全 文 ：第 26卷 第 11期
2 0 08年 11月
中 华 中 医 药 学 刊
CH INESE ARCH IVES OF TRAD IT IONAL CH INESE MED IC INE
Vo.l 26 N o. 11
Nov. 2 0 0 8
中华中医药
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学刊
石荠苧属植物酚性物质组成及抗氧化活性研究
吕佩惠,余陈欢,俞 冰,吴巧凤
(浙江中医药大学药学院, 浙江 杭州 310053)
摘 要:目的: 研究石荠苧属植物酚性组成及抗氧化活性。方法: 在测定其提取物中酚性物质含量的基础上,
采用分光光度法,测定石荠苧属植物对 DPPH、脂质过氧化的消除能力和总还原力 ,并通过多元线性回归分析, 考
察了石荠苧属植物体外抗氧化活性及酚性物质含量的相关性。结果 :石荠苧属植物均具有显著的抗氧化活性, 且
自由基清除率与各提取物中总黄酮含量呈正相关。结论: 黄酮类化合物可能是其抗氧化作用的主要物质基础。
关键词:石荠苧属;黄酮; 抗氧化活性
中图分类号: R285. 5 文献标识码: A 文章编号: 1673 - 7717( 2008) 11 -2442 - 03
S tudy on Pheno lic Componen ts andAn tioxidantA ctiv ity ofM osla
LU Pe i-hu,i YU Chen-huan, YU B ing, WU Q iao-feng
( Col lege of Pharm acy, Zhe jiang Ch inese M ed ica lUniversity, H angzhou 310053, Zh ejiang, C hina)
Abstrac:t Ob jective : To study the pheno lic components and the antiox idan t activ ity in vitro of M osla. M ethod s: U-
sing the Spectropho tom e try to test pheno lic com ponents in the ex trac ts to study the rad ica l scavenging capacity o f DPPH,
lipid peroxida tion and the to tal reduc ing pow er o fM osla. Then itw as surveyed the co rre la tion be tw een the pheno lic compo-
nents and the antiox idan t ac tivity by them ultiple linea r regression ana ly sis. R esu lts: The ex tracts a ll show ed good an tiox i-
dant ac tivities and the free radica l e fficiency had a po sitive co rre lation w ith the flavone conten ts. Conclusion : The flavone
may be them a in m a te rial o f an tioxidant ac tivity.
Keyw ords: mosla; flavone; antiox idant activ ity
收稿日期: 2008 - 06 - 12
基金项目:浙江省自然科学基金资助项目 ( Y2080313)
作者简介:吕佩惠 ( 1984 - ) ,女,浙江永康人,硕士研究生。
通讯作者:吴巧凤 ( 1963 - ) ,女, 浙江浦江人,教授, 硕士研究生导
师,主要从事天然产物研究与开发。
石荠苧属 (M osla)系唇形科植物, 为多年生草本。全世
界约有 22种, 我国有 12种, 1变种, 主要集中在长江流域
以南各地。全草含挥发油、黄酮等成分,具有清热解毒、理
气化湿之功效, 主治夏日感冒、腹痛泄泻、扁桃体炎等 [1 ]。
经课题组前期研究表明,该属植物具有抗菌、抗流感病毒、
抗炎镇痛等作用 [2 ],而这些作用的发挥亦与自由基的参与
有关 [3 ]。但有关其抗氧化方面的研究尚未见报道。为了
合理利用该植物资源并确定其主要抗氧化活性成分, 本文
对该属植物水提物和醇提物进行了体外抗氧化研究。现报
道如下。
1 仪器和试药
1. 1 仪器
BS224S精密电予天平 (北京赛多利斯仪器系统有限公
司 ), TU -1900双光束紫外可见分光光度计 (北京普析通
用仪器有限公司 ) , KO - 5000超声波清洗器 (昆山超声仪
器有限公司 )。
1. 2 试剂和材料
杭州荠苧、石荠苧采自浙江杭州, 石香薷、苏州荠苧和
小鱼仙草采自浙江浦江, 经浙江中医药大学资源鉴定教研
室姚振 生教授鉴定, 分别 为唇形科植物 杭州荠苧
M oslahangchow ensis Ma tsuda、石荠苧 M. scabra、石香薷
M ch inensisMax im 、苏州荠苧 M soochow ens is Ma tsua、小鱼
仙草 M. d ian thera Max im. 。芦丁、原花色素、没食子酸 (中
国药品生物制品检定所 ) ; 大豆卵磷脂、DPPH ( sigm a公
司 )。其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 提取物的制备 [4 ]
石荠苧属 5种植物分别干燥粉碎。 ¹ 加 20倍量水
80e 恒温水浴回流提取 2次, 每次 1h, 浓缩至干, 得水提
物,真空备用; º加 20倍量 75%乙醇 80e 恒温水浴回流提
取 2次, 每次 1h, 浓缩至干,得醇提物, 真空备用。
2. 2 石荠苧属植物中酚性物质的含量测定 [4 - 5 ]
采用香草醛 /硫酸比色法, 以原花色素为标样制作标准
曲线, 测定石荠苧属植物中原花色素含量; 采用碱式铝盐比
色法,以芦丁为标样制作标准曲线, 测定其总黄酮含量; 采
用 FeC l3 -K3Fe( CN ) 6比色法, 以没食子酸为标样制作标
准曲线,测定其总酚含量。
2. 3 抗氧化活性实验 [6 - 7]
2. 3. 1 清除自由基活力 取提取物适量, 加入 25Lg /m L
DPPH甲醇溶液 3m L,快速混匀, 30m in后测定在 516nm处
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DOI：10.13193/j.archtcm.2008.11.139.lvph.049
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的吸光度,按公式计算自由基清除率: 清除率 ( % ) = ( 1 -
[DPPH ] t /[DPPH ] t= 0 ) @ 100%
其中 [DPPH ] t= 0表示 0时刻体系的吸光度: [DPPH< t
表示 30m in时体系的吸光度。
2. 3. 2 还原力测定 取提取物适量, 加入磷酸缓冲液
( 0. 2M, pH6. 6) 1. 5m L及 1%铁氰化钾溶液 1mL, 50e 保温
20m in后, 加入 10%三氯乙酸 1mL混匀, 加蒸馏水 2. 5mL
及 0. 1%三氯化铁 0. 1mL。在 700nm处测定反应液吸光度
值。吸光度值越大,表示还原力越强。
2. 3. 3 脂质体氧化法 将大豆卵磷脂分散于去离子水中,
20kH z超声波处理 30m in, 周围以冰水冷却, 制得大豆磷脂
浓度为 0. 8%的人工脂质体。取 20mL脂质体, 加入提取
物,以 10mM乙酸铜 20LL催化氧化反应, 混匀后放置于回
转式恒温水浴振荡器上, 于暗处 37e 、100r /m in进行开口
氧化,每隔一定时间测定共轭二烯氢过氧化物及丙二醛生
成量。
共轭二烯氢过氧化物 ( Conjuga ted diene hydroperox ide,
CD )的测定:取 1m L氧化液, 溶于 3m L甲醇, 在 235nm处测
定其吸光度, 以摩尔消光系数 E= 26000M - 1 # cm - 1计算脂
质体体系中共轭二烯氢过氧化物的生成量。
丙二醛 ( m alondia ldehyde, MAD)的测定:取 1. 5m L氧化
液,加入 1mLMAD溶液, 测定在 532nm处的吸光度, 以摩尔
消光系数 E= 1. 56 @ 105M - 1 # cm -1计算丙二醛的生成量。
抗氧化效果用抑制率表示:
抑制率 (% ) = ( 1 -处理组氧化产物生成量 /空白组氧
化产物生成量 ) @ 100%。
以上结果见表 1及图 1~ 3。
表 1 石荠苧属酚性物质组成及抗氧化作用结果
编号 溶剂 药材
酚性物质含量 (mg# g- 1)
原花色素 总黄酮 总酚
自然基
清除率
(% )
还原力
( OD值 )
CD抑制
率 (% )
MDA抑
制率 (% )
1
2
3
4
5
水
杭州荠苧 0. 7670 80. 78 4. 012 80. 78 0. 524 54. 92 28. 34
苏州荠苧 0. 6765 50. 05 5. 157 71. 65 0. 575 67. 90 45. 78
小鱼仙草 0. 6644 82. 86 2. 722 81. 13 0. 560 49. 14 33. 33
石荠苧 0. 5738 67. 29 2. 459 76. 64 0. 532 54. 36 28. 57
石香薷 0. 7851 55. 18 4. 057 71. 95 0. 579 60. 62 45. 45
6
7
8
9
10
75%
乙醇
杭州荠苧 0. 5497 87. 37 4. 831 86. 13 0. 534 37. 85 31. 75
苏州荠苧 0. 5557 78. 63 5. 443 86. 08 0. 592 62. 76 50. 00
小鱼仙草 0. 4531 42. 46 4. 671 75. 28 0. 600 60. 00 53. 49
石荠苧 0. 5195 75. 52 4. 431 85. 51 0. 589 57. 38 42. 86
石香薷 0. 7308 63. 61 5. 081 83. 81 0. 583 64. 54 67. 57
图 1 石荠苧属植物提取物对自由基的清除作用
由表 1和图 1~ 3可知,石荠苧属植物各提取物均具有
较强的抗氧化活性, 可提高自由基的清除率, 促进 Fe3+的
还原和抑制卵磷脂氧化产物的生成。其中, 石荠苧的抗氧
化作用最强。其水提物和醇提物均可显著抑制羟自由基的
产生,延长 CD生成的峰值时间 (较其他各提取物 CD生成
的峰值时间从 24h延长至 48h), 减少同期各时段 MDA的
生成量。
图 4 回归标准残差正态 P -P图
2. 4 酚性物质组成与抗氧化活性相关性分析
以原花色素 ( X1 )、总黄酮 ( X2 )和总酚 ( X3 )含量为横
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坐标, DPPH自由基清除率 ( Y )为纵坐标,采用 SPSS11. 5软
件对表 1结果进行线性关系考察,得方差分析表 (表 2)和
回归标准残差正态 P - P图 (图 4)。
表 2 方差分析
变异来源 自由度 SS M S F值 P值
总变异 9 289. 290
回 归 3 241. 097 80. 366 10. 006 < 0. 01
残 差 6 48. 192 8. 032
由表 2和图 4可知, P < 0. 01, 自变量 ( Xn )与因变量
( Y )服从正态分布,证明石荠苧属植物各酚性物质含量与
自由基清除率之间存在显著的线性关系。进而作多元线性
回归分析,得回归系数分析表 (表 3)。
表 3 回归系数分析
项目 总体回归系数 标准误 标准化系数 t值 P值
常数项 57. 536 8. 745 0 6. 579 0. 001
原花色素 - 13. 294 8. 416 - 0. 265 - 1. 580 0. 165
总黄酮 0. 322 0. 063 0. 866 5. 088 0. 002
总酚 2. 022 0. 965 0. 359 2. 095 0. 081
由表 3可知,石荠苧属植物酚性物质含量对自由基清
除率的总体回归方程为: Y= 57. 536 - 13. 294X1 + 0. 322X2
+ 2. 022X3。
为消除度量单位的影响, 进一步采用标准化计算,得标
准化回归方程: Y= -0. 265X1+ 0. 866X2 + 0 - 359X3。
图 5 石荠苧属植物提取物抗氧化活力与总黄酮含量的关系
在 95%可信区间内, 线性相关系数 R = 0. 9127。证明
回归方程真实、可靠, 具有统计学意义。可用于替代实验点
对实验结果进行分析,并对回归方程各项作显著性检验。
其中 ,原花色素及总酚含量对自由基清除率的影响 P
> 0. 05, 无显著性差异。而总黄酮含量 P < 0. 01, 存在显著
性差异,具有统计学意义。对自由基清除率与石荠苧属植
物水提物和醇提物进行线性关系考察,结果如图 5,总黄酮
含量与自由基清除率具有较强的相关性, 相关系数分别为
0. 9944和 0. 9462; 而与原花色素及总酚含量的相关性较差
( R2 [ 0. 2)。
同法 ,对石荠苧属植物提取物与还原力、抗脂质体氧化
作用进行相关性研究,结果表明, 两者的相关性均较差 ( R 2
[ 0. 6, P > 0. 10), 无统计学意义。
综上所述,石荠苧属植物体外抗氧化作用可能与其总
黄酮含量有关,但水提物与醇提物的清除自由基活力不相
一致, 可能与各提取物所含具体的黄酮类成分有关, 有待进
一步研究。
3 讨 论
自由基是生物体生化反应的普遍介质。现代研究表
明,许多疾病如心脑血管疾病、肝硬化、癌症以及人体衰老
等过程都与自由基的作用有关 [8 ]。目前在医疗和食品领
域使用较多的是合成抗氧化剂 ,如 BHT、BHA等, 对生物体
有潜在的毒副作用。黄酮类化合物是一种天然的抗氧化
剂,具有抗衰老、增强机体免疫力的作用。其主要通过酚羟
基与自由基进行抽氢反应生成稳定的半醌自由基,从而中
断链式反应, 达到抗氧化作用, 且高效、低毒 [9 ]。因此, 越
来越受到国内外医药工作者的重视。
本实验研究表明,石荠苧属植物均具有较强的还原力、
抗脂质体氧化和清除自由基等作用,且自由基清除率与各
提取物中总黄酮含量呈正相关。黄酮类化合物可能是其抗
氧化作用的主要物质基础。可为石荠苧属植物的开发利用
及其药理作用机制的研究提供参考。
参考文献
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