ｒoegneria kamoji 鹅观草属 Ｒoegneria 小麦族 Triticeae 中国 China KC408395b
Elymus sp． 披碱草属 Elymus 小麦族 Triticeae 中国 China KC408391b
Elymus sp． 披碱草属 Elymus 小麦族 Triticeae 中国 China KC408392b
Poa sp． 早熟禾属 Poa 早熟禾族 Poeae 中国 China KC408394b
Melica scabrosa 臭草属 Melica 臭草族 Meliceae 中国 China KC408393b
Leymus chinensis 赖草属 Leymus 小麦族 Triticeae 中国 China KC408388b
Leymus chinensis 赖草属 Leymus 小麦族 Triticeae 中国 China KC408389b
Leymus chinensis 赖草属 Leymus 小麦族 Triticeae 中国 China KC408390b
W8 — — 中国 China KC408383b
W4 — — 中国 China KC408384b
W5 — — 中国 China KC408385b
W2 — — 中国 China KC408386b
W9 — — 中国 China KC408387b
注:—a 为文献［17］中使用的序列，并尚未上传到 GenBank —a:Sequences listed in reference［17］which not available in GenBank;b为本研
究中的样品 Plants in this study． W8、W4、W5、W2 和 W9 为内蒙古带子座植物。W8，W4，W5，W2 and W9 are stromatal plants．
2． 3 植物叶表皮微形态特征
显微镜下观察组织透明后得到的 5 种植物叶表皮微形态特征(图 4 和图 5)。内蒙古带子座植物叶表
皮硅细胞长方形或长椭圆形;气孔副卫细胞呈低圆屋顶形，近水平;无双胞微毛;上表皮长细胞有微波纹，
具大毛(垫细胞 1 个) ，刺毛;下表皮长细胞长筒形，有波纹。
不同植物间表皮结构特征存在差异，其中上、下叶表皮的长细胞、短细胞及气孔副卫细胞形态特征存
在较大差异。内蒙古带子座植物叶表皮微形态特征与羊草一致，有别于其他种类(表 3)。
表 3 植物叶表皮微形态主要差异
Table 3 Properties comparison of leaf epidermis
植物样品
Plant sample
上表皮 Adaxial epidermis
长细胞形状
Shape of long cell
短细胞
Short cell
气孔副卫细胞形状
Shape of subsidiary cell
下表皮 Abaxial epidermis
长细胞形状
Shape of long cell
短细胞
Short cell
气孔副卫细胞形状
Shape of subsidiary cell
苇状羊茅
Lo． arundinaceum 长筒形 Long cylindrical 有 Yes 圆屋顶形 Dome-shape 长筒形 Long cylindrical 有 Yes 圆屋顶形 Dome-shape
大雀麦 B． magnus 菱形 Diamond 无 No 近水平形 Near level 长筒形 Long cylindrical 有 Yes 近水平形 Near level
鹅观草 Ｒ． kamoji 多角形 Polygon 有 Yes 近水平形 Near level 长筒形 Long cylindrical 有 Yes 近水平形 Near level
羊草 L． chinensis 长筒形 Long cylindrical 有 Yes 低圆屋顶形 Lower dome-shape 长筒形 Long cylindrical 有 Yes 圆屋顶形 Dome-shape
待鉴定 Unidentified 长筒形 Long cylindrical 有 Yes 低圆屋顶形 Lower dome-shape 长筒形 Long cylindrical 有 Yes 低圆屋顶形 Lower dome-shape
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南 京 农 业 大 学 学 报 第 37 卷
图 3 基于 cpDNA中的 trnT-trnL基因间间隔序列构建的最大简约系统发育树
Fig． 3 trnT-trnL intergenic spacer phylogram based on maximum parsimony(MP)of cpDNA from Poaceae grasses
1 000 次重复 Number at branches are bootstrap value of 1 000 repeats;●:待鉴定植株 Unidentified plant;步长为 271 Tree length is
271;一致性指数为 0． 808 Onsistency index is 0． 808;总留存指数为 0． 961 Ｒetention index is 0． 961;总尺度化一致性指数为 0． 776 Ｒes-
caled consistency index is 0． 776．
3 讨论
从内蒙古科尔沁地区采集的 26 株带子座禾本科植物，因未观察到植物抽穗，也未采集植物根，无法依
据宏观形态学特征进行鉴定。化学分类主要是分析植物体内的化合物，如以黄酮类成分及挥发油来区分
不同植物，而化学分类在禾本科植物中应用较少［2］。本研究中，采集的禾本科植物，因无种子而无法做核
型分析［3］。由于 PCＲ技术的兴起，基因片段的扩增在植物分类中得到广泛的应用［4，7］。
2008 年，Schardl等［17］利用叶绿体 DNA扩增的序列构建了系统发育树，成功将禾本科植物的翦股颖
族、早熟禾族、雀麦族、小麦族、短柄草族及臭草族等植物分开［13 － 14］，同时也表明了植物与内生真菌的协同
进化。本研究基于叶绿体 DNA中的 trnT-trnL基因间间隔序列，构建的系统发育树显示:黑麦草属、羊茅属
及早熟禾属均属于早熟禾族，在系统发育树上形成聚为一支;小麦族各属成员聚为一支，与之前的报道一
致［7，13 － 14，17］;内蒙古带子座植物，在小麦族成员形成的分支上，与羊草一起形成自展值为 95%的小支，而
与新麦草属(Psathyrostachys fragilis)存在一定差异，推测供试植物为羊草，这一结果在用 DNAssist 软件分
析目的序列时得到了验证。待鉴定植株的 trnT-trnL 基因间间隔序列长度为 740 bp，而新麦草属(Psathy-
rostachys fragilis)的相应序列长达 1 750 bp，待鉴定植株序列基本在新麦草序列覆盖范围内，这可能是导致
在 GenBank数据库中比对时，待鉴定植物与新麦草属(Psathyrostachys fragilis)序列相似度高的原因。
在一些案件侦查中，植物微形态的鉴定发挥着重要的作用，往往关系着案件的侦破［10］。陈守良等［1］
在 1993 年就对我国部分禾本科植物叶表皮微形态进行研究，随后，更多的禾本科植物叶表皮微形态被相
继报道。目前，利用组织透明对植物叶表皮进行观察，在植物鉴定中占据越来越重要的地位［5，7 － 8］。本研
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第 1 期 张红侠，等:不含花序的禾本科植物样品的鉴定
图 4 植物叶片上表皮 /下表皮微形态结构
Fig． 4 Properties of plant adaxial /abaxial leaf blade epidermis
A /B:内蒙古带子座样品 Stromatal plants;C /D:羊草 L． chinensis;E /F:鹅观草 Ｒ． kamoji;G /H:大雀麦 B． magnus;I / J:
苇状羊茅 Lo． arundinaceum;标尺为 100 μm Bar is 100 μm．
图 5 植物叶的上表皮毛形态
Fig． 5 Properties of hairs on adaxial epidermis
内蒙古带子座样品的大毛(A)和刺毛(B)Macrohairs(A)and prickles(B)of stromatal plants;羊草的大毛(C)
Macrohairs(C)of Leymus chinensis;标尺为 50 μm Bar is 50 μm．
究中 5 种植物的叶表皮组织透明结果显示:内蒙古带子座植物的上、下叶表皮形态特征及表皮毛结构，与
鹅观草、大雀麦、苇状羊茅的差异大，均与羊草一致，这说明了内蒙古带子座不含花序的植物与羊草亲缘关
系较近。本研究未采集到新麦草属(Psathyrostachys fragilis)植物样品。而此前的研究表明新麦草属植物
与赖草属植物叶表皮微形态的相同特征较少［20］。
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南 京 农 业 大 学 学 报 第 37 卷
在内蒙古进行植物样品采集时，带子座植物周围广泛分布着羊草植株。本研究中，采用基因片段分析
及组织透明法对内蒙古带子座植物样品进行鉴定。扩增叶绿体 DNA中的 trnT-trnL基因间间隔序列，构建
的系统发育树中，内蒙古带子座植物与羊草高度聚类，序列比对结果也表明两者较高的一致性。观察植物
叶表皮微形态特征，同样显示了两者的一致性。依据微形态学特征及 trnT-trnL 基因序列分析结果，鉴定
内蒙古带子座植物样品为羊草(Leymus chinensis Trin．)。
本课题组在 2008 年，依据外部形态特征、叶表皮微形态及 rDNA-ITS 序列等结果，将南京地区产子座
的禾本科植物鉴定为拂子茅属植物［7］，表明该鉴定方法的可靠性。本研究中，由于采集的植物样品不抽
穗，不能依据形态学特征进行鉴定，只对植物茎和叶的外部形态进行了描述。在观察植物叶表皮微形态
时，之前的研究较繁琐，本研究仅用 95%乙醇脱色和 75%乳酸透明即可达到目的，成本低，易于操作，提高
了准确性［19］。在采用基因序列鉴定植物时，相对于 rDNA-ITS基因序列，本研究采用特异性扩增植物叶绿
体 DNA的 trnT-trnL基因序列，能更好地对植物进行鉴定［13 － 14，17］。
内生真菌与宿主禾本科植物协同共生，分布广泛。目前，至少 20 属禾本科植物上有内生真菌的报
道［21］。Epichlo属及部分 Neotyphodium 属内生真菌能在禾本科植物上产生子座，阻碍宿主植物正常抽
穗［22］。2006 年，本课题组在我国广泛分布的鹅观草植物上发现子座［23］。随后，拂子茅、草地早熟禾及羽
茅等植株上形成的子座相继被报道［24 － 26］。目前，国际上尚未有关于羊草新型内生真菌的报道。绝大多数
禾本科植物内生真菌具有宿主特异性，一种植物对应一种内生真菌［17，21 － 22］。因此，内生真菌可能成为区
分不同植物的一种标记，内生真菌能在羊草植株上形成子座，也显示了羊草植株的特异性［17，21］。其中的
内生真菌，可能为一个新种，相关研究正在进行。
本研究采用 4 种方法:1)外部形态，观察植物茎秆和叶的宏观形态学特征［6］;2)组织透明，观察植物
叶表皮微形态［1，5，7 － 8］;3)基因片段，分析叶绿体 DNA中 trnT-trnL 基因间隔区［17］;4)内生真菌的宿主特异
性［21，23 － 25］，经鉴定内蒙古带子座、不抽穗的植物样品为羊草(Leymus chinensis Trin．)。关于植物微形态特
征及叶绿体 DNA分子标记这两种方法的结合，在植物分类鉴定中的应用广度，需要后续研究。
参考文献:
［1］ 陈守良，金岳杏，吴竹君，等．禾本科叶片表皮微形态图谱［M］．南京:江苏科学技术出版社，1993
［2］ 周荣汉，姜杰宏．植物化学分类学研究进展［J］．植物学通报，1993，10(1) :1 － 9
［3］ 阎贵兴，张素贞，云锦凤，等． 33 种禾本科饲用植物的染色体核型研究［J］．中国草地学报，1991(5) :1 － 13
［4］ Krishnamurthy P K，Francis Ｒ A． A critical review on the utility of DNA barcoding in biodiversity conservation［J］． Biodiversity and Conserva-
tion，2012，21:1901 － 1919
［5］ 蔡联炳．鹅观草属部分种的叶表皮微形态特征及其分类学意义［J］．植物研究，2000，20(4) :372 － 378
［6］ 蔡联炳．根据外部形态特征试论鹅观草属的亲缘演化关系［J］．西北植物学报，1998，18(4) :606 － 612
［7］ 詹漓晖，纪燕玲，亢燕，等．禾本科植物内生真菌研究 3:产生子座而无有性孢子的 Neotyphodium 属内生真菌 －拂子茅属植物新共生体
［J］．南京农业大学学报，2008，31(4) :55 －60． doi:10． 7685 / j． issn． 1000 －2030． 2008． 04． 010
［8］ Ma H Y，Peng H，Wang Y H． Morphology of leaf epidermis of Calamagrostis s． l．(Poaceae:Pooideae)in China［J］．植物分类学报，2006，44(4) :
371 －392
［9］ 强胜．植物学［M］．北京:高等教育出版社，2006
［10］ 秦慧贞，赵武生．植物物证鉴定［M］．南京:东南大学出版社，2007
［11］ Fazekas A J，Kuzmina M L，Newmaster S G，et al． DNA barcoding methods for land plants［M］/ /Kress W J，Erickson D L． DNA Barcodes:Meth-
ods and Protocols，Methods in Molecular Biology． 2012，858:223 － 252
［12］ 程须珍，Yang C Y．利用 ＲAPD标记鉴定绿豆组植物种间亲缘关系［J］．中国农业科学，2001，34(2) :216 － 218
［13］ Taberlet P，Gielly L，Pautou G，et al． Universal primers for amplification of three non-coding regions of chloroplast DNA［J］． Plant Molecular Bi-
ology，1991，17(5) :1105 － 1109
［14］ Taberlet P，Coissac E，Pompanon F，et al． Power and limitations of the chloroplast trnL(UAA)intron for plant DNA barcoding［J］． Nucleic Acids
Ｒesearch，2007，35(3) :e14
［15］ 傅立国．中国高等植物:第 12 卷［M］．青岛:青岛出版社，2009
［16］ 王永，纪燕玲，王晗，等．禾本科植物内生真菌研究 13:禾本科植物内生真菌的分离鉴定及基因组 DNA的快速提取［J］．南京农业大学
学报，2012，35(3) :52 － 56． doi:10． 7685 / j． issn． 1000 － 2030． 2012． 03． 010
［17］ Schardl C L，Craven K D，Speakman S，et al． A novel test for host-symbiont codivergence indicates ancient origin of fungal endophytes in grasses［J］．
Systematic Biology，2008，57(3) :483 －498
［18］ Tamura K，Dudley J，Nei M，et al． MEGA4:Molecular evolutionary genetics analysis(MEGA)software version 4． 0［J］． Molecular Biology and
66
第 1 期 张红侠，等:不含花序的禾本科植物样品的鉴定
Evolution，2007，24(8) :1596 － 1599
［19］ 陈铭德．植物组织的透明制片法［J］．生物学通报，1990(7) :37
［20］ 蔡联炳，张同林．根据叶解剖特征试论赖草属及其相关类群间的亲缘关系［J］．西北植物学报，2006，26(3) :537 － 543
［21］ 王志伟，纪燕玲，陈永敢，等．禾本科植物内生真菌资源及其物种多样性［J］．生态学报，2010，30(17) :4771 － 4781
［22］ Schardl C L，Scott B，Florea S，et al． Epichlo endophyte:clavicipitaceous symbionts of grasses［M］/ /Deising H． The Mycota V:Plant Ｒelation-
ships． Heidelberg:Springer，2009:275 － 306
［23］ Li W，Ji Y L，Yu H S，et al． A new species of Epichlo symbiotic with Chinese grasses［J］． Mycologia，2006，98(4) :560 － 570
［24］ Ji Y L，Zhan L H，Kang Y，et al． A new stromata-producing Neotyphodium species symbiotic with clonal grass Calamagrostis epigeios(L．)Ｒoth．
grown in China［J］． Mycologia，2009，101(2) :200 － 205
［25］ Kang Y，Ji Y L，Zhu K Ｒ，et al． A new Epichlo species with interspecific hybrid origins from Poa pratensis ssp． pratensis in Liyang，China［J］．
Mycologia，2011，103(6) :1341 － 1350
［26］ Wei Y K，Gao Y B，Zhang，X，et al． Distribution and diversity of Epichlo /Neotyphodium fungal endophytes from different populations of Ach-
natherum sibiricum(Poaceae)in the Inner Mongolia Steppe，China［J］． Fungal Diversity，2007，24:329 － 345
责任编辑:刘怡辰
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