全 文 ：方药纵横
△ 基 金 项 目:内 蒙 古 医 科 大 学 博 士 启 动 基 金 项 目
(NY2008BQ005) ;内蒙古自然科学基金项目(2013MS1208)
作者简介:李骁(1978 －) ，男，E － mail:lx_leexiao@ 163． com，电
话:18547120785
* 通讯作者:解红霞(1975 －) ，女，教授，博士． E － mail:xie-
hongxia2004@ sohu． com，电话:13644714868;通讯地址:呼和浩特市
金山开发区内蒙古医科大学金山校区药学院;邮编:010110
铁线莲属蒙药材中黄酮和三萜类化合物的薄层鉴别△
李 骁1 徐晶光1 侯 雪1 赵 科1 解红霞2*
(1．内蒙古医科大学药学院，内蒙古 呼和浩特 010029;
2．内蒙古医科大学附属医院，内蒙古 呼和浩特 010059)
摘 要:目的:鉴别铁线莲属蒙药材中黄酮和三萜类化合物。方法:硅胶 GF254 预制薄层板，以甲苯 －乙酸乙酯 －甲酸(9:
3:1)为展开剂展开，1%三氯化铝乙醇溶液显色，于 365nm下检识黄酮类化合物;以甲苯 －乙酸乙酯 －冰乙酸(14:4:0． 5)
为展开剂展开，香草醛浓硫酸溶液为显色剂，显色，检识三萜类化合物。结果:棉团铁线莲醇提物在与山奈酚标准品相应位
置显出同样斑点，芹叶铁线莲、黄花铁线莲、长瓣铁线莲、短尾铁线莲、棉团铁线莲和辣蓼铁线莲醇提物在与槲皮素标准品
相应位置显出同样斑点;芹叶铁线莲、黄花铁线莲、长瓣铁线莲、短尾铁线莲、棉团铁线莲和辣蓼铁线莲醇提物在与齐墩果
酸和熊果酸标准品相应位置显出同样斑点。结论:棉团铁线莲中含有山奈酚，芹叶铁线莲、黄花铁线莲、长瓣铁线莲、短尾
铁线莲、棉团铁线莲和辣蓼铁线莲中均含有槲皮素和齐墩果酸。
关键词:铁线莲属;黄酮;三萜皂苷;薄层层析色谱
中图分类号:Ｒ291． 2 文献标识码:A 文章编号:1006 － 6810(2014)03 － 0037 － 05
铁线莲属(Clematis)隶属于毛茛科，全世界约有 300
种，广泛分布于除南极洲以外的各大洲。我国约有 108 种，
各地均有分布［1］。内蒙古地区有 16 种 6 变种［2］，经本草
考证［2 － 5］，其中入蒙药的植物有:芹叶铁线莲(Clematis
aethusifolia)、黄花铁线莲(C． intricata)、长瓣铁线莲(C．
macropetala)、短尾铁线莲(C． brevicaudata)、棉团铁线莲
(C． hexapetala)和辣蓼铁线莲(C． mandshurica) (又名:东
北铁线莲［6，7］)。铁线莲属植物具有镇痛、抗菌、消炎和抗
癌等多种药理活性，其药理作用与化学成分密切相关，化学
成分主要为皂苷类、黄酮类、生物碱;此外还包括挥发油、特
有成分及花色苷、香豆素、有机酸类、烷烃等其他化合
物［8］。铁线莲属蒙药材主要含有三萜类、黄酮类和生物碱
类化合物［9］。
黄酮类化合物具有抗氧化［10］、清除自由基［11］、调节心
血管系统［12 ～ 13］、抗癌防癌［14 ～ 15］、抗衰老［16］、抗炎抑菌［17］
等功效，还具有吸收紫外辐射、抗过敏及保肝［18］等作用。
三萜类化合物具有消炎［19］、抗菌［20］、抗肿瘤［21］、保肝［22］、
免疫调节［23］、调节心血管系统［24］、抗衰老［25］、神经保护［26］
等作用。
有关铁线莲属蒙药材化学成分的鉴别研究，多为对某
种铁线莲的单一化学成分进行鉴别研究［27］，然而对铁线莲
属入蒙药的 6 种铁线莲主要化学成分(黄酮类和三萜类)
进行整体化、系统化鉴别研究还未见报道。本研究主要通
过薄层色谱法对铁线莲属蒙药材中的黄酮类和三萜类化合
物进行鉴别，从而为铁线莲属蒙药材的质量控制提供依据，
为其黄酮类和三萜类化合物的深度开发利用奠定基础。
1 实验材料
1． 1 药材:棉团铁线莲(Clematis hexapetala) ，芹叶铁线莲
(C． aethusifolia) ，黄花铁线莲(C． intricata) ，短尾铁线莲
(C． brevicaudata) ，辣蓼铁线莲(C． mandshurica) ，长瓣铁线
莲(C． macropetala)的植株干燥全草。蒙药材原植物均经
笔者鉴定，凭证标本保存于内蒙古医科大学药学院药用植
物标本室。
1． 2 对照品:齐墩果酸(中国药品生物制品检定所，110709
－ 200505)、熊果酸(中国药品生物制品检定所，1107042 －
200516)、长春藤皂苷元(中国药品生物制品检定所，111733
－ 200502)、芦丁(自制)、槲皮素(自制)、山奈酚(中国药品
生物制品检定所，110861 － 200808)
1． 3 仪器:HC － TP11 － 5 架盘药物天平(上海精科天平)、
ZF － 20D暗箱式紫外分析仪(南京科尔仪器设备有限公
司)、玻璃板(20cm × 20cm、10cm × 20cm)。
1． 4 试剂:浓硫酸、甲醇、乙醇、甲苯、乙酸乙酯、1%氯化铝
溶液、香草醛、冰乙酸、甲酸、硅胶 GF254(青岛海洋化工有
限公司制造)、羧甲基纤维素钠(天津市光复精细化工研究
所)。
2 药材来源
于 2009 ～ 2011 年药材采收期采集 6 种铁线莲植物全
草，置于阴凉通风干燥处储存。药材来源详见表 1。
732014 年 3 月第 3 期 中国民族医药杂志
DOI:10.16041/j.cnki.cn15-1175.2014.03.027
表 1 药材来源及采集时间
材料样品
第一批 第二批
采集地 采集时间 采集地 采集时间
芹叶铁线莲
Clematis aethusaefolia Turcz．
呼和浩特市小井沟 2011 年 7 月 凉城蛮汉山 2010 年 8 月
黄花铁线莲
Clematis intricata?Bunge．
呼和浩特市小井沟 2011 年 7 月 凉城蛮汉山 2010 年 8 月
短尾铁线莲
Clematis brevicaudata DC．
呼和浩特市小井沟 2011 年 7 月 呼和浩特市小井沟 2010 年 8 月
棉团铁线莲
Clematis hexapetala Pall．
呼和浩特市小井沟 2011 年 7 月 凉城蛮汉山 2010 年 7 月
长瓣铁线莲
Clematis macropetala?Ledeb．
呼和浩特市小井沟 2010 年 7 月 凉城蛮汉山 2009 年 8 月
辣蓼铁线莲
Clematis mandshurica Ｒupr．
辽宁省鞍山千山 2010 年 7 月 辽宁省丹东凤凰山 2010 年 7 月
3 理化鉴别
3． 1 药材粗提物的制备:取 6 种铁线莲干燥全草粉碎，称
取粉末 10g，加 95%乙醇 60 ～ 70mL，过夜。水浴回流加热
提取 1h(溶液保持微沸) ，过滤。滤渣加入 95%的乙醇 40
～ 60mL，水浴加热提取 30 ～ 40mins，过滤;滤渣再加入 95%
乙醇 50 ～ 60mL，水浴加热提取 30 ～ 40mins，过滤。合并滤
液，浓缩备用。
3． 2 黄酮类的检识［28］:盐酸 －镁粉反应:取适量浓缩液于
试管中，加入 1mL 甲醇，摇匀，加入少量镁粉振摇，再加入
几滴浓盐酸，1min后观察现象，若反应试液显紫红色，说明
反应结果呈现阳性。
三氯化铝反应:取适量浓缩液于试管中，用吸管吸取试
液滴加于滤纸上成两排，再于下排滴加三氯化铝溶液，上排
作为空白对照。将滤纸置于紫外灯下观察，若滴加有三氯
化铝溶液的一排在紫外灯下呈现淡黄色荧光，说明反应结
果呈阳性。
三氯化铁反应:取适量浓缩液于试管中，加入三氯化铁
的乙醇溶液，观察反应现象，若试液呈现紫色，说明反应结
果为阳性。
上述实验阳性结果表明药材粗提液中含有黄酮类化合
物。
3． 3 皂苷类的检识［28］:Libermanm － Burchard反应:取浓缩
液适量于试管中，加入乙酸酐并混匀，加入几滴浓硫酸 －乙
酸酐(1:20) ，观察反应现象，试液显示颜色变化。若药材提
取物中含有三萜皂苷，试液颜色一般由黄色转变为红色、紫
色、蓝色、污绿色。
Salkowaki反应:将浓缩液溶于适量 CCl4 中，然后沿试
管壁慢慢加入到浓 H2SO4 中，如两液面交界处出现深红色
或棕红色，说明样品中含有三萜皂苷。
泡沫试验:取适量浓缩液于试管中，强烈振摇后静置
10mins，观察现象，经强烈振摇后若产生持久性白色泡沫，
则表明药材提取物中含有皂苷类化合物。
3． 4 检识结果:如表 2 所示，6 种铁线莲在盐酸 －镁粉、三
氯化铁、三氯化铝反应中均呈现阳性结果，说明 6 种铁线莲
中均含有黄酮类化合物。6 种铁线莲在 Libermanm － Bur-
chard反应、Salkowaki反应、泡沫试验中均呈现阳性结果，说
明 6 种铁线莲中均含有三萜皂苷类化合物。
表 2 6 种铁线莲药材粗提液理化鉴别情况一览表
序号 显色剂 阳性结果现象 成分预示
实验结果(阳性 +或阴性 －)
芹叶
铁线莲
长瓣
铁线莲
黄花
铁线莲
棉团
铁线莲
辣蓼
铁线莲
短尾
铁线莲
1 盐酸 －镁粉 紫红色
2 三氯化铁 紫色
3 三氯化铝 黄色荧光
黄酮类
+ + + + + +
+ + + + + +
+ + + + + +
4
Libermann － Burchard
(乙酸酐作溶剂)
黄色→
污绿色
三萜
皂苷类
+ + + + + +
5
CCl4 －浓 H2SO4
(Salkowaki反应)
两液面交界
处出现深红色
或棕红色
三萜
皂苷类
+ + + + + +
6 强烈振摇 持久性白色泡沫 皂苷类 + + + + + +
83 中国民族医药杂志 2014 年 3 月第 3 期
4 薄层鉴别
4． 1 供试品的制备:按表 1 第一批、第二批提取。将铁线
莲属 6 种药材的全草剪碎，分别称取约 5g，分别加 70%乙
醇 70mL，浸泡过夜。水浴回流加热提取 1h (溶液保持微
沸) ，过滤;滤渣中加入 70%的乙醇 60mL，水浴加热提取
30min，过滤;将 2 次滤液合并，水浴蒸干，加少量无水乙醇
溶解，10mL容量瓶中定容，作为供试品溶液。将 6 种药材
按前述方法，分别用 95%乙醇再提取。
4． 2 对照品的制备:取槲皮素、山奈酚、齐墩果酸、熊果酸
对照品适量加无水甲醇溶解，作为对照品溶液。
4． 3 薄层层析
4． 3． 1 黄酮类的薄层层析:用毛细管吸取对照品溶液各
2μL，供试品溶液各 5μL 点于同一块硅胶板，以甲苯:乙酸
乙酯:甲酸(9:3:1)为展开剂［29］，展距 10cm，取出，晾干，喷
以 1%三氯化铝醇溶液，晾干，置紫外灯(365nm)下检视，在
供试品谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧
光，结果详见图 1。
结果显示:如薄层图谱所示，山奈酚标准品对应位置
上，只有第二批 70% 的棉团铁线莲含有，其他供试品在
365nm的紫外荧光下在相同位置下均未见相同荧光;而在
自制槲皮素标准品相应位置上，第一批和第二批供试品中，
70%和 90%的供试品在 365nm 紫外荧光下，均有荧光，只
是各自的含量有所差异，因而所显荧光深浅也不同。
图 1 铁线莲属蒙药材黄酮类化合物的薄层层析鉴别图谱
备注:1 ～ 6 分别为第一批 70%的芹叶、黄花、短尾、棉团、长瓣
及辣蓼铁线莲;7 ～ 12 为第一批 95%的供试品;;13、14 分别是标准
品槲皮素及山奈酚;15 ～ 20 为第二批 70%按一批顺序的供试品;
21 ～ 26 为第二批 95%供试品。
4． 3． 2 三萜皂苷类的薄层层析:用毛细管吸取对照品溶液各
2μL，供试品溶液各 5μL 点于同一块硅胶板，以甲苯:乙酸乙
酯:冰乙酸(14:4:0． 5)为展开剂［27］，展距 10cm，取出，晾干，喷
以香草醛浓硫酸溶液，在 105℃的条件下烘干，在供试品谱中，
在与对照品色谱相应位置上，显相同的颜色，结果详见图 2。
结果显示:如上图谱所示，在标准品显色的位置上，第
一批和第二批的 70%和 95%的供试品均在与供试品同一
位置上显色，且齐墩果酸显紫色，与供试品所显颜色相同，
而熊果酸在同一位置上也显色，但是颜色接近橘红色。
图 2 铁线莲属蒙药材三萜类化合物的薄层层析鉴别图谱
Fig2． TLC of Triterpenoid Saponins of six species in Clematis
备注:1 － 6 分别为第一批 70%的芹叶、黄花、短尾、棉团、长瓣
及辣蓼铁线莲;7 － 12 为上述 95%的供试品;;13、14 分别是标准品
齐墩果酸及熊果酸;15 － 20 为第二批 70%按一批顺序的供试品;
21 － 26 为第二批 95%供试品。
5 结论
通过对铁线莲属蒙药材的化学成分的理化检识，6 种
铁线莲中含有黄酮类和三萜类化合物;棉团铁线莲中含有
山奈酚;芹叶铁线莲、黄花铁线莲、短尾铁线莲、棉团铁线
莲、长瓣铁线莲及辣蓼铁线莲中均含有槲皮素。6 种铁线
莲蒙药材中均含有齐墩果酸。
6 讨论
试验中针对含量测定配制供试品溶液的不同提取方
法，不同提取溶剂(70%乙醇、95%乙醇和水) ，分别考察。
结果以 70%及 95%乙醇回流提取 1． 5h 效果最好，杂质较
少。
铁线莲的薄层色谱鉴别，根据文献香椿［29］的 TLC展开
条件对样品进行鉴别，经反复试验，采用甲苯 －乙酸乙酯 －
甲酸(9:3:1)溶液为展开剂进行展开，对于黄酮类成分分离
效果较好，薄层鉴别荧光斑点清晰、明确;根据文献［27］对齐
墩果酸的测定，最终采用甲苯 －乙酸乙酯 －冰乙酸(14:4:
0． 5)溶液为展开剂，分离效果较好，斑点清晰。
内蒙古铁线莲属植物资源丰富，有 16 种 6 变种［2］，除
本实验研究的入蒙药的 6 种铁线莲以外，还可入药的有大
叶铁线莲、西伯利亚铁线莲和甘青铁线莲［9］。通过本研究
对铁线莲属蒙药材中黄酮类和三萜类化合物的薄层鉴别，
为铁线莲属蒙药材不同采收期主要化学成分(黄酮类和三
萜类化合物)的变化研究和资源化学研究奠定了前期工作
基础，从而为该属蒙药材的质量控制提供依据。
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2014 年 1 月 20 日收稿
TLC Identification of flavonoids and triterpenoid saponins of
traditional Mongolia medicine in clematis
LI Xiao1，XU Jing guang1，HOU Xue1，ZHAO Ke1，XIE Hong xia2*
(1． Department of Pharmacy，Inner Mongolia Medical University，Hohhot 010059，China)
(2． Department of Pharmacy，Affiliated Hospital of Inner Mongolia Medical University，Hohhot 010059，China)
［Abstract］Objective:To identify flavonoids and triterpenoid saponins of traditional Mongolian crude drugs in Clematis． Method:
Thin － layer chromatography (TLC)were carried out． The separation was performed on pre － coated TLC GF254 silica － gel plate
stationary phase with methylbenzene － ethyl acetate － formic acid (9:3:1)as mobile phase (solvent system) ，1% AlCl3 alcoholic
solution as derivation reagent． Flavonoids were detected at 365nm with UV lamp． And the separation was performed with methyl-
benzene － ethyl acetate － glacial acetic acid (14:4:0． 5) ，vanillin － sulfuric acid solution was as visualizing reagent，then triterpene
saponins were detected in the sample． Ｒesults:Kaempferol was detected in extract of Clematis hexapetala and Quercetin was detec-
ted in Clematis aethusifolia ，C． intricate ，C． macropetala ，C． brevicaudata ，C． hexapetala and C． mandshurica ． Oleanic acid
was also detected in six species of plant mentioned above． Conclusion:Clematis hexapetala contains Kaempferol． Quercetin and
Oleanic acid were contained in Clematis aethusifolia ，C． intricate ，C． macropetala ，C． brevicaudata ，C． hexapetala and C．
mandshurica．
［Key words］Clematis L．;flavonoids;triterpenoid saponins;TLC
04 中国民族医药杂志 2014 年 3 月第 3 期