全 文 ：植物生理学通讯 第 43 卷 第 3期 , 20 07 年 6 月
兰属新种珍珠矮的组织培养与植株再生
和寿星 , 薛润光 ’ , 李兆光 , 和加卫 , 李燕
云南省农业科学院高山经济植物研究所 , 云南丽江 6 7 4 10 0
T i s s u e C u l t u r e a n d P l a n t l e t R e g e n e r a t i o n o f yC m b诚 u m n a n u lu m .Y 5 . W u e t
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1 植物名称 兰属植物新种珍珠矮 ( C y m b id l’u m
n a n u l u m Y
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C h e n )
。
2 材料类别 九成熟茹果内种子 。
3 培养条件 以 112 M S (大量 、 微量元素均减半 )为
基本培养基 。 (1 )种子萌发培养基 : 112 M S + 6一B A .0 25
m g’ L 一 ’ (单位下同+) N A A .0 5 + 活性炭 2 g’ L 一 ’ + 椰乳
10 0 m L
·
L
一 ’ ; (2 )根状茎增殖培养基 : l /ZM S + 6一 B A
0
.
5 + N A A Z+ 活性炭 2 9 · L 一 `+ 椰乳 10 0 m L · L 一 ` ; ( 3 )
芽和根分化培养基 : 112 M S + 6 一B A S + N A A 0 . +5 椰
乳 1 0 0 m L · L 一 ` ; ( 4 )壮苗培养基 : l /ZM S + N A A Z+
香蕉泥 10 0 .g L 一 ’ 。 上述培养基均附加 8 g’ L 一 ’ 琼脂
和 3 0 .g L 一 ’ 蔗糖 , p H 5 . 4 。 培养温度 (2 3土 2) ℃ ,
根状茎诱导阶段 置黑暗中培养 , 增殖 、 分化和壮
苗阶段光照培养 , 光照强度 2 5 一 3 0 林m ol · m 一 , · s 一 ’ ,
光照时间 14 h . d 一 , 。
4 生长与分化情况
.4 1 无菌材料的获得 2 月 , 切取尚未开裂的珍珠
矮茹果 , 切除花梗和残留柱头 、 花瓣 , 用 7 5 %
酒精擦拭干净后浸入 1 g’ L 一 ’ H g o : 溶液中 巧 m in ,
无菌水清洗 3一 4 次 。 在超净台上 , 用滤纸吸干水
分 , 切除茹果两端接触消毒液部分 , 然后剖开葫
果 , 将种子直接撒播于培养基 ( l) 上 , 播种密度以
大致铺满培养基 , 种 子 间不相 互重叠为宜 。
.4 2 根状茎的诱导和增殖 接种 45 d 后 , 部分种胚
膨大并突破种皮 , 先形成原球茎 , 再经过约 60 d 后
原球茎一端伸长 , 分化出 1一 2 条根状茎 。 在培养
基 ( l) 上不同种子萌发速度差异极大 , 萌发可持续
1年甚至更长时间 , 经抽样测定 , 平均萌发率为
3 5
.
2%
。 分批将诱导出的根状茎转接到增殖培养
基 ( 2) 上 , 根状茎伸长 , 并在先端或中间出现小突
起 , 伸长成为分枝状根状茎 (图 1 ) , 水平生长一
段时间后大多数会垂直向下生长 。 4 5 d 继代一
次 , 在分枝处切下或分段切下 , 转入新鲜培养基
中 , 可继续分化成分枝状根状茎 。 珍珠矮增殖速
率受 N A A 影响较大 , 在 1一 5 m g’ L 一 ’ 的范围内 ,
N A A 浓度越高 , 根状茎增殖速率越快 。 综合增殖
速率与生长情况 , 以培养基 ( 2) 效果较好 , 每代平
均增殖倍数为 3 . 6 。
图 1 珍珠矮的根状茎增殖
.4 3 芽和根的分化培养 在培养基 (2 )上也可分化出
少量 芽和根 , 但为了提高分化率 , 可将增殖的根
状茎从分枝处切下 , 转接到分化培养基 (3 )上 。 约
3 0 d 后 , 根状茎先端开始分化芽 , 接种 6 0 d 后
测定芽平均分化率为 7 2 % 。 新芽生 长到约 3 c m
高 、 展开 1一 2 片叶后 , 叶片基部鞘叶内分化出根
并向培养基内生长 。 在培养基 ( 3) 中培养 9 0 d 时 ,
新芽生根率可达 95 % 以上 (图 2) 。
.4 4 壮苗培养与移栽 在分化培养基上培养约 90 d
后 , 选取健壮新苗转入壮苗培养基 (4) 中培养 45 d ,
收稿 2 0 0 7 一 0 3一 1 4 修定 2 0 0 7 一 0 5 一 2 1
资助 云南省重点基金 ( ZOO 3 N G 0 9) 和 云南省国际合作处项 目
( S I A R F 2 0 0 1 )
。
通讯作者 ( E 一 m a i l : x u e r g @ 1 6 3 . e o m ; T e l : 0 8 8 8 -
5 1 2 1 3 8 5 )
。
DOI : 10. 13592 /j . cnki . ppj . 2007. 03. 061
植物生理学通讯 第 4 3卷 第 3期 , 20 07 年 6 月
图 2 珍珠矮的生根壮苗
促进新芽 、 新根生长 。 新芽生长到 10 一巧 c m 高 、
展 开 2 一 3 片叶 、 根长满培养基 时 , 逐渐揭开瓶
盖 , 过渡培养 2一 3 d 。 然后取 出组织培养苗 , 洗
净培养基 , 以 50 0 倍 7 0 % 多菌灵溶液处理过的水
苔包裹根部 , 5一 10 株为一丛 , 合栽于 9 e m x g e m
( 口径 x 高 )的营养钵中 , 置炼苗棚内培养 。 初期
遮去自然光的 9 0% 左右 , 棚内温度控制在 25 ℃
以下 , 空气湿度 8 0 % 左右 , 每周喷洒 0 . 1% 磷酸
二氢钾和 0 . 0 5% 尿素混合溶液 , 每月喷 1 0 0 0 倍
7 0 % 多菌灵溶液一次 , 移栽成活率可达 9 0 % 以
上 。
5 意义与进展 珍珠矮为吴应祥和陈心启 ( 19 9 1) 命
名的兰科兰属新种 , 最早发现于云南文 山 , 大致
分布于四川南部至云南西部和南部某些特殊环境
中 。 花期 6一 9 月 , 具有一年多次开花的特性 , 花
色多变 , 香味清纯 。 由于珍珠矮植株矮小 , 分
布地域狭窄 , 野生资源稀少 , 一直没有像兰属其
他种类一样得到重视 , 人工驯化 、 栽培很少 (陈
心启等 1 9 9 9) 。 珍珠矮分株繁殖较慢 , 用植株侧
芽组织培养时取材不易 , 且对植株伤害较大 。 用
种子人工无菌播种繁殖可迅速得到大量实生苗 ,
可 能是快速繁殖珍珠矮的一个有效方法 。 本文结
果对珍珠矮大规模栽培和新优品种的选育可能有一
定的参考意义 。 与珍珠矮同属的其他种兰花组织
培养己多有报道 (张菊野等 1 9 9 3 ; 张志胜 2 0 0 0 ;
徐宏英等 2 0 0 1 ; 吴晓霞等 20 0 2 ; 宋卫平等 2 00 3 ;
秦改花等 2 0 06) , 但珍珠矮组织培养和快速繁殖的
报道迄今未见 。
参考文献
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京 : 科学出版社 , 1 8 2
秦改花 , 田芳 , 汤 士勇 ( 2 0 0 6) . 培养基中附加不同有机物对虎头
兰原球茎增殖的影响 . 植物生理学通讯 , 4 2 (3 ) : 46 9
宋卫平 , 万志刚 , 顾福根 , 许宏庆 (2 0 0 3) . 素心建兰的组织培养及
快速繁殖 . 植物生理学通讯 , 39 ( 4) : 35 5
吴晓霞 , 姜敦云 , 崔月花 , 张彪 ( 2 0 0 2) . 大花蕙兰的组织培养和快
速繁殖 . 植物生理学通讯 , 3 8 ( 2) : 1 41
吴应祥 , 陈心启 ( 19 9 1) . 中国兰属两新种 . 植物分类学报 , 2 9 ( 6) :
5 4 9 ~ 5 5 2
徐宏英 , 王芳 , 谢海军 , 赵玉明 (2 0 0 1) . 大花蕙兰的组织培养和快
速繁殖 . 植物生理学通讯 , 37 ( 6) : 4 7
张菊野 , 俞玲凤 , 连宏坤 ( 1 9 9 3) . 几种影响春兰原球茎生长与分
化的因素 . 植物生理学通讯 , 2 9 ( 3) : 17 5一 17 8
张志胜 (2 0 0 0) . 兰花育种 . 见 : 程金水编 . 园林植物遗传育种学 .
北京 : 中国林业出版社 , 2 6 3一2 8 9