全 文 ：基金项目:成都中医药大学重点科研基金资助
作者简介:裴瑾 , 女 , 1970 年 9月生;博士研究生在读;研究方向:中药品种 、品质与药效相关性研究。
中药研究
分光光度法测定金丝桃属药用植物
总金丝桃素和总黄酮的含量
裴瑾　万德光　李昌志　宋波
(成都中医药大学 药学院 , 四川成都　610075)
摘　要:　目的　比较金丝桃属药用植物有效部位的含量 , 为筛选新的药用品种及其品质定量评价提
供参考依据。方法　采用分光光度法测定金丝桃属 4组 7种 1亚种药用植物中 , 总金丝桃素和总黄酮的含
量。结果　该属 8种植物中 , 金丝桃组和地耳草组的两种植物几乎不含金丝桃素 , 而在检出金丝桃素的贯
叶连翘组和遍地金组中 , 以贯叶连翘含量较高 。在总黄酮含量的测定中 , 所测样品的含量在 2%～ 4%之
间 , 其中以川滇金丝桃含量最高。结论　本方法简便 , 快捷 , 重现性好。
关　键　词:　金丝桃属;分光光度法;总金丝桃素;总黄酮
中图分类号:　R284.2;R931.71　　文献标识码:A　　文章编号:1004-0668(2002)04-0043-03
　　藤黄科金丝桃属(Hypericum L.)植物在我国有8
组55种 8亚种 ,其中约有 1/3的种类在民间用于治
疗多种疾病 。近年来的研究表明 ,贯叶连翘提取物
有抗抑郁作用 ,已成为国内外研究的热点。并认为
该属植物所含的二蒽酮类化合物金丝桃素 ,是抗抑
郁的主要有效成分之一 。其槲皮素 、芦丁 、槲皮苷 、
金丝桃苷等黄酮 、黄酮醇和黄烷醇类成分则具有抗
炎 、抗病毒 、收敛止血 、止泻等功能 ,是极具开发潜
力的药用植物。因而我们对金丝桃属 4组 7种 1亚
种药用植物中的总金丝桃素 、总黄酮的含量进行了
测定 ,为筛选新的药用品种以及为其品质定量评价
提供参考依据 ,现将结果报告如下。
1　材料 、方法及结果
1.1　实验材料
本实验所采用的样品药材均采自野外 ,并经成都
中医药大学万德光教授鉴定。具体品种与来源见表1。
表 1　样品品种及来源
编号 组别 品种 采集地 采集 药用部位
1
2
金丝桃组 Ascyreia 金丝梅 H.patulum川滇金丝桃 H.forrestii
峨眉山
汶川县
2000-07
2000-08
地上部分
地上部分
3 地耳草组 Spachium 地耳草 H.japonicum 峨眉山 2000-07 地上部分
4
5
遍地金组 Adenosepalum 遍地金 H.wightianum subsp.wightianum察隅遍地金 H.wightianum subsp.axillare
峨眉山
卧龙　
2000-07
2000-09
地上部分
地上部分
6
7
8
贯叶连翘组 Hypericum
贯叶连翘 H.perforatum
元宝草 H.sampsonii
扬子小连翘 H.faberi
茂县　
峨眉山
峨眉山
2000-07
2000-08
2000-07
地上部分
地上部分
地上部分
1.2　仪器与试药
Uv-8500 型紫外/可见分光光度计(上海天
美);芦丁对照品(中国药品生物制品检定所 ,批号:
0080-9705);所用试剂均为分析纯 。
1.3　总金丝桃素含量测定
1.3.1　方法学考察
(1)提取条件考察:取贯叶连翘粉末 2.0 g ,精密
称定 ,分别采用甲醇 、甲醇:吡啶(1∶1)、吡啶各 20
mL超声提取 20 、40 、60 min ,再室温避光放置 3 h ,过
滤 ,滤液分别采用甲醇 、甲醇:吡啶(1∶1)、吡啶定容
至 25 mL ,过滤 ,弃去初滤液 10 mL ,取续滤液 5 mL ,
加甲醇定容至 25 mL。于 590 nm 处测定其吸光度 ,
计算含量。结果表明 ,用甲醇:吡啶(1∶1)提取样品 ,
所测含量高于单独用甲醇或吡啶 。提取时间 40 min
·43·
2002 年 12月第 25卷第 4 期　　　　　　　　　成都中医药大学学报
Dec.2002 , Vol.25 , No.4　 　　　　　　Journal of Chengdu University of TCM
DOI :10.13593/j.cnki.51-1501/r.2002.04.017
和60 min优于 20 min ,但 40 min与60 min无显著的
差异。故以下实验采用 20 mL甲醇∶吡啶(1∶1)溶液
超声 40 min ,再室温避光放置 3 h ,过滤 ,滤液用甲醇
∶吡啶(1∶1)定容至 25 mL 的方法。
(2)样品测试精密度试验:同一样品按上述方法
配成溶液 ,然后对其进行紫外可见光谱扫描 ,在 590
nm处测定其吸光度(Abs),重复测定 7次 ,样品测试
精密度的变异系数 RSD 为 1.47%。
(3)样品稳定性考察:①光稳定性试验:考察样
品溶液配制之后置日光 、室内自然光 、避光下放置
0 、15 、30 、45 、60 、90 、120 min后 ,测定其吸光度 ,方法
如前 。结果表明 ,样品溶液在避光及室内自然光下 ,
120 min内基本稳定 ,而在日光下 60 min内基本稳
定 ,60 min以后逐渐下降。故本实验样品溶液配制
好之后 ,应避免放置于日光下 ,且应在 2 h之内完成
测定 ,同时在提取时注意避光 。②热稳定性试验:考
察样品溶液配制之后置室温 、50℃、70℃、90℃水浴
中加热 1 h ,分别测定其吸光度 ,方法如前。结果表
明 ,样品溶液在室温下放置 1 h 基本稳定 , 50℃、
70℃、90℃水浴中加热 1 h ,含量均出现不同程度的
下降 。
1.3.2　样品测定
(1)供试样品波谱扫描:取干燥至恒重的样品 ,
按前法制备供试液 ,于 500 ～ 700 nm 范围内进行波
谱扫描。结果如图 1。扫描结果表明 ,贯叶连翘组
(Hypericum)、遍地金组(Adenosepalum)的几种植物在
590 nm 处均有特征吸收峰 ,峰型良好 ,说明含有金
丝桃素类成分;而金丝桃组(Ascyreia)、地耳草组
(Spachium)的 3种植物在 590 nm 处无特征吸收峰 ,
说明几不含有金丝桃素类成分。假设在 590 nm 处
A%/1 cm=870 ,总金丝桃素含量(%W/W)=(A590
×125)/[样品量(g)×870] 。结果见表 2。
表 2　总金丝桃素含量测定结果
组 　别 编　号 种　类
地上部分
总金丝桃素 % RSD%
叶
总金丝桃素% RSD%
金丝桃组 Ascyreia
1
2
金丝梅
川滇金丝桃
-
-
-
-
地耳草组 Spachium 3 地耳草 - -
遍地金组 Adenosepalum
4
5
遍地金
察隅遍地金
0.02604
0.03093
4.943
4.817
0.04929
0.06935
3.674
2.063
贯叶连翘组 Hypericum
6
7
8
贯叶连翘
元宝草
扬子小连翘
0.04041
0.04028
0.03927
2.425
3.306
1.043
0.08502
0.06823
0.07869
3.728
2.304
4.311
　　以上结果表明 ,金丝桃组的金丝梅和川滇金丝
桃 、地耳草组的地耳草几乎不含金丝桃素类成分;遍
地金组和贯叶连翘组的几种药用植物均含有金丝桃
素类成分 ,并且贯叶连翘组含量高于遍地金组 ,其中
以贯叶连翘含量最高。
1.4　总黄酮的含量测定
1.4.1　测试条件选择
(1)标准曲线的绘制:精密称取 120℃干燥至恒
重的芦丁对照品约 40 mg ,置于 25 mL容量瓶中 ,加
甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 。得标准品浓度为 1.
596 mg/mL。吸取此溶液 0.0 、1.0 、2.0 、3.0 、4.0 、5.0
及 6.0 mL ,分别置于 25 mL容量瓶中 ,先加入 5%亚
硝酸钠 1.0mL摇匀 ,放置6min ,再加 10%硝酸铝1.
0 mL ,放置 6 min ,最后加入 4%氢氧化钠 10 mL ,放
置 15 min。取第一管作空白 ,在 500 nm波长处测吸
收度 ,绘制浓度--吸收度曲线 ,得一通过原点的直
线 。计算此曲线的相关系数 r=0.9997 ,得回归方程
Y=0.096x ,芦丁在 0 ～ 0.3753 mg 范围内呈良好的
线性关系。
1.金丝梅　2.川滇金丝桃　3.地耳草　4.遍地金
5.察隅遍地金　6.贯叶连翘;7.元宝草　8.扬子小连翘
图 1　紫外扫描图(总金丝桃素)
图 2　标准曲线
(2)稳定性实验:精密吸取芦丁甲醇溶液 2 mL ,
按标准曲线项下操作 ,加入显色剂显色以后 ,每隔
·44· 成都中医药大学学报　　　 2002 年 12月第 25 卷
15 min测定其吸收度 ,共计 60 min ,其测得值基本不
变(RSD =2.14%)。
(3)精密度实验:同一样品按相同方法显色 7
次 ,分别测定吸光度 。其 RSD 为 4.12%。
1.4.2　样品测定
取干燥至恒重的全草 ,分别精称 3份 ,50 mL 乙
醚回流脱脂 1 h ,过滤 ,挥干滤渣 ,加甲醇80 mL回流
提取 3 h。提取液甲醇定容于 100 mL 容量瓶中 ,作
为样品溶液。分别精密吸取上述样品溶液 5 mL 于
50 mL容量瓶中 ,按标准曲线项下操作 , 分别加入
5%亚硝酸钠 , 10%硝酸铝及 4%氢氧化钠 ,经放置
显色后过滤 ,滤液于 500 nm 波长处测定吸光度 ,并
由标准曲线计算含量 。400 ～ 600 nm样品扫描图见
图3 。
图 3　紫外扫描图(总黄酮)
表 3　总黄酮含量测定结果(n=3)
组　别 编号 种　类 总黄酮% RSD %
金丝桃组 Ascyreia 1
2
金丝梅
川滇金丝桃
2.916
3.837
3.67
4.81
地耳草组 Spachium 3 地耳草 3.643 3.64
遍地金组 Adenosepalum 4
5
遍地金
察隅遍地金
2.178
3.050
3.71
1.98
贯叶连翘组 Hypericum
6
7
8
贯叶连翘
元宝草
扬子小连翘
3.340
1.063
2.596
3.46
2.57
4.83
　　以上结果表明 ,以芦丁为对照总黄酮含量最高
为川滇金丝桃 ,其次是地耳草 , 含量最低的是元宝
草。
1.4.3　回收率测定
精称已知含量样品约 2 g 共 6份 ,分别向其中
加入不同量的芦丁对照品(3水平共 6份),按样品
测定项下进行提取和测定 ,由标准曲线计算芦丁含
量 ,回收率为 96.315%, RSD为 3.594%。
表 4　回收率实验结果
样品
重量 g
加入标准
品量mg 吸光度
测得量
mg
回收率% 均值% RSD%
2.0001 1.194 1.8716 4.492 96.482
2.0001 1.194 1.9833 4.476 95.142
2.0002 2.389 2.3720 5.693 98.493 96.315 3.594
2.0000 2.389 2.3338 5.621 95.479
2.0000 3.582 2.8429 6.823 97.236
2.0001 3.582 2.8101 6.744 95.031
2　讨论
有资料表明 ,金丝桃素仅局限分布于该属植物
遍地金组(Sect.Adenosepalun)和贯叶连翘组(Sect.
Hypeicum)中 ,实验进一步验证了这一具有典型植物
化学分类意义的结论。
通过波谱扫描 ,金丝桃属 7种 1 变种药用植物
中 ,金丝桃组的金丝梅和川滇金丝桃 、地耳草组的地
耳草在 590nm 处没有金丝桃素成分的特征吸收峰 ,认
为三者几乎不含金丝桃素类成分;而遍地金组和贯叶
连翘组的几种药用植物均含有金丝桃素类成分。证
实了金丝桃素仅局限分布于该属植物遍地金组(Sect.
Adenosepalun)和贯叶连翘组(Sect.Hypeicum)中这一
具有典型植物化学分类意义的结论 ,为金丝桃属植物
的系统分类提供了重要的参考依据。
贯叶连翘组的总金丝桃素含量高于遍地金组 ,
其中以贯叶连翘含量最高 ,为 0.04041%。在对总金
丝桃素的光 、热稳定性的试验结果显示 ,样品溶液在
避光及室内自然光下 ,120 min内基本稳定 ,而在日
光下60 min内基本稳定 ,60 min以后逐渐下降;样品
溶液在室温下放置1 h基本稳定 ,50℃、70℃、90℃水
浴中加热1 h ,含量均出现不同程度的下降 ,从而证
实了文献报道认为金丝桃素类成分光 、热的稳定性
较差的论点。故本实验样品溶液配制好之后 ,应避
免放置于日光下 ,且应在 2 h之内完成测定 ,同时在
提取时注意避光。
以芦丁为对照 ,所测样品的总黄酮含量在 2%
～ 4%之间 , 平均回收率为 96.315%, RSD 为 3.
594%。总黄酮含量最高是川滇金丝桃 ,为 3.837%,
其次是地耳草 , 含量为 3.643%,含量最低是元宝
草 ,为 1.063%。本方法简便 ,快捷 ,重现性好。
通过本实验 ,认为不仅贯叶连翘 ,而且扬子小连
翘 、川滇金丝桃等都是值得进一步深入研究的有发
展前景的药用植物 。
(收稿日期:2001-09-05)
·45·第 4 期　　　　　　分光光度法测定金丝桃属药用植物总金丝桃素和总黄酮的含量