全 文 ：收稿日期:2002-06-15
基金项目:国家自然科学基金资助项目 ,批准号:30060040;39860048
＊通讯作者:刘国民(1955-),男 ,湖南祁东人 , 教授 ,农学博士 ,硕士研究生导师 , 本项目主持人。 Tel:0898-66276711 E-mail:kudingch@
hainu.edu.cn　　第一作者简介:史学群(1972-),男 ,江西九江人 ,植物病理学硕士 ,海南大学讲师。
冬青属苦丁茶不同种质材料之过氧化物酶同工酶和
酯酶同工酶研究初报
史学群 ,刘国民＊ ,徐立新 ,唐碧军 ,陈圣政
(海南大学 苦丁茶研究所 ,海南 海口 , 570228)
摘　要　根据起源地域 、类群 、物种以及形态特征的差异 , 从海南大学苦丁茶研究所种质资源圃中选取 15 份冬青属
苦丁茶种质材料进行过氧化物酶同工酶酶谱分析 , 并从冬青属5 个物种中各取 1 份种质材料进行酯酶同工酶酶谱分
析。实验结果表明:1.冬青属苦丁茶其不同物种之种质材料的过氧化物同工酶酶谱和酯酶酶谱均显示出明显的物
种间差异;2.过氧化物酶同工酶在冬青属的 5 个供试物种的所有不同种质材料中均存在一条共同的谱带(PA3),该
谱带可视为冬青属苦丁茶的特征谱带;3.不同地域来源的苦丁茶冬青种质材料其过氧化物酶酶谱显示出差异 , 而同
一地域内(或同一类群内)苦丁茶冬青的不同种质材料 , 其过氧化物酶同工酶酶谱则基本相同;4.酯酶酶谱特征显
示 ,冬青属内不同物种的苦丁茶其酯酶同工酶多态性显著。以上研究结果初步显示 , 过氧化物酶同工酶和酯酶同工
酶之酶谱分析结果可以作为判断冬青属苦丁茶种质材料的起源地域 、遗传差异 、亲缘关系以及种级水平的分类鉴定
的参考依据之一。
关键词　冬青属;苦丁茶;种质资源;过氧化物酶同工酶;酯酶同工酶
中图分类号　Q946.5　　文献标识码　A　　文章编号　1003-6563(2003)03-0046-05
A PRELIMINARY REPORTON THE PEROXIDASE ISOENZYME AND
ESTERASE ISOENZYME OF DIFFERENT GERMPLASM MATERIALS
SEVERAL KUDINGCHA SPECIES IN HOLLY
S HI X ue-qun , LIU Guo-min , XU Li-xin , TANG Bi-jun , CHEN S heng-zhen
The Kudingcha Research Institute of Hainan University , Haikou 570228 , China
ABSTRACT　According to primary statistics , there are more than 250 species o f substituting-for-tea beverage plants in
China(including subspecies , varieties and forms).Of all these substituting for-tea-beverage plants , 30 species are called
as “Kudingcha” in the different parts of China.There are at least 4 species called and used as“ Kudingcha” in Holly of Chi-
na.They are Ilex kudingcha C.J.Tseng , I. latifolia Thunb., I.cornuta Lindl.and I.pentagona S.K.Chen , Y.X.
Feng et C.F.Liang.This paper is a preliminary repo rt on the isoenzyme analysis of Kudingcha.15 germplasm ma terials of
Kudingcha , from the germplasm bank of The Kudingcha Research Institute of Hainan University , w ere selected for the
band analysis of peroxidase isoenzyme, and 5 germplasm materials from the 5 species in Holly w ere selected fo r the band
analysis of esterase isoenzyme.The experimental results are as follows:
1.The bands of peroxidase isoenzyme and that of esterase isoenzyme show ed significant species differences in the
germplasm materials of different Kudingcha species in Holly.
2.There was a common band(PA3)of peroxidase isoenzyme in all the germplasm materials of the 5 test Kudingcha
species in Holly , w hich can be considered as the characteristic band of these species.
3.The perox idase isoenzyme bands of the germplasm materials of Ilex kudingcha C.J.Tseng f rom the different
o riginating regions showed region differences;and that o f the different germplasm materials of I. kudingcha C.J.Tseng
from the same o riginating region (or in the same Taxon)w ere basically the same.
第 21 卷　第 3 期
2003 年 9 月 　　　　　　　　 贵　州　科　学GUIZHOU SCIENCE　　　　　　　　　　Vol.21 , No.3Sep.2003
4 The band characteristic of esterase isoenzyme showed that the polymorphism of the esterase isoenzyme of the differ-
ent Kudingcha species in Holly was significant.
According to the afo rementioned experimental results , the authors think that the band analy sis conclusions of peroxi-
dase isoenzyme of esterase isoenzyme can be considered as one of the reference bases fo r the determination of the originating
reg ion , gene tic difference , relationship of the germplasm materials of Kudingcha species in Holly , as well as fo r the classifi-
cation on the species level.
KEY WORDS　Holly(I lex);Kudingcha;germplasm resources;peroxidase isoenzyme;esterase isoenzyme
0　引言
“苦丁茶”是我国民间使用的一大类代茶植物的
统称 。据刘国民(2002)统计 ,在我国不同地域或不
同民族中 ,至少有 30个物种(包括 1个亚种和 2个
变种)作为“苦丁茶”饮用 、药用或饮药两用。其中冬
青属中 主 要 有 苦 丁 茶冬 青 (Ilex kudingcha
C.J.Tseng),大叶冬青(I.lati folia Thunb.)枸骨
(I.cornuta Lindl.)以及五棱冬青(I.pentagona
S.K.Chen , Y.X.Feng et C.F.Liang)等 4种植物
在我国民间被称为“苦丁茶” ,并较普遍地被饮用或
药用〔1～ 4〕 。
在冬青属的上述被称之为(和被用作)苦丁茶的
原植物中 ,枸骨因在形态上的极显著特征(叶片顶端
有坚硬刺齿 3个 ,叶片两侧各有尖硬刺齿 1 ～ 3个),
学术界对其种名的认定至今没有任何争议或混淆 。
大叶冬青与苦丁茶冬青是近缘种 ,因其形态特
征 、保健作用及药用功效多有相同或相似(但口感不
同),故在近 20年所发表的有关苦丁茶的研究论文
中 ,不少学者往往将二者混为一谈 ,或将大叶冬青认
定为苦丁茶冬青 ,或将苦丁茶冬青认定为大叶冬青 。
五棱冬青是俸宇星等人于 1998 年发表的新
种〔5〕 ,其最显著的特征是主茎或分支1 ～ 3年生部位
具 5条锐棱角 ,叶中脉于叶背呈锐骨状凸起 ,叶背面
不能观察到侧脉 ,或侧脉于叶背面极不明显。此外 ,
刘国民等人在近年的苦丁茶资源普查中发现 ,在五
棱冬青与苦丁茶冬青之间存在若干过渡类型 ,其形
态性状介于二者之间 ,或不典型。这些过渡类型的
分类学地位有待深入研究 。
苦丁茶冬青在所有各种“苦丁茶”中目前是人工
栽培面积最大 、产品价格最昂贵 、在国内外影响最大
的 、被认为是“正宗苦丁茶”的种类 ,但对其种名的认
定却走过了不少弯路 ,有过不少争议 ,乃至部分学者
最近(1998)所提出的经典形态分类结论仍有争议 ,
或者有值得商榷之处尚有待于用现代分子遗传学和
生物化学手段予以验证 。另一方面 ,刘国民等人根
据近年来采集到的标本和对野生与人工栽培的苦丁
茶种质资源实地考察的结果 ,认为可以依据形态特
征 、地理起源及农艺性状等因素将 I.kudingcha
C.J.Tseng 这一学名之下所涵盖的冬青属苦丁茶种
质资源划分为几个较大的类群 ,其中个别类群的形
态差异甚至比较显著。至于是否可以从中划分出变
种 、亚种或从中分出新种的问题 ,如仅仅根据某些形
态差异来确定 ,似嫌证据不足或有失武断。因为苦
丁茶冬青是一种多年生大乔木 ,从实生幼苗定植到
开花结果 ,至少需 5 ～ 6 个年头 ,从开花到果实成熟
一般需要历 6 ～ 7个月 ,如果仅仅根据植株的表型
(形态特征),或结合传统的杂交手段来研究冬青属
苦丁茶种质资源材料的遗传差异及分类学地位 ,不
仅极为费时 ,而且某些特殊性状的表达往往还受到
植株年龄和其所处的环境(诸如季节 、气候 、土壤 、水
肥条件等因素)的限制。因此 ,仅用形态学研究手段
难以在较短时间内完成这一任务。有鉴于此 ,刘国
民等人认为应该综合运用形态学研究 、同工酶分析
及 RAPD技术系统地研究冬青属苦丁茶种质资源
材料各类群之间以及同一类群不同种质材料之间的
遗传差异与亲缘关系 ,再根据这些研究结果验证以
往经典的形态分类学中关于冬青属苦丁茶分类学地
位的有关结论 ,或者根据研究结果将其予以修正。
本文仅报道对冬青属苦丁茶不同种质材料之过氧化
物酶同工酶和酯酶同工酶的初步研究结果 ,有关冬
青属苦丁茶之同工酶分析的系统研究结果以及形态
学研究与 RAPD分析的研究结果将另文报道 。
1　材料与方法
2.1.1　材料
实验材料:从海南大学苦丁茶研究所种质资源
圃中的冬青属苦丁茶种质材料中选取有代表性的种
质材料作为供试植株 ,从特定的供试植株上取幼嫩
芽尖作为实验材料 。
474期　　　史学群 ,等:冬青属苦丁茶不同种质材料之过氧化物酶同工酶和酯酶同工酶研究初报
化学药品:主要化学药品购自上海生工生物技
术公司和北京经科公司 ,常规药品为国产分析纯。
主要仪器:EBA -12R型冷冻离心机 , DYY-
III5电泳仪 ,Bio-Rad电泳槽 。
1.2　方法
1.2.1　过氧化物酶酶谱分析
1.2.1.1　酶液提取
分别称取供试材料鲜嫩叶 0.3g , 剪碎后放入
1.5ml离心管中 ,再加入液氮研成粉末 ,然后加入
1ml提取缓冲液(0.01mol/L KCl-0.3mol/L 蔗糖
-0.05mol/L 磷酸缓冲液 , pH7.2),用手摇均匀;于
4℃和 12000r/min 条件下离心 20min;取上清液倒
入另一只 1.5ml离心管 ,同样条件再离心一次 。上
清液用于电泳分析 ,贮藏于-20℃冰箱中备用 。
1.2.1.2　电泳分析
采用聚丙烯酰氨凝胶电泳法。分离胶质量浓度
7.0%,pH8.9;浓缩胶质量浓度 2.5%, pH6.7。电
极缓冲液为 pH8.3 的 Tri-甘氨酸系统 。电泳在
4℃冰箱中进行 , 电泳开始 20 分钟时电流设为
20mA ,20min 后调至 25 mA 。电泳进样量为 40μl ,
以 5μl 0.1%溴酚蓝作为前沿指示剂 。过氧化物酶
同工酶的染色采取醋酸联苯胺法〔6〕 。
1.2.2　酯酶同工酶酶谱分析
酶液提取:同过氧化物同工酶酶。
酯酶同工酶的电泳分析:同过氧化物酶同工酶 。
酯酶同工酶染色液的配制:EST 活性染色以α
-醋酸萘酯作底物 ,坚牢蓝 RR盐作为显色剂 。染
色后以 7%醋酸脱色 、固定和保存〔7〕 。
2　结果分析
2.1　冬青属苦丁茶不同种质资源材料的过氧化物
酶同工酶分析
综合分析图 1 的酶谱和表 1的资料可以看出:
供试的冬青属苦丁茶种质资源材料其过氧化物酶同
工酶酶谱显示出明显的种间差异 ,可以根据过氧化
物酶酶谱之不同将冬青属的 4个不同物种内的苦丁
茶种质材料在种级水平上区分开来 。分别属于 4个
不同物种的所有供试的 15 份冬青属苦丁茶种质资
源材料均存在一条共同的谱带(PA3),该谱带可视
为冬青属苦丁茶的特征谱带。就同一物种(苦丁茶
冬青)的不同种质材料而言 ,不同起源地域的种质材
料 ,其过氧化物酶酶谱显示出一定的地域性差异 。
例如 ,起源于海南省保亭县和白沙县的两份种质材
料(泳道 1和 2)其过氧化物酶同工酶酶谱相同 ,即
除了各有三条较强的谱带外(PA2 、PA3 和 PA4),另
各有一条很弱的谱带(PA5)。起源于广东省的 6份
种质材料(泳道 3 、4 、5 、6 、7和 8)其过氧化物酶同工
酶酶谱基本相同 ,即它们各有 4 条基本谱带(PA2 、
PA3 、PA4 和 PA5),其中 PA2 、PA3 和 PA4 的强度和
迁移率相同 ,但 PA5 谱带的强度和迁移率则依种质
材料在广东省境内的地域分布而略有差异 。其中第
3和第 4泳道的 2份种质材料均来自广东省英德市
石灰甫镇木朗村 ,二者的 PA5 谱带强度相对较弱 ,
第 5和 6泳道的 2份种质材料均来自广东省清新县
石潭镇大坑村 ,二者的 PA5谱带强度均较强 ,泳道 7
和 8的两份种质材料均来自广东大埔县岌头 ,二者
的强度均较弱 ,二者其迁移率较其他 4份种质材料
(3 、4 、5和 6泳道)亦略有差异(图 1)。两份五棱冬
青种质材料的过氧化物酶同工酶酶谱明显有别于其
他 3个物种 ,不过 ,这 2份属于同一物种(五棱冬青)
的不同地域来源的种质材料 ,其过氧化物酶酶谱相
似 ,但谱带强弱有较大差异。来源于浙江省不同县
份的 3份大叶冬青野生种质种料其过氧化物酶同工
酶酶谱相同 ,均有 PA3 和 PA4 2条强谱带和 PA5 弱
谱带 ,其物种特征显著 ,明显有别于其他 3个物种的
过氧化物酶同工酶酶谱 。枸骨的过氧化物酶同工酶
酶谱与其他三个物种的差异最大 。
两份分别来自海南省海口市的(泳道 14)和湖
南省祁东县的(泳道 15)枸骨种质材料均只显示出
一条谱带(PA3)。以上分析显示 ,就供试的 4 个物
种之间的亲缘关系而言 ,大叶冬青与苦丁茶冬青之
间亲缘关系较为密切;其次为五棱冬青与苦丁茶冬
青及大叶冬青之间亲缘关系较近;枸骨与其他三个
物种之间遗传差异最大 。以上同工酶酶谱分析结论
与供试物种的形态差异(尤其是叶片的形态差异)相
符。
2.2　冬青属不同物种的苦丁茶种质资源材料之酯
酶同工酶分析
冬青属 5个不同物种的酯酶同工酶分析结果如
图 2所示 。其中冬青(Ilex purpurea HassK.)是冬
青属的代表性物种 ,在该研究中仅用作参照 ,未为人
们作为“苦丁茶”使用 。如图 2所示 ,该 5个冬青属
物种的酯酶同工酶多态性显著。这表明 ,冬青属 5
个供试的不同物种之间的遗传差异较大 ,可以用酯
酶同工酶的分析结果作为其种级鉴定的参考依据之
48 贵　州　科　学 　　　　　　　　　　　　　　　　21卷
一。与过氧化物酶同工酶酶谱中的情况相类似 ,酯
酶同工酶在冬青属不同物种之间也存在着一条共同
的谱带(E4),这条谱带亦可看作是酯酶同工酶在冬
青属中的特征谱带(其中冬青的 E4 带为强谱带 ,其
余 4个物种的 E4带均为弱带)。大叶冬青有 E2 ,E4
和 E5 三条谱带 ,其中 E2 谱带较强 ,其余 2条相对较
弱;枸骨有 E2 、E4 两条谱带(其中 E2 为强带 , E4 为
弱带);冬青有 E2 和 E4 两条强谱带;五棱冬青有 2
条强谱带(E1和 E5)及 2条弱谱带(E3 和 E4);苦丁
茶冬青则有 E2 、E3 和 E4 等 3条弱谱带。除了五棱
冬青以外 ,其他 4个物种均有 E2较强谱带。与过氧
化物酶同工酶酶谱相类似 ,酯酶同工酶的酶谱分析
结果也显示 ,大叶冬青和苦丁茶冬青显示出比较密
切的亲缘关系 ,五棱冬青的酯酶酶谱似乎介于大叶
冬青与苦丁茶冬青之间 ,这提示该 3个物种是亲缘
关系比较密切的近缘种。枸骨则以强谱带 E2 作为
种的特征而与其他 4 个物种明显区分开来 ,冬青则
以强谱带 E4作为种的特征而与其他 4个物种明显
区分开来 。酯酶同工酶的酶谱分析结果与冬青属该
5个物种的形态特征相符合 。
表 1　用于过氧化物酶同工酶分析的冬青属
苦丁茶种质资源材料
Tab.1　Germplasm materials of Kudingcha in Holly used for
peroxidase isoehzyme analysis
泳道 资 源 圃原始编号 种　　　　　名 起　源　地　域
1 C-015 I lex kudingcha C.J.T seng 海南省保亭县
2 W-001 I lex kudingcha C.J.T seng 海南省白沙县青枞乡
3 W-003 I lex kudingcha C.J.T seng 广东省英德市石灰甫镇木朗村
4 W-004 I lex kudingcha C.J.T seng 广东省英德市石灰甫镇木朗村
5 W-006 I lex kudingcha C.J.T seng 广东省清新县石谭镇大坑村
6 W-007 I lex kudingcha C.J.T seng 广东省清新县石谭镇大坑村
7 W-010 I lex kudingcha C.J.T seng 广东省大埔县岌头
8 W-012 I lex kudingcha C.J.T seng 广东省大埔县岌头
9 WL-003 I lex pentagona S.K.Chen ,
Y.X.Feng et C.F.Liang 广西(自湖南农业大学引种)
10 WL-011 I lex pentagona S.K.Chen ,
Y.X.Feng et C.F.Liang 湘西(自湖南农业大学引种)
11 D-001 I lex lati folia Thunb. 浙江省淳安县
12 D-002 I lex lati folia Thunb. 浙江省缙云县
13 D-009 I lex lati folia Thunb. 浙江省磐安县
14 GG-01 I lex cornuta Lindl. 海南省海口市
15 GG-03 I lex cornuta Lindl. 湖南省祁东县
　　图 1　冬青属苦丁茶不同种质资源材料过氧化物酶
同工酶酶谱
　　Fig.1　Spectra of peroxidasl isoenzyme of Kudingcha
in Holly from different germplasm materials
图 2 　冬青属 5 个物种的酯酶同工酶酶谱
　　Fig.2　Five isoenzyme spectra of esterase isoenzyme in
Holly
3　讨论
同工酶是指那些催化功能相同而分子结构有差
异的酶蛋白分子 ,它在高等植物中普遍存在 ,是基因
表达的直接产物。同工酶谱带的多少 、迁移率的变
化情况在很大程度上都由结构基因所控制 ,因而根
494期　　　史学群 ,等:冬青属苦丁茶不同种质材料之过氧化物酶同工酶和酯酶同工酶研究初报
据同工酶的酶谱分析可以比较直接地判断基因的存
在与表达规律。正因为如此 ,在过去的三十多年中 ,
同工酶被广泛地用于研究物种起源 、进化 、分类及品
种鉴定〔8 ～ 16〕。作为研究冬青属苦丁茶种质资源的
遗传差异 、亲缘关系以及分类鉴定的研究手段之一 ,
本项目根据形态特征和地理起源将冬青属苦丁茶种
质材料划分为若干较大的类群并进行同工酶分析 ,
以初步确定这些类群之间的遗传差异及亲缘关系 。
如上所述 ,过氧化物酶同工酶和酯酶同工酶的初步
研究结果显示 ,苦丁茶冬青 、大叶冬青 、五棱冬青 、枸
骨等 4个冬青属苦丁茶的种间遗传差异以及冬青属
苦丁茶的最重要种类苦丁茶冬青不同起源地域之种
质材料的遗传差异均能比较明显地反映在以上两种
同工酶的酶谱差异上 ,也就是说 ,过氧化物同工酶和
酯酶同工酶分析结果可以作为判断冬青属苦丁茶种
质材料的起源地域 、遗传差异 、亲缘关系以及种级水
平的分类鉴定参考依据之一。
表 2　5个用于酯酶同工酶分析的冬青属物种
〗Tab.2 　 Isoenzyme analysis of Kudingcha from five
species in Holly
泳道 物　　　　　种
1 大叶冬青(Ilex lati falia Thunb.)
2 枸骨(Ilex cornuta Lindl.)
3
冬青(I lex purp urea Hassk.)(非“苦丁茶” , 仅作参
照)。
4
五棱冬青(Ilex pentagona S.K.Cheng , Y.X.Feng et
C.F.Liang)
5 苦丁茶冬青(Ilex kudingcha C.J.Tseng)
同工酶是基因表达加工后的产物 , 它仅仅是
DNA全部多态性的一部分 ,而且其特异性容易受到
环境条件和发育阶段的影响 ,而且同工酶标记的数
量亦有限 。因此 ,为了详尽地研究冬青属苦丁茶众
多性状不同的种质材料之间的遗传差异性 ,尤其是
同一类群之中亲缘关系较近的材料之间的遗传差
异 ,仅靠同工酶分析显然还不能够满足需要 。本研
究项目(国家自然科学基金资助)已计划综合应用形
态学研究 、同工酶分析及 PARD技术系统地研究冬
青属苦丁茶种质资源材料各类群之间以及同一类群
中不同种质材料之间的遗传差异与亲缘关系 ,再根
据这些研究结果验证以往经典的形态分类学中关于
冬青属苦丁茶分类学地位方面有争议的结论 ,或者
根据研究结果将其予以修正 。有关形态学研究及
RAPD分析研究结果将陆续另文报道。本文所报道
的仅是部分冬青属苦丁茶种质材料的过氧化物酶同
工酶和酯酶同工酶的初步研究结果 ,更为系统和详
尽的同工酶分析研究结果亦将另文报道。
参考文献
〔1〕　刘国民.苦丁的经济价值与海南岛发展苦丁的可行性分析〔J〕
.海南大学学报(自然科学版).1994 , 12(14):324～ 327
〔2〕　刘国民.绿色黄金苦丁茶〔J〕.植物杂志 , 1997 , 136(2):15
〔3〕　刘国民.海南岛野生苦丁茶树的发现及其植物学特征特性的
观察〔J〕.海南大学学报(自然科学版), 1997 , 15(2):129～ 133
〔4〕　刘国民.浅谈新资源食品与苦丁茶产品卫生管理〔J〕.热带林
业.1999, 27(3):126～ 132
〔5〕　俸宇星 ,陈书坤 ,赵瑞峰 ,等.中国冬青属苦丁茶名实辨证〔J〕.
植物分类学报 , 1998 , 36(4):353～ 358
〔6〕　史学群 ,宋海超 ,郑服丛.过氧化物酶 、过氧化物酶同工酶.酯
酶同工酶与橡胶树抗炭疽病的关系〔J〕.海南大学学报(自然
科学版), 2002 , 20(2):140～ 144
〔7〕　胡能书 ,万贤国编.同工酶技术及其应用〔M〕.湖南科技出版
社 , 1985
〔8〕　吴少伯.植物组织中蛋白质及同工酶的聚丙烯酰胺凝胶盘状
电泳〔J〕.植物生理学通讯 , 1979 ,(1):30～ 33
〔9〕　汪祖华.陆振翔.郭洪.李 、杏 、梅亲缘关系及分类地位的同
工酶研究〔J〕.园艺学报.1991 , 18(2):97～ 101
〔10〕　陈家泉,柯曙明 ,林日高 ,等.微波处理等保鲜方法对芒果贮
藏期间过氧化物酶同工酶的影响〔J〕.华南农业大学学报 ,
1997 ,18(4):26～ 30
〔11〕　余建华 ,廖树树 ,宋同明 ,等.玉米杂交种 、自交系鉴定技术的
研究进展(综述)〔J〕.中国农业大学学报.1988 , 3(1):68～
74.
〔12〕　程家胜 ,刘捍中 ,等.关于苹果属树亲缘关系的初步探讨———
过氧物酶同工酶分析〔J〕.园艺学报 , 1986 , 13(1):1～ 6
〔13〕　方德秋 ,等,应用同工酶进行柑桔分类及其进化研究.植物分
类学报〔J〕.1993 ,31(4):329～ 352
〔14〕　钟万炎 ,等.柑桔种质资源过氧化物同工酶分析〔J〕.植物分
类学报 , 1991 , 29(5):418～ 422
〔15〕　刘舒芹 ,沈德绪 ,等.龙眼品种过氧化物酶与多酚氧化酶同工
酶分析及亲缘关系〔J〕.园艺学报 , 1988 , 15(4):217～ 222
〔16〕　成镇占 ,杨文衡.根据同工酶谱对核桃属十个种分类的研究
〔J〕.园艺学报, 1987 , 12(2):90～ 95
50 贵　州　科　学 　　　　　　　　　　　　　　　　21卷