全 文 ：2014，48(6) :25 ～ 27 /韩 立，等 中国兽药杂志
高效液相色谱法测定杨树花口服液中水杨苷的含量
韩 立，班付国，周红霞，邱天宝，刘素梅，张跃京
(河南省兽药监察所，郑州 450008)
［收稿日期］2014 － 03 － 14 ［文献标识码］A ［文章编号］1002 － 1280 (2014)06 － 0025 － 03 ［中图分类号］S853． 76
［摘 要］ 建立了高效液相色谱分离测定杨树花口服液中水杨苷含量的方法。采用 Waters
XBridge C18 色谱柱(150 mm × 4． 6 mm，5 μm)，以甲醇 －水(10∶ 90)为流动相，流速为 1． 0 mL /
min，检测波长 269 nm，柱温 30 ℃。水杨苷的线性范围为 0． 025 ～ 0． 5 mg /mL(r = 0． 9995)，平均加
样回收率(n = 6)为 100． 8%，ＲSD为 1． 49%。建立的方法准确、快速，操作简便，可用于杨树花口服
液中水杨苷的含量测定。
［关键词］ 杨树花口服液;水杨苷;含量测定;高效液相色谱法
作者简介:韩 立，硕士，高级兽医师，从事兽药检验和分析工作。E － mail:hanli201108@ 163． com
Determination of Salicin in Yangshuhua Oral Liquid by HPLC
HAN Li，BAN Fu － guo，ZHOU Hong － xia，LIU Su － mei，ZHANG Yue － jing
(Henan Institute of Veterinary Drugs Control，Zhengzhou 450008，China)
Abstract:To use the high performance liquid chromatography(HPLC)to determine salicin in Yangshuhua oral
liquid． The isolation was performed on a Waters XBridge C18 column (150 mm × 4． 6 mm，5 μm)with the
mobile phase consisting of methanol － water (10∶ 90)． The flow rate was 1． 0 mL /min，The detection wavelength
of 269 nm and the column temperature was set at 30 ℃ ． HPLC was successfully applied to the isolation of salicin
in Yangshuhua oral liquid． The standred curves were linear over the ranges of 0． 025 ～ 0． 5 mg /mL(r = 0． 9995)
for salicylic acid ． The average recoveries were 100． 8%，and ＲSD were 1． 49% ． The method is simple and can be
used as a quality control for Yangshuhua oral liquid．
Key words:Yangshuhua oral liquid;salicin;determination;HPLC
杨树花为杨柳科植物毛白杨(Populus tomento-
sa Carr．)、加拿大杨(Populus canadensis Moench．)
或同属数种植物的干燥雄花序［1 － 2］，主要药用成分
为酚苷类化合物和黄酮类化合物［3 － 4］。杨树花口
服液是杨树花经提取制成的合剂，收载于《中国兽
药典》二○一○年版二部，每 1 mL 相当于原生药 1
g，多为水提醇沉法生产［5］，具有清热解毒、化湿止
泻的功效，主治湿热下痢，幼畜泄泻。在畜牧业中，
杨树花及其制剂广泛应用于羊、猪、兔等动物的腹
泻、细菌性痢疾等疾病［6 － 8］。目前质量标准仅有理
化鉴别，不能有效控制药品质量。因此研究杨树花
化学成分，定量测定活性成分含量，对于控制杨树
花口服液质量具有重要的意义。水杨苷具有解热
镇痛和苦味健胃助消化作用，是杨树花口服液清热
健胃的主要有效成分，可溶于水，易溶于沸水，也是
杨树花口服液的主要活性成分。因此定量检测杨
树花口服液中的水杨苷含量，有助于完善产品质量
标准，指导生产，提高药品质量［9］。本试验以水杨
苷为参照物，测定了杨树花口服液中水杨苷的量，
对于控制药品质量和完善标准很有实用性。
1 仪器与试剂
Waters Acquity UPLC超高效液相色谱仪(美国
Waters公司)配置 UPLC PDA光电二极管阵列检测
器 /UPLC TUV 紫外检测器，Empower2 色谱工作站
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采集数据;METTLEＲ TOLEDO XP205 电子天平(十
万分之一，瑞士 METTLEＲ TOLEDO 公司) ;Milli －
Q Advantage A10 超纯水系统(美国 Millipore 公
司)。
甲醇(色谱纯) ，中性氧化铝(层析用) ，纯化
水，水杨苷对照品(含量 98． 0%，批号 4． 530013．
0001，ANPEL Scientific instrument Co． Ltd．)。杨树
花口服液样品 3 批 (批号分别为 12101101，
12101102，12101103，均由 1 家兽药生产企业
提供)。
2 方法与结果
2． 1 检测波长的选择 采用 DAD检测器在 210 nm
～400 nm对对照品进行全扫描(图 1) ，水杨苷分别
在 212、268、339、384 nm 波长下有最大吸收，其中
212 nm下吸收最大。分别比较 4 个波长下样品的
色谱图，发现水杨苷虽然在 212 nm下吸收最大，但
是杂质吸收也较大，而在 268 nm ～ 270 nm 下有比
较大的吸收，且峰形较好，基线平稳，分离度较高，
所以将检测波长定为 269 nm。
图 1 对照品光谱图
2． 2 色谱条件与系统适用性试验 流动相为甲
醇—水(10 ∶ 90) ;色谱柱:Waters XBridge C18，
150 mm × 4． 6 mm，5 μm;检测波长 269 nm;流速
1． 0 mL /min;进样量:10 μL;柱温 30 ℃。理论板数
按水杨苷峰计算不低于 3000，主峰的保留时间约为
17． 4 min(图 2 －图 3)。
图 2 对照品色谱图
图 3 杨树花口服液色谱图
2． 3 对照品溶液的制备 精密称取水杨苷对照品
53． 26 mg，置 100 mL量瓶中，加甲醇制成每 mL 含
0． 5326 mg的溶液，过 0． 45 μm微孔滤膜，即得水杨
苷对照品溶液。
2． 4 供试品溶液的制备 精密量取杨树花口服液
2 mL，过中性氧化铝柱(内径为 1． 5 cm，5 g) ，收集
流出液，再用 40 mL 水洗脱，流出液和洗脱液合并
至 50 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，作为供试品
溶液。
2． 5 线性关系考察 取水杨苷对照品适量，加水
配制成含 0． 5 mg /mL 的对照品溶液，分别稀释成
0． 025、0． 05、0． 1、0． 2、0． 5 mg /mL，精密量取 10
μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。以水杨苷
浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，计算得回
归方程为:y = 1966x + 15423 ，相关系数 r = 0．
9995，结果表明水杨苷在 0． 025 ～ 0． 5 mg /mL 的浓
度范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系。
2． 6 精密度试验 精密吸取水杨苷对照品溶液
10 μL注入色谱仪，记录色谱图，连续进样 6 次测定
峰面积。结果相对标准偏差(ＲSD)为 0． 52%，表明
系统精密度符合要求。
2． 7 稳定性试验 取同一批供试品溶液，分别在
样品处理后的 0、1、2、8、12 h 进样，测定峰面积，考
察样品稳定性。结果表明，供试品溶液 12 h内基本
稳定，ＲSD为 0． 75%。
2． 8 重复性试验 取批号为 12101101 的杨树花
口服液，精密量取 2 mL，平行 6 份，依法进行提取、
测定，计算计算每份样品中水杨苷的量，结果 6 份
样品中水杨苷的平均含量为 3． 3813 mg，ＲSD 为
0． 76%，表明该方法重复性良好。
2． 9 回收率试验 取批号为 12101101 的杨树花
口服液，精密量取 1 mL，平行 6 份，精密加入水杨苷
对照品溶液 5 mL(相当于约 2． 6630 mg 的水杨
苷) ，按照供试品溶液制备方法制成加样供试品溶
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液，精密吸取加样供试品溶液 10 μL，按上述方法测
定，计算回收率，结果表明，本法具有良好的回收
率，见表 1。
表 1 水杨苷回收率试验
编号 取样量 /ml 样品中量 /mg 添加量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% ＲSD /%
1 1 3． 3392 2． 6630 5． 9490 98． 0
2 1 3． 3949 2． 6630 6． 0841 101． 0
3 1 3． 4051 2． 6630 6． 1197 101． 9
4 1 3． 3695 2． 6630 6． 0569 100． 9
5 1 3． 4055 2． 6630 6． 1288 102． 3
6 1 3． 3736 2． 6630 6． 0604 100． 9
100． 8 1． 49
2． 10 样品的测定 取同一公司 3 批杨树花口服
液样品，每批量取两份，按供试品处理方法处理。
取 10 μL 样品溶液注入色谱仪，记录色谱图，平行
进样两次，计算平均含量。各批次样品的含量见表
2。
表 2 样品测定结果
批号 水杨苷含量 /(mg ·mL －1) ＲSD /%
12101101 3． 3813 1． 31
12101102 3． 3955 1． 33
12101103 3． 4111 0． 82
3 讨论与小结
3． 1 样品的净化 试验比较了样品过中性氧化铝
柱和不过中性氧化铝柱的效果。发现不过中性氧
化铝柱时，供试品溶液颜色较深，进样后杂质峰较
多，很难与目的峰分离。当样品过中性氧化铝柱
后，供试品溶液颜色变浅，杂质峰明显减少，样品的
含量几乎没有变化。可以推断，色素等杂质被中性
氧化铝吸附，但水杨苷基本都被洗脱下来。
3． 2 样品的含量 试验测定了同一公司 3 批样
品，水杨苷含量范围为 3． 4 mg /mL左右。由于药材
来源不同，不同公司的生产工艺存在差异，杨树花
口服液中水杨苷含量相差可能较大。通过对自制
的每 1 mL相当于原生药 1 g 的杨树花煎煮液进行
检测，水杨苷含量达到 10． 8 mg /mL 左右。参照
《中国兽药典》杨树花口服液标准，有必要对杨树花
口服液中水杨苷的收率以及不同来源的杨树花口
服液中水杨苷含量进行进一步的测定和考察，以制
定出合理的含量限度。
水杨苷是杨树花口服液的主要成分和活性物
质，试验以水杨苷为定量目标化合物，对于完善产
品质量标准，提高药品质量具有现实意义。
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(编 辑:陈 希)
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