全 文 ：2011 年 7 月 第 13 卷 第 7 期 中国现代中药 Modern Chinese Medicine Jul. 2011 Vol. 13 No. 7
△［基金项目］ 浙江省重大科技攻关项目(2006C13012)
［通讯作者］ * 冯玲枫，E-mail:feng0032@ 126. com;* 陈建华，E-mail:sky78@ zjnu. cn
11 种铁线莲属药用植物地上部分
总黄酮含量比较研究
△
冯玲枫1* ，翁美娅1，田富饶2，陈建华1*
(1. 浙江师范大学化学与生命科学学院，浙江 金华 321004;
2. 浙江大学生物医学工程与仪器科学学院，浙江 杭州 310027)
［摘要］ 目的:对产自浙江省的 11 种铁线莲属药用植物的茎、叶中总黄酮含量进行测定分析，试图发现铁
线莲属植物地上部分总黄酮含量较高的具体种类及铁线莲属植株中总黄酮含量较高的部位。方法:以芦丁为标品，
采用紫外分光光度法。结果:(1)芦丁对照品在 15. 936 ～ 47. 808 μg·mL －1(r = 0. 999 9)线形关系良好，平均回收
率为 100. 8 %，RSD = 1. 74 %。(2)总黄酮含量总体趋势为叶 ＞茎，铁线莲属植物叶中总黄酮平均含量为 2. 636
%，茎中总黄酮平均含量为 0. 617 %。(3)总黄酮含量最高的为女萎叶，达 5. 581 %，最低为湖州铁线莲茎，仅
0. 195 %。(4)铁线莲属植物不同物种的总黄酮含量差异显著，同一物种不同部位间的总黄酮含量也存在一定的差
异。(5)聚类分析表明，铁线莲属地上部分总黄酮含量和该属植物系统演化有一定的相关性。结论:研究表明女
萎、山木通地上部分较适合用作黄酮类药物开发，该研究同时将为铁线莲属不同药用种类、不同药用部位及药用植
物亲缘关系的深入研究提供参考依据。
［关键词］ 铁线莲属;药用植物;地上部分;总黄酮;系统演化
毛茛科铁线莲属(Clematis L. )植物资源丰富，
全世界约有 355 种，主要分布于热带和亚热带，中
国大约有 150 种［1-2］，其中约 85 种可作药用［3］。铁
线莲属植物具有镇痛、抗菌、消炎和抗癌等多种药
理活性。铁线莲属植物的药理作用与其化学成分相
关，铁线莲属植物化学成分复杂，主要为皂苷类、
黄酮类、木脂素。此外还包括挥发油、特有成分及
花色苷、香豆素、生物碱、有机酸类、烷烃等其他
化合物［4］。我国铁线莲属植物资源丰富，因此有必
要进一步拓展其研究范围，为其药用植物资源的开
发利用提供新的理论依据。
黄酮类化合物广泛存在于自然界中，是植物在
长期自然选择过程中产生的一些次级代谢产物，有
10 多个类别，现已发现 4 000 余种黄酮类化合物［5］，
广泛存在于植物的根、茎、叶、花、果实中［6］。黄
酮类化合物具有抗氧化、消除自由基［7-8］、调节心血
管系统［9-10］、抗癌防癌［11-12］、抗炎免疫及抗衰老［13］
等功效，还具有吸收紫外辐射、止咳、祛痰、泻下、
解痉、提高记忆力、抗过敏、活血化瘀、利胆及肝
脏保护作用等［14］。
董彩霞等［15］从棉团铁线莲(Clematis hexapetala)
干燥根及根茎中分离鉴定了 12 个黄酮类化合物。孙
凤等［16］从圆锥铁线莲(C. terniflora)全草中分离得
到多种黄酮类化合物。古丽巴哈尔·阿巴拜克力［17］
对西伯利亚铁线莲(C. sibirica)地上部分有效成分
分析及总黄酮的测定证明不同部位均含有黄酮类
化合物，且其含量均比较高。古丽巴哈尔·阿巴拜
克力等对新疆粉绿铁线莲(C. glauca)不同部位总
黄酮含量比较研究也证明了不同部位的黄酮的
存在［18］。
《中国药典》［19］收载源自铁线莲属植物的中药主
要有川木通和威灵仙，传统药用部位为根、根茎或
茎，考虑到铁线莲属不同药用部位的开发利用和铁
线莲属植物资源利用率的进一步提高，本研究对浙
江产 11 种铁线莲属药用植物地上部分(茎和叶)总
黄酮含量分别进行了测定，为铁线莲属不同药用种
类、不同药用部位及药用植物亲缘关系的深入研究
提供参考依据。
1 仪器与材料
YP3001N电子天平(上海精密科学仪器有限公
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DOI:10.13313/j.issn.1673-4890.2011.07.014
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司) ;Spectrum 752PC 全波长扫描 －紫外可见分光
光度计(上海光谱仪器有限公司) ;芦丁对照品(中
国药品生物制品检定所，批号:10080-200707，纯
度 92. 5 %，供紫外法测定) ;其余试剂为分
析纯。
圆 锥 铁 线 莲 (C. terniflora)、毛 蕊 铁 线 莲
(C. lasiandra)、单 叶 铁 线 莲 (C. henryi)、威 灵 仙
(C. chinensis)、毛 果 扬 子 铁 线 莲 (C. puberula
var. tenuisepala )、 钝 齿 铁 线 莲 (C. apiifolia
var. argentilucida)、柱果铁线莲(C. uncinata)、女萎
(C. apiifolia)、山木通(C. finetiana)、毛果铁线莲
(C. peterae var. trichocarpa)采集地均为金华北山，湖
州铁线莲(C. huchouensis)采集地为湖州市郊。以上
实物材料均经浙江师范大学陈建华教授鉴定，部分
样品得到中国科学院植物研究所李良千研究员核定，
凭证标本存放于浙江师范大学植物标本室中。
2 方法与结果
2. 1 对照品储备液的制备
精密称取对照品芦丁 9. 96 mg，置于 50 mL 容
量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，冰箱内
保存，备用。
2. 2 样品溶液的制备
将新鲜材料洗净、烘干，药材粉碎成粉末，精
密称取 2. 000 g，置索氏提取器中，加适量乙醚提取
至无色，弃去醚液，药渣挥去乙醚，加适量甲醇继
续提取至无色，将提取液转移至 25 mL 容量瓶中，
甲醇定容至刻度，摇匀，即得［20-21］。
2. 3 两种显色剂考察［22-23］
2. 3. 1 10 %三氯化铝方法显色 选取圆锥铁线莲
叶和单叶铁线莲为代表，吸取 1. 0 mL 样品溶液，
加 1. 0 mL 10 %三氯化铝，用甲醇定容至 25 mL，
摇匀，静置 15 min 后，以相应试剂为空白，测吸
光度 A，测得全波长扫描图;吸取芦丁对照品储备
液4. 0 mL，采用 10 %三氯化铝方法显色，测得全
波长扫描图谱，见图 1。结果显示 3 个图谱中最
大吸收波长的重叠性不好，说明这种显色方法不
合适。
2. 3. 2 NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 方法显色 选取圆锥
铁线莲叶和单叶铁线莲为代表，吸取 1. 0 mL样品溶
液，加水至 6. 0 mL，加 1. 0 mL 5 %NaNO2 溶液，摇
匀，静置 6 min后，加 1. 0 mL 10 %Al(NO3)3 溶液，
摇匀，静置 6 min 后，再加 10. 0 mL 4 % NaOH 溶
液，用水定容至 25. 0 mL，摇匀，15 min 后，以相
应试剂为空白测吸光度 A，测得全波长扫描图谱;
吸取对照品芦丁对照品储备液 4. 0 mL，采用 NaNO2-
Al(NO3)3-NaOH方法显色，测得全波长扫描图，见
图 2。结果显示 NaNO2-Al(NO3)3-NaOH方法显色后
对照品和样品的最大吸收重叠性比较好。
2. 4 测试波长的选择
由图 2 可知，对照品溶液和样品溶液显色后的
最大吸收波长分别是 508，502，500 nm，因对照品
溶液所受干扰较样品少，故选择对照品溶液最大吸
收波长 508 nm为测定波长。
2. 5 标准曲线绘制
精密吸取对照品储备液 2. 0，3. 0，4. 0，5. 0，
6. 0 mL置 25 mL 容量瓶中，加水至 6. 0 mL，先加
1. 0 mL 5 % NaNO2 摇匀，静置 6 min 后，再加
1. 0 mL 10 %Al(NO3)3 摇匀，静置 6 min 后，再加
10. 0 mL 4 %NaOH溶液，用水定容至 25 mL，摇匀，
15 min后于 508 nm 处测定吸光度，以吸光度值 A
为纵坐标，浓度 C(μg·mL －1)为横坐标进行线性
回归，得方程 A = 0. 011 5C + 0. 003 4，r = 0. 999
9，表明浓度在 15. 936 ～ 47. 808 μg·mL －1线性关系
良好。
2. 6 精密度试验
精密量取 4. 0 mL的对照品溶液 6 份，按 2. 5 法
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测定吸光光度值，结果 RSD =0. 58 %。
2. 7 稳定性试验
精密称取干燥圆锥铁线莲叶 2. 000 g，按照 2. 2
方法制备供试液和 2. 5 方法测定，首次测定后，每
隔 10 min测定 1 次，记录吸光度值，考察其显色后
的稳定性。样品在 1. 0 h内稳定，RSD =0. 83 %。
2. 8 重复性试验
精密称取 6 份干燥圆锥铁线莲叶样品，分别按
照 2. 2 方法制备供试液和 2. 5 方法测定，以不加供
试液的相应溶液作为空白，在波长 508 nm处测定吸
光度值，RSD =0. 55 %，说明重复性良好。
2. 9 回收率试验
精密称取已知含量的圆锥铁线莲叶适量，分别
加入高、中、低 3 种浓度的对照品，按供试品溶液
制备方法制备。按 2. 5 方法操作，测定总黄酮含量，
计算回收率，结果见表 1。
表 1 芦丁加样回收率试验
编号
样品中
含量 /mg
对照品加
入量 /mg
测得
量 /mg
回收率
/%
平均回收
率 /%
RSD /%
1 1. 12 0. 91 2. 05 102. 2 100. 8 1. 74
2 1. 12 0. 89 2. 02 101. 1
3 1. 12 0. 92 2. 08 104. 3
4 1. 12 1. 13 2. 24 99. 1
5 1. 12 1. 09 2. 21 100. 0
6 1. 12 1. 15 2. 25 98. 2
7 1. 12 1. 35 2. 48 100. 7
8 1. 12 1. 36 2. 49 100. 7
9 1. 12 1. 34 2. 47 100. 7
2. 10 铁线莲属植物不同物种、不同部位总黄酮含量
的测定
参照 2. 2制备铁线莲属植物不同物种、不同部位
供试液 22份，在 508 nm处测定吸光光度值，重复测
定 3次，计算总黄酮含量及 RSD。结果见表 2、3。
表 2 铁线莲属不同物种、不同部位的总黄酮含量(x ± s)
/%
物种名称 茎 叶 地上部分
女萎 0. 508 ± 1. 451 × 10 －3 a 5. 581 ± 9. 070 × 10 －3 a 6. 090 ± 8. 439 × 10 －3 a
山木通 0. 464 ± 0. 000b 5. 487 ± 9. 070 × 10 －3 b 5. 951 ± 9. 070 × 10 －3 b
柱果铁线莲 2. 027 ± 0. 000c 2. 903 ± 7. 855 × 10 －3 c 4. 930 ± 7. 855 × 10 －3 c
钝齿铁线莲 0. 551 ± 1. 451 × 10 －3 d 3. 409 ± 9. 07 × 10 －3 d 3. 960 ± 8. 439 × 10 －3 d
毛果铁线莲 0. 502 ± 2. 514 × 10 －3 e 2. 964 ± 6. 284 × 10 －3 e 3. 465 ± 0. 102 × 10 －1 e
威灵仙 0. 482 ± 0. 000f 2. 326 ± 0. 000f 2. 807 ± 0. 000f
毛果扬子铁线莲 0. 565 ± 1. 451 × 10 －3 g 2. 170 ± 5. 027 × 10 －3 g 2. 735 ± 3. 840 × 10 －3 g
单叶铁线莲 0. 534 ± 0. 000h 1. 545 ± 2. 902 × 10 －3 h 2. 079 ± 2. 902 × 10 －3 h
圆锥铁线莲 0. 550 ± 1. 451 × 10 －3 d 1. 273 ± 1. 451 × 10 －3 i 1. 823 ± 2. 514 × 10 －3 i
毛蕊铁线莲 0. 404 ± 7. 256 × 10 －4 i 0. 952 ± 0. 000j 1. 355 ± 7. 256 × 10 －4 j
湖州铁线莲 0. 195 ± 0. 000j 0. 387 ± 7. 256 × 10 －4 k 0. 582 ± 7. 256 × 10 －4 k
注:英文字母表示不同物种同一部位的差异显著性水平(P ＜ 0. 05)
表 3 铁线莲属不同物种、不同部位
总黄酮含量双因素方差分析
变异来源 平方和 n 均方 F
A 50. 307 10 5. 031 275 519. 8＊＊
B 66. 752 1 66. 752 3 655 866＊＊
A × B 43. 037 10 4. 304 235 703＊＊
误差 8. 034 × 10 －4 44 1. 826 × 10 －5
总变异 335. 493 66
注:＊＊表示在 α = 0. 01 水平上极显著差异，A 表示不同种类，B
表示不同器官
从表 2 和表 3 可以看出，11 种铁线莲属药用植
物不同部位总黄酮含量趋势为叶 ＞茎，铁线莲属植
物叶总黄酮平均含量为 2. 636 %，茎中总黄酮平均
含量为 0. 617 %。总黄酮含量最高的为女萎叶达
5. 581 %，最低为湖州铁线莲茎仅 0. 195 %。不同
物种、同一物种不同部位间总黄酮含量都有相当的
差异。从表 2 可以看出，茎中总黄酮含量，除了圆
锥铁线莲和钝齿铁线莲差异不显著，其他种间均差
异显著，变幅为 0. 195 % ～ 2. 027 %，含量最高的
为柱果铁线莲茎，最低的是湖州铁线莲茎;不同种
间叶中总黄酮含量差异显著，变幅为 0. 387 % ～
5. 58 1%，最高的为女萎叶，最低的为湖州铁线莲
叶。地上部分总黄酮含量最高的为女萎，达
6. 090 %，其次为山木通，达 5. 591 %，最低的为
湖州铁线莲，仅 0. 582 %。总体而言，叶中总黄酮
含量高的种，茎的总黄酮含量也相对较高。
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根据茎、叶中总黄酮含量进行聚类分析，分析
11 种铁线莲属植物在聚类图上的位置关系与系统演
化上的相关性，见图 3。
图 3 11 种铁线莲属植物地上部分总黄酮含量的聚类分析图
从图 3 可知，在 L = 0. 64 处可以明显区分出 3
个区域，毛蕊铁线莲、圆锥铁线莲和单叶铁线莲的
亲缘关系较近，女萎、山木通、柱果铁线莲、钝齿
铁线莲、毛果铁线莲、威灵仙、毛果扬子铁线莲的
亲缘关系相对较近，湖州铁线莲与其他 10 种铁线莲
的亲缘关系最远。
3 结论与讨论
通过甲醇提取、硝酸铝显色、紫外分光光度法
测定，分析了铁线莲属药用植物茎和叶中总黄酮的
含量，该方法准确、快速，操作简单，重复性好，
适于铁线莲属植物不同种类和不同部位的总黄酮含
量测定。
西伯利亚铁线莲地上部分的研究表明不同部位
黄酮含量相差较大，结果为叶 ＞ 果实 ＞ 茎的含
量［17］。新疆粉绿铁线莲不同部位总黄酮含量比较的
研究也表明不同部位的黄酮含量存在差异，结果为
叶 ＞花 ＞果实 ＞茎［18］。本研究以 11 种浙江产铁线
莲属药用植物茎和叶为材料，研究发现不同铁线莲
属植物、同种不同部位总黄酮含量总体存在显著差
异，叶的总黄酮含量总体大于茎，这和前人的研究
结论大致相似，不同种类和同一种类不同药用部位
间的成分差异应主要是遗传差异引起的。
根据 11 种铁线莲属植物茎、叶及地上部分总黄
酮含量的聚类分析图，可把 11 种铁线莲属植物分为
3 类:毛蕊铁线莲、圆锥铁线莲和单叶铁线莲聚为
一类(Ⅰ区) ，女萎、山木通、柱果铁线莲、钝齿铁
线莲、毛果铁线莲、威灵仙、毛果扬子铁线莲聚为
一类(Ⅱ区) ，湖州铁线莲聚为一类(Ⅲ区)。其中Ⅰ
区主要属尾叶铁线莲组，Ⅱ区为威灵仙组，Ⅲ区为
铁线莲组，与《中国植物志》和王文采院士的观点
基本一致［1-2］，表明铁线莲属地上部分总黄酮含量和
该属植物系统演化有一定的相关性;另外根据系统
分类学观点，圆锥铁线莲应归为威灵仙组，但聚类
图显示圆锥铁线莲与毛蕊铁线莲、单叶铁线莲亲缘
关系较近，这值得更深入地研究。
近年来世界上掀起了植物药开发的热潮，黄酮
类化合物以其广谱的药理作用而引人瞩目［24］。在野
生资源日趋紧张的大环境下，开展药材新资源的研
究尤显必要。11 种铁线莲属植物地上部分总黄酮含
量除湖州铁线莲小于 1 %，其他如女萎、山木通皆
超过 5 %，因此女萎、山木通地上部分皆适合用作
黄酮类药物开发。从资源开发角度考虑，由于女萎
分布更为广泛，野生数量也较多，因此女萎地上部
分更适合用作黄酮类药物开发。深入开展铁线莲属
植物不同药用部位的药用研究，对于提高铁线莲属
药用资源的有效利用率，最终实现该类植物资源可
持续利用将起到重要作用。
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(收稿日期 2011-02-18)
Comparasion on Total Flavonoid Content from Aerial Parts of 11 Medicinal Plants of Clematis L.
FENG Ling-feng1，WENG Mei-ya1，TIAN Fu-rao2，CHEN Jian-hua1
(1. College of Chemistry and Life Sciences，Zhejiang Normal University，Jinhua 321004，China;
2. College of Biomedical Engineering ＆ Instrument Science，Zhejiang University，Hangzhou 310027，China)
［Abstract］ Objective:To find out the species and organs with higher content of total flavonoids in the aerial
parts of 11 Clematis species collected from Zhejiang province. Methods:The ultraviolet spectrophotometric method
was uesd with rutin as standard. Results: (1)There was good linearity(r = 0. 999 9)during the range of 15. 936 ～
47. 808 μg·mL －1 for rutin. The average recovery was 100. 8 % and the RSD =1. 74 %. (2)The total flavonoids from
different parts of Clematis plants were different. The leaves contained more flavone than the stems，respectively the
average content of total flavonoids in leaves and stems was 2. 636 %，0. 617 %. (3)Clematis. apiifolia leaves had the
highest total flavonoids，5. 581 %，significantly higher than others while C. huchouensis only 0. 195 % . (4)Analysis
showed that the amount of flavone in various plants and organs was significantly different. (5)Cluster analysis showed
that there was a certain correlation between content of total flavonoids in the aerial parts of 11 Clematis species and
evolution of this genus. Conclusion:This study suggested that the aerial parts of C. apiifolia and C. finetiana could be
used as drug development of total flavonoids. And this study provided reference for further research of different
species，different parts and phylogenetic correlation from medical Clematis resources.
［Key words］ Clematis L. ;Medicinal plants;Aerial parts;Total flavonoids;

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Phylogenetic correlation
信息天地 封面介绍———棉团铁线莲
棉团铁线莲 Clematis hexapetala Pall. 为毛茛科植物，以干燥根和根茎入药。
【植物形态】 直立草本。叶对生，1 ～ 2 回羽状全裂，裂片基部再 2 ～ 3 裂，先端锐尖或凸尖，网脉突出。
聚伞花序腋生或顶生，3 花。萼片 6，白色，展开，密被棉毛。雄蕊多数，心皮多数。瘦果，倒卵形，被柔毛，
宿存花柱长 2. 2 cm，羽毛状。花期 6 ～ 8 月，果期 8 ～ 9 月。
【性味与归经】 辛、咸，温。归膀胱经。
【功能与主治】 祛风湿，通经络。用于风湿痹痛，肢体麻木，筋脉拘挛，屈伸不利。
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