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女贞属苦丁茶中总黄酮的含量测定
张倩茹，南 莹，娄方明，黄燮南
（遵义医学院药学院，贵州遵义 563000）
[摘 要] 目的 测定贵州不同产地苦丁茶总黄酮化合物的含量。方法 L9 (34) 正交试验优选提取条件，用比色法测
定苦丁茶中总黄酮化合物含量。结果 最佳提取条件为：用 60倍 90%乙醇提取苦丁茶粗粉 2次，每次 1h，用比色法
测定总黄酮化合物的含量。芦丁标准品在 0.4868 ~2.434mg浓度范围线性关系良好，线性方程为：y=0.3139x-0.0062，
r=0.9960。平均回收率为 98.77%，RSD为 1.5%。贵州多个产地的苦丁茶中总黄酮的含量均在 30%以上。结论 贵州
不同产地的苦丁茶中总黄酮的含量较高且存在差异，本方法方便，可靠，重复性好，可用于苦丁茶中总黄酮的含量
测定。
[关键词] 苦丁茶；女贞属；总黄酮；比色法
[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1000-2715 (2011) 01-0079-03
The content determination of flavonoids in
(Pharmacy department, Zunyi Medical College, Guizhou Zunyi 563000)
[Abstract] Objective To determinate the content of total flavonoids in Ligustrum Kudingcha from different areas of Guizhou
Provice. Methods L9 (34) orthogomnal test was used to optimize the best extract conditions of flavonoid in Kudingcha,
and the contents were detected by colorimetry. Results The optimum extracting factors were 60 times of 90% alcohol, refluxing
and extracting for 1h, for 2 times. Lutin had a good linear relationship at the range of 0.4868~2.434mg/ml, the linear equation
was: y=0.3139x-0.0062, r=0.9960, average recovery was 98.77% with RSD 1.5%. The counts of flavonoids in most samples
were more than 30%. Conclusions According to this reserch, the contents of flavonoids in Kudingcha from different areas
were high and different. This method was realible, simple and convenient, and could be used for content determination of lo-
avonoids in kudingcha.
[Key words] ; flavonoids；colorimetry
苦丁茶是我国南部及西南部民间的传统饮品，
具有有利祛湿、消炎退热、清心明目、提神醒脑的功
效[1]。苦丁茶的植物来源可以分为冬青科冬青属
（Ilex）和木犀科女贞属（ ），其中冬青属的
植物有冬青 Nex kudingcha C. J. Tseng、大叶冬青
I. latifolia Thunb、枸骨 I. cornuta Lindl. et part.等
[2]。而木犀科来源的苦丁茶多见于我国南部及西南
部地区，原植物有紫茎女贞 L. purpurascens Y. C.
Yang、丽叶女贞 、女贞
、粗壮女贞 .等[2~4]。经
学者考证，贵州产苦丁茶的原植物以女贞属植物粗
壮女贞为主[4]。苦丁茶中含有萜类、黄酮类、多酚类、
苯丙素类、挥发油等多种化学成分[5]。由于黄酮类
化合物种类繁多且结构复杂，并具有抗菌消炎、抗氧
化、消除人体自由基、抗癌、调节心血管系统、内分泌
系统、免疫系统等多种明确的药理作用[6~8]，一直以来
都是国内外研究的热点。本文用正交实验优选提取
条件，并测定贵州不同产地的女贞属苦丁茶中总黄
酮的含量，本研究有利于进行品质评判和品种筛选，
[收稿日期]2010-11-20
[基金项目]贵州省卫生厅项目D-372；遵义市红花岗
区科技局项目 E-079，遵义医学院立项项目 H-22。
[作者简介] 张倩茹（1982—），女，硕士，从事药物分
析、中药质量标准研究工作。
第 34卷第 1期 遵 义 医 学 院 学 报 Vo1.34 No.1
2011年 2月 ACTA ACADEMIAE MEDICINAE ZUNYI Feb. 2011
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并为今后的药学研究提供依据。
1 仪器与试药
1.1 试剂 芦丁对照品（美国 treechem）、水为蒸馏
水，其他试剂均为分析纯。
1.2 药材 市售苦丁茶样品共 10种，产地分别为贵
州湄潭、正安、道真、务川、余庆、新舟、绥阳。经笔者
鉴定，样品原植物均来源于女贞属。
1.3 仪器 FA2004N电子天平（上海精密科学仪器
有限公司），BS-244S十万分之一电子天平（赛多利
斯仪器（北京）有限公司），TU-1901双光束紫外可
见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。
2 方法与结果
2.1 样品溶液制备
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称定芦丁对照品
24.34mg至 50ml的容量瓶中，甲醇溶解并定容至
刻度，摇匀，即得对照品溶液，浓度为 0.4868mg/ml，
4℃保存。
2.1.2 供试品溶液的制备 取约 1g苦丁茶粉，精密
称定，乙醇溶液热回流提取 3次，每次 1h，合并提取
液，滤过，滤液回收乙醇，定容至 100ml，摇匀，精密
吸取 2.0ml溶液至 10ml量瓶，用水定容至刻度，即
得供试品溶液。
2.2 显色条件 取适量样品溶液于 25ml量瓶中，
加水至 6.0ml，精密加入 5%亚硝酸钠溶液 1.0ml，放
置 10min，再加 10%硝酸铝溶液 1.0ml，放置 6min，
加 5%氢氧化钠溶液 10.0ml，用蒸馏水定容至刻度，
摇匀，放置 15min后测定吸光度值，同法以蒸馏水
为空白。扫描最大紫外吸收波长，芦丁标准品与供
试品溶液显色后的最大吸收峰为 506nm，与文献报
道一致[10]，因此，选用 506nm作为检测波长，紫外扫
描图谱见图 1、2。
图1标准品UV-Vis扫描图谱 图2苦丁茶样品UV-Vis扫描图谱
2.3 线性关系考察 分别精密吸取浓度为 0.4868mg/
ml对照品溶液 1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml
至 25ml量瓶中，按 2.2项下方法测定 A506。以吸
光度 A为横坐标，芦丁质量（mg）为纵坐标，绘制标
准曲线，计算回归方程为 y=0.3139x~0.0062，
r=0.9960，结果表明，芦丁在 0.4868~2.434mg范围
内，质量与吸光度具有良好的线性关系。
2.4提取工艺优化
2.4.1 正交设计 以提取倍数、乙醇浓度、提取时
间、提取次数四因素作为考察对象，采用(L9(34))正
交实验方案，研究最佳提取条件，因素水平见表 1，
正交实验结果与极差分析见表 2，方差分析见表 3。
表 1 因素水平表
编号 A 提取倍数 B 乙醇浓度(%) C 提取时间（h） D提取次数
1 20 90 1 3
2 40 80 2.5 2
3 60 70 1.5 1
表 2 正交实验结果与极差分析
试验序号 提取倍数A 乙醇浓度 B 提取时间 C 提取次数D 黄酮提取率（%）
1 1 1 1 1 30.6
2 1 2 2 2 30.5
3 1 3 3 3 30.0
4 2 1 2 3 37.5
5 2 2 3 1 35.5
6 2 3 1 2 38.8
7 3 1 3 2 40.8
8 3 2 1 3 39.4
9 3 3 2 1 37.8
K1 30.367 36.300 36.267 34.633
K2 37.267 35.133 35.267 36.700
K3 39.333 35.533 35.433 35.633
R 8.966 1.167 1.000 2.067
表 3 方差分析 (F（2，0.05）=19)
因素 偏差平方和 自由度 F比 F临界值 显著性
A 132.282 2 76.819 9.000 **
B 2.109 2 1.225 9.000
C（误差） 1.722 2 1.000 9.000
D 6.409 2 3.722 9.000
注：“**”表明有显著性差异；“*”表明有差异
2.4.2 结果分析 由表 3进行直观分析，苦丁茶的
极差数据 RA>RD>RB>RC，优先顺序为 A>D>B>C，
且 A3B1C1D2方案较佳。因此最佳提取方案为
A3B1C1D2，即用 60倍 90%乙醇提取 2次，每次 1h。
2.5方法学考察
2.5.1 精密度试验 精密吸取 3.0ml芦丁标准品
（C=0.4868mg/ml）6份，显色后测定A506，平均吸光
度为 0.462，RSD为 0.3%。结果表明仪器精密度良
好。
2.5.2 稳定性试验 取约 1g苦丁茶粗粉（道真，以
下同），精密称定，按 1.3项下最佳提取条件制备供
遵 义 医 学 院 学 报 34卷
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试品溶液，精密吸取 2.0ml供试品溶液显色后考察
30nim内稳定性。结果表明，供试品溶液显色后在
30min内稳定性良好，RSD为 0.07%。
2.5.3 重复性试验 取苦丁茶粗粉 6份，精密称定，
分别制备供试品溶液，精密吸取 2.0ml供试品溶液，
显色后测定 A506。测得苦丁茶样品中总黄酮的含量
为 36.9%，RSD为 1.2%，结果表明本方法重复性良
好。
2.5.4 加样回收试验 取约 0.5g已知总黄酮含量为
3.69%的苦丁茶粗粉 9份，精密称定，按 2.4.2项下
方法制备供试品溶液，分别吸取 2.0ml供试品溶液
至 25ml量瓶中，按比例精密加入芦丁对照品溶液，
显色后测定吸光度，计算回收率，平均回收率为
98.77%，RSD为 1.5%，表明方法准确性好。加样回
收率试验结果见表 4。
表 4 加样回收试验结果（n=9）
编号 称样量(g) 样品含量（mg） 加入量（mg）理论值（mg）回收率（%）
平均回收
（%） RSD(%)
1 0.4955 0.7232 0.5842 1.3152 101.3
2 0. 4957 0.7296 1.3188 100.9
3 0.4964 0.7276 1.3020 98.32
4 04975 0.7280 0.7302 1.4485 98.67
5 0.4981 0.7284 1.4471 98.43 98.77 1.5
6 0.4998 0.7236 1.4376 97.78
7 0.4995 0.7168 0.8762 1.5703 96.86
8 0.5009 0.7220 1.5769 97.57
9 0.5017 0.7192 1.5872 99.06
2.6 总黄酮含量测定 取不同产地的苦丁茶样品，按
2.4.2项下方法制备供试品溶液，用外标一点法计算
含量，含量测定结果见表 5。
表 5 含量测定结果
产地
含量（%）
平均含量（%）
1 2
湄潭 33.0 32.1 32.6
正安 33.6 33.8 33.7
道真 37.1 36.9 37.0
务川 29.4 30.5 30.0
余庆（包装） 44.8 41.9 43.4
余庆（散装） 44.0 42.2 43.1
新舟Ⅰ 31.1 31.4 31.3
新舟Ⅱ 35.3 35.3 35.3
绥阳Ⅰ 35.0 33.3 34.2
绥阳Ⅱ 22.1 21.8 22.0
3 讨论
目前测定黄酮化合物含量的方法主要有比色
法、高效液相色谱法等[10]，由于比色法具有灵敏度
高，稳定性好等优点，并能测定黄酮类化合物的总含
量，因此本实验用比色法作为含量测定方法。
根据 L9（34）正交试验优选苦丁茶总黄酮的提
取条件，主要考察提取倍数、乙醇浓度、提取时间、提
取次数对提取率的影响。对实验数据进行直观分析
和方差分析，两种分析方法的结果一致。
根据含量测定结果，10种样品的总黄酮含量多
为 3.0%以上，其中余庆产苦丁茶总黄酮含量最高达
43.4%，绥阳产苦丁茶含量最低为 22.0%，表明不同
产地的苦丁茶中总黄酮的含量存在一定差异。与文
献报道相比[11]，本研究中测得的女贞属苦丁茶总黄
酮化合物含量较高。用比色法测定总黄酮类化合物
的含量，具有灵敏度高、专属性强的特点，可以作为
苦丁茶中黄酮类化合物的含量测定方法。
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[责任编辑：王福军]
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