全 文 ：有关镇静方面的相关研究，因此，我们推测，传统医学中龙胆
的“镇惊”作用可能是口服龙胆后，龙胆苦苷经代谢转变成龙
胆碱而发挥的，龙胆碱可能是中药龙胆“镇惊”作用的更直接
的物质。
参考文献:
［1］ 刘学伟，姚素媛，刘树民，等． 龙胆碱对反复高热惊厥大鼠血清 IL
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天然产物研究与开发，2008，20:903．
收稿日期:2011-01-17; 修订日期:2011-09-25
基金项目:国家教育部回国科研启动基金(第 32 批次)项目资助
作者简介:韩立芹(1985-) ，女(汉族) ，吉林吉林人，现为吉林农业大学硕士研究生，主要从事天然产物化学研究工作．
* 通讯作者简介:张 晶(1971-) ，女(汉族) ，吉林长春人，现任吉林农业大学中药材学院教授，博士学位，主要从事天然产物化学研究工作．
旱柳叶中三种黄酮类成分及水杨苷
含量的高效液相色谱法测定
韩立芹，姜 盼，金 莎，张 晶*
(吉林农业大学中药材学院，吉林 长春 130118 )
摘要:目的 建立同时测定旱柳叶中木樨草素 － 7 － O －葡萄糖苷、水杨苷、芹菜素 － 3＇－氧乙基 － 7 － O －葡萄糖苷及杨梅
酮含量的高效液相色谱(HPLC)方法。方法 Nucleosil C18(4． 6 mm × 250 mm，5μm)色谱柱，以乙腈 －水(5∶ 95)－(30∶
70)为梯度流动相;流速为 1． 0 ml·min －1;检测波长为 246 nm;柱温为 25℃。结果 木樨草素 － 7 － O －葡萄糖苷在0． 02
～ 0． 1 mg范围内与峰面积呈良好线性关系，R = 0． 999 0，平均回收率为 97． 81%，RSD为 2． 93%;水杨苷在 0． 03 ～ 0． 15 mg
范围内与峰面积呈良好线性关系，R = 0． 998 8，平均回收率为 97． 54%，RSD为 1． 62%;芹菜素 － 3＇－氧乙基 － 7 － O －葡萄
糖苷在 0． 008 ～ 0． 04 mg范围内与峰面积呈良好线性关系，R = 0． 999 1，平均回收率为 97． 41%，RSD为 1． 37%;杨梅酮在
0． 04 ～ 0． 2 mg范围内与峰面积呈良好线性关系，R = 0． 9977，平均回收率为 97． 91%，RSD为 1． 03%。结论 此法简便快
速，结果准确可靠、重复性好，可用于药材中木樨草素 － 7 － O －葡萄糖苷、水杨苷、芹菜素 － 3＇－氧乙基 － 7 － O －葡萄糖苷
及杨梅酮含量的同时测定。
关键词:旱柳叶; 木樨草素 － 7 － O －葡萄糖苷; 水杨苷; 芹菜素 － 3＇－氧乙基 － 7 － O －葡萄糖苷; 杨梅酮; 高
效液相色谱法
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2012． 02． 065
中图分类号:R284． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2012)02-0396-02
Simultaneous Determination of Four Active Compounds in Salix matsudan (Koidz)by
HPLC
HAN Li-qin，JINAG Pan，JIN Sha，ZHANG Jing*
(College of Chinese Medicinal Material，Jilin Agricultural University，Changchun 130118，China)
Abstract:Objective To establish the HPLC method for the determination of luteolin － 7 － O － glucoside，salicin，apigenin － 3＇－
Oxyethyl － 7 － O － glucoside and myricetin in the leaves of Salix matsudan． Methods The column was Nucleosil C18(4． 6 mm ×
250 mm，5 μm)column，the mobile phase for gradient elution was acetonitrile and water(5∶ 95)－(30∶ 70) ，the flow rate was
1． 0 ml·min －1，the detection wavelength was 246nm and the column temperature was 30℃ ． Results The calibration curves were
linear with correlation coefficients of 0． 999 0，0． 998 8，0． 999 1，0． 997 7 for luteolin － 7 － O － glucoside，salicin，apigenin － 3＇－
Oxyethyl － 7 － O － glucoside and myricetin，respectively． The RSDs were2． 93%，1． 62%，1． 37%，1． 03% in the concentration
ranges of 0． 02 ～ 0． 1 mg，0． 03 ～ 0． 15 mg，0． 008 ～ 0． 04 mg，0． 04 ～ 0． 2 mg and the recoveries were 97． 81%，97． 54%，97．
41%，97． 91% for luteolin － 7 － O － glucoside，salicin，apigenin － 3＇－ Oxyethyl － 7 － O － glucoside and myricetin，respectively ．
Conclusion The developed HPLC method is an attractive alternative for the simultaneous quantitative determination of luteolin － 7
－ O － glucoside，salicin，apigenin － 3＇－ Oxyethyl － 7 － O － glucoside and myricetin with regard to the simplicity，accuracy，and re-
peatability．
Key words:Leaves of Salix matsudan (Koidz) ;Luteolin － 7 － O － glucoside; Salicin; Apigenin － 3＇－ Oxyethyl － 7 － O
－ glucoside; Myricetin，High － performance liquid chromatography
旱柳为杨柳科(Salicaceae)柳属(Salix)木本植物，该属种类 繁多，分布广泛，全世界约有 500 多种，仅在我国分布的柳属植物
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就有 210 多种［1］，资源丰富，是我国绿化栽培的重要树种之一。
柳树有多种用途，在民间作为药用历史悠久。柳为本经下品，其
性苦寒、无毒，可治疗风水黄疽，疮痈肿痛，痰热淋疾，湿痹等疾
症［2］。柳叶茶具有抗氧化、降血脂、抑菌、抗肿瘤、抗流感病毒等
作用［3，4］。近些年来，国内外学者运用现代化学分离技术和各种
结构鉴定手段对柳属植物进行深入系统的研究［5］，在化学成分
提取分离、结构鉴定、含量测定及其生物活性等方面都有所研究。
在以往的质量标准中对重要的有效成分 －黄酮类没有准确可靠
的多指标含量同时测定方法。木樨草素 － 7 － O －葡萄糖苷、水
杨苷、芹菜素 － 3＇－氧乙基 － 7 － O －葡萄糖苷、杨梅酮均为旱柳
叶中的主要成分［6］，含量较高，但目前的研究只有针对其中某一
种成分的含量测定方法。许传莲等［7］采用反相高效液相法对大
黄柳叶中的有 Diosmetin 7 － O － α － L －吡喃阿拉伯糖(1→6)－ β
－ D － 吡喃葡萄糖苷进行了含量测定;赵厚民等［8］采用 RP －
HPLC法对柳枝皮药材中水杨苷的含量进行了测定。本文建立
了 HPLC法同时测定旱柳叶中木樨草素 － 7 － O －葡萄糖苷、水杨
苷、芹菜素 － 3＇－氧乙基 － 7 － O －葡萄糖苷及杨梅酮的含量的条
件，以乙腈 －水为流动相，加入 0． 25%的冰醋酸，进行梯度洗脱，
检测波长为 246 nm。并用此条件测定了不同采收期旱柳叶中此
4 种物质的含量。现报道如下。
1 仪器与药品
岛津 LC － 2010 高效液相色谱仪;SPD － 10Avp 紫外检测器;
LC － Solution色谱工作站;紫外可见分光光度计(岛津 2450) ;KQ
－250DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
木樨草素 － 7 － O －葡萄糖苷、水杨苷、芹菜素 － 3＇－氧乙基
－ 7 － O －葡萄糖苷及杨梅酮对照品为实验室提供(纯度为 98%
以上)。乙腈为色谱纯(美国 Fisher 公司) ，水为纯水(经 UPWS
超纯水器纯化，杭州永洁达净化科技有限公司)。
旱柳叶采于吉林农业大学校园内，自旱柳叶发芽的 5 月初
期，每隔 10 d进行采收，到 10 月末落叶为止，共 17 批次。经吉林
农业大学张晶教授鉴定为杨柳科(Salicaceae)旱柳叶 Salix matsu-
dan (Koidz)。采后室温阴干，粉碎，待用。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件的选择 色谱柱为 Nucleosil C18(4． 6 mm × 250
mm，5 μm) ;流动相为乙腈 －水(5∶ 95)－(30∶ 70) ;流速 1． 0 ml
·min － 1;检测波长 246 nm;柱温 25℃;进样量 20 μl。对照品与
样品 HPLC谱图见图 1。
2． 2 对照品溶液的制备 精密称取木樨草素 － 7 － O －葡萄糖苷
标准品 5 mg，水杨苷标准品 7． 5mg，芹菜素 － 3＇－氧乙基 － 7 － O
－葡萄糖苷 2． 0 mg，杨梅酮标准品 10 mg，置于 5 ml 的容量瓶
中，加甲醇使溶解，并稀释至刻度，制成含有木樨草素 － 7 － O －
葡萄糖苷 1． 0mg·ml －1、水杨苷 1． 5 mg·ml －1、芹菜素 － 3＇－氧
乙基 － 7 － O －葡萄糖苷 0． 4 mg·ml －1、杨梅酮 2 mg·ml －1的对
照品溶液。
2． 3 供试品溶液的制备 精密称取各采收期样品粉末约 5 g，置
具塞三角瓶中，加入 50 ml70%的乙醇，至于三角瓶中超声提取
30 min，3 次，过滤，浓缩至大约 50 ml，用 1∶ 1 石油醚萃取 3 次。
用 70%乙醇定容于 100 ml的容量瓶中，从中吸取 10 ml，过 0． 45
μm的滤膜，即为供试品溶液。
2． 4 线性关系考察 精密吸取“2． 2”项制备的对照品溶液 20，40，
60，80，100 μl，按“2． 1”项色谱条件测定峰面积。以进样量 X为横
坐标，峰面积 Y为纵坐标制标准曲线，计算得回归方程分别为木樨
草素 －7 － O －葡萄糖苷标准曲线为 Y = 3E + 06X － 169 190，R =
0． 999 0;水杨苷标准曲线为 Y =118 187X －1 343． 3，R =0． 998 8;芹
菜素 －3＇－氧乙基 －7 － O －葡萄糖苷标准曲线为 Y = 584 836X －
51 454，R =0． 999 1;杨梅酮标准曲线为 Y = 9E + 06X － 206 360，R
=0． 997 7，具有良好的线性关系。线性范围分别为0． 02 ～0． 1 mg，
0． 03 ～0． 15 mg，0． 008 ～0． 04 mg，0． 04 ～0． 2 mg。
2． 5 精密度实验 精密称取同一采收期旱柳叶粉末样品 2． 0 g，
平行 5 次取样，按“2． 3”项方法操作，制备供试品溶液，精密吸取
20 μl，按照“2． 1”项色谱条件连续进样 5 次，测定样品中木樨草
素 － 7 － O －葡萄糖苷、水杨苷、芹菜素 － 3＇－氧乙基 － 7 － O －葡
萄糖苷、杨梅酮色谱峰面积，计算日内精密度 RSD 分别为
0． 344%、1． 849%、0． 224 6%、0． 490 3%(n = 5)。结果表明精密
度良好。
2． 6 重复性实验 精密称取旱柳叶粉末 2． 0 g，按“2． 3”项下方法
操作，制备供试品溶液。按“2． 1”项色谱条件在 0，2，4，6，8 h连续
进样 5次，每次进样 20 μl，分别测定样品中木樨草素 － 7 － O －葡
萄糖苷、水杨苷、芹菜素 －3＇－氧乙基 －7 － O －葡萄糖苷、杨梅酮色
谱峰面积，计算日内精密度 RSD 分别为 1． 348 5%、0． 263 8 %、
0． 238 5%、1． 700 0%(n =5)。结果表明测定方法具有良好的重复
性。
2． 7 加样回收率实验 精密称取 2g已知含量(含木樨草素 － 7 －
O －葡萄糖苷为 1． 6 μg·g －1，水杨苷为 15． 0 μg·g －1，芹菜素 －
3＇－氧乙基 － 7 － O －葡萄糖苷为 3． 5 μg·g －1，杨梅酮为 28． 2 μg
·g －1)的旱柳叶样品 5 份，分别精密加入一定量的木樨草素 － 7
－ O －葡萄糖苷对照品溶液(含 1． 8 μg) ，水杨苷对照品溶液(含
33． 1 μg) ，芹菜素 － 3＇－氧乙基 － 7 － O －葡萄糖苷对照品溶液
(含 3． 1 μg)和杨梅酮对照品溶液(含 30． 0 μg)。按“2． 3”项制
备供试品溶液，进行加样回收率考察测定。木樨草素 － 7 － O －
葡萄糖苷加样平均回收率为 97． 81%，RSD = 2． 93%(n = 5) ;水杨
苷加样平均回收率为 97． 54% ，RSD = 1． 62%(n = 5) ;芹菜素 － 3＇
－氧乙基 － 7 － O －葡萄糖苷加样平均回收率为 97． 41%，RSD =
1． 37%(n = 5) ;杨梅酮加样平均回收率为 97． 91%，RSD% =
1． 03% (n = 5)。
2． 8 样品的测定 采用上述 HPLC 法测定了不同采收期旱柳叶
中木樨草素 － 7 － O －葡萄糖苷、水杨苷、芹菜素 － 3＇－氧乙基 － 7
－ O －葡萄糖苷、杨梅酮的含量。结果见图 2。
3 讨论
3． 1 检测波长的选择 本实验采用紫外分光光度计(岛津 2450)
在 200 ～ 500 nm波长范围内测定了木樨草素 － 7 － O －葡萄糖苷、
水杨苷、芹菜素 － 3＇－氧乙基 － 7 － O －葡萄糖苷、杨梅酮甲醇溶
液的紫外吸收光谱。结果显示，四者在 246，213，246，254 nm 均
有最大吸收。因 246 nm处吸收较强，本实验采用 246 nm作为检
测波长。
a －标品色谱图 b －样品色谱图
* 保留时间 12． 907 min为水杨苷的峰
* 保留时间 31． 111 min为芹菜素 － 3＇－氧乙基 － 7 － O －葡萄糖苷的峰
* 保留时间 32． 561 min为木樨草素 － 7 － O －葡萄糖苷的峰
* 保留时间 38． 377 min为杨梅酮的峰
图 1 4 种化合物的 HPLC谱图
3． 2 色谱条件的选择 4 种物质均为酚苷类，偏酸性，在中性展
开剂中容易造成拖尾，因此，在流动相中加入酸类物质可有效改
善拖尾现象的发生。本文在分析过程中，经过条件筛选发现，流
动相中加入 0． 25%的冰醋酸，分离效果比较好，四者可达到基本
分离，峰形较好，测定结果稳定。
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL． 23 NO． 2 时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 2 期
图 2 不同生长期柳叶中木樨草素 － 7 － O －葡萄糖苷、
水杨苷、芹菜素 － 3＇－氧乙基 － 7 － O －葡萄糖苷、杨梅酮含量
3． 3 旱柳叶中 4 种物质在生长期的动态积累 本实验采用 HPLC
法对不同采收期的旱柳叶中木樨草素 － 7 － O －葡萄糖苷、水杨
苷、芹菜素 － 3＇－氧乙基 － 7 － O －葡萄糖苷、杨梅酮的含量同时
进行了测定，从结果可以看出，旱柳叶乙醇提取液中的 4 种化合
物含量:杨梅桐 ＞水杨苷含量 ＞芹菜素 － 3＇－氧乙基 － 7 － O －葡
萄糖苷含量 ＞木樨草素 － 7 － O －葡萄糖苷含量，其中 9、10 月份
4种物质含量普遍较高，7、8 月份普遍较低，水杨苷含量 6 月份达
到最高峰。此结果的出现应该与不同生育期旱柳体内的生理活
动状态有关。本实验的方法与以往只是针对旱柳叶中的单一成
分进行考察的测定方法相比，更具有科学性。同时检测四个主要
化学成分含量更科学地衡量旱柳叶的药用品质，方法简便、快速、
准确，重复性好，可以为旱柳叶的质量控制和合理采收提供科学
依据，也适用于其他药材中此四种单体成分含量的同时测定。
参考文献:
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收稿日期:2011-02-24; 修订日期:2011-09-30
基金项目:国家“重大新药创制”科技重大专项(No． 2009ZX09313 － 029)
作者简介:胡浩武(1985-) ，男(汉族) ，江西吉安人，现任江西汇仁药业有
限公司国家企业技术中心工程师，硕士学位，主要从事中药制剂及其质量
控制研究工作．
* 通讯作者简介:耿 炤(1975-) ，男(汉族) ，陕西西安人，现任江西汇仁
药业有限公司国家企业技术中心高级工程师，博士学位，主要从事中药学
相关研究工作．
AOTF － 近红外光谱技术在浓缩六味地黄丸
提取浓缩过程理化指标快速分析中的应用研究
胡浩武1，耿 炤1* ，王木兰1，杜育华1，梅玲华1，孙晓波2
(1．江西汇仁药业有限公司，江西 南昌 330052; 2．中国医学科学院药用植物研究所，北京 100193)
摘要:目的 用声光可调滤光器(AOTF)－近红外(NIR)光谱法在线分析浓缩六味地黄丸浓缩液比重及马钱苷、丹皮酚含
量。方法 在线收集浓缩六味地黄丸浓缩液样品，建立其含量、比重数据库，同时采集近红外光谱图谱，用偏最小二乘
(PLS1)法分别建立 NIR光谱与含量、密度数据之间的校正模型，并对在线过程中收集的预测集样品进行含量预测来验证
所建模型。结果 浓缩液 NIR光谱与含量、比重数据之间的校正模型相关系系数 R2 分别为 0． 994 5，0． 996 7 和 0． 952 2，
外部样品预测相对偏差分别为 0． 26%，5． 39%和 10． 44%;该方法精密度、稳定性均小于 2． 0%，预测回收率分别为
99． 9%，100． 2%，92． 8%。结论 AOTF － NIR 技术用于浓缩六味地黄丸浓缩液比重及马钱苷、丹皮酚含量分析，具有快
速、直接、多成分同时测定，并能实现现场在线分析的特点。
关键词:声光可调滤光器; 近红外光谱; 浓缩六味地黄丸; 提取; 浓缩; 马钱苷; 丹皮酚; 比重; 在线分析
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2012． 02． 066
中图分类号:R284． 2 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2012)02-0398-03
六味地黄丸系北宋名医钱仲阳之名方，始载于《小儿药证直
诀》，由熟地黄、山萸肉、山药、泽泻、牡丹皮、茯苓等六味药组成。
六味地黄丸滋补肾阴，为治疗肾阴不足的基本药方。现代药理研
究表明该方具有免疫系统调节、延缓衰老、降血糖作用，具有对心
血管系统的保护作用，抗肿瘤的作用，能改善肾功能、促进肾脏对
体内代谢产物尿素的排泄等［1］;临床用于治疗慢性肾炎、高血压
病、糖尿病、神经衰弱等［2］。浓缩六味地黄丸为六味地黄丸采用现
代制剂工艺改剂而成，其制剂过程长，包括煎煮、浓缩、混和、成型、
干燥、上光等过程。为了进一步提高药品质量，实现药品生产的在
线控制，本研究应用声光可调(AOTF)－近红外光谱技术对其提
取，浓缩过程中指标成分丹皮酚、马钱苷及浓缩液密度进行连续取
样和现场分析，结合传统定量检测，建立了在线应用的浓缩六味地
黄丸指标成分丹皮酚、马钱苷及浓缩液比重的近红外模型，以期为
浓缩六味地黄丸的浓缩过程中指标成分及物理指标快速定量分析
和生产过程中的在线检测，控制产品的质量提供有效的分析方法。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 AOTF 便携式 Luminar 5030 － 731 近红外光谱分析仪
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时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 2 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL． 23 NO． 2