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HPLC法测定复方盐肤木化痔胶囊中没食子酸的含量



全 文 :Traditional Chinese Drug Research & Clinical Pharmacology,2011 January,Vol.22 No.1
3 讨论
3.1 水分 山柰酚粉末较为疏松,105 ℃下恒重所需
时间较长(8h);热重分析结果失重率为 5.91 %,且失
重主要发生在 150 ℃之上,推测样品中应含有一分子
结晶水,样品分子式为 C15H10O6·H2O。
3.2 薄层色谱法 本文薄层色谱法属半定量,只能测
定杂质限量,不能准确测定含量。
3.3 山柰酚纯度计算 本文采用 HPLC法测定山柰酚
纯度时,分别用面积归一化和自身稀释对照法进行计
算,计算结果基本一致,分别是 99.05 %和 98.94 %。
面积归一化法是假设各杂质与主成分吸收基本一致,
如果主峰与其他峰的紫外吸收系数差别大,用峰面积
归一化法测定主峰纯度则会影响定量的准确性。本试
验中,采用了二极管阵列检测器全波长(200~400 nm)
扫描分析,查看各杂质吸收光谱,结果显示主要杂质
与主成分吸收光谱接近,适用于面积归一化法测定纯
度。此外,采用自身稀释对照法计算可加以佐证,
故取二者计算结果的平均值作为山柰酚的纯度。
参考文献:
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(编辑:宋威)
HPLC法测定复方盐肤木化痔胶囊中没食子酸的含量
杜 敏,颜仁梁(广东食品药品职业学院,广州 510520)
摘要:目的 建立复方盐肤木化痔胶囊中没食子酸含量的测定方法。方法 采用HPLC法测定没食子酸的含量。
AnglentTC-18柱(4.6 × 250 mm,5 μm),甲醇-0.5 %冰醋酸(5 ∶ 95)为流动相,柱温为室温,流速为1.0 mL·min-1,
检测波长为273 nm。结果 没食子酸浓度在15.09~45.27 μg·mL-1范围内与其峰面积呈良好的线性关系(r=0.999
6,n=7),平均回收率为101.83 %(RSD=1.67 %)。结论 该测定方法精密度高,重现性好,可用于复方盐肤木
化痔胶囊的质量控制。
关键词:复方盐肤木化痔胶囊;没食子酸;HPLC
中图分类号:R284.1 文献标志码:A 文章编号:1003-9783(2011) 01-0102-03
Determination of Gallic Acid in Compound Yanfumu Huazhi Capsules by HPLC
DU Min,YAN Renliang(Guangdong Food and Drug Vocational College,Guangzhou 510520,China)
Abstract:Objective To establish a method for the determination of gallic acid in Compound Yanfumu Huazhi
Capsules. Methods HPLC method was carried out on a AnglentTC-18 column(4.6×250mm,5 μm) at room
temperature. Methanol- 0.5 % acetic acid(5 ∶ 95)was used as the mobile phase,the flow rate was 1 mL·min-1 ,
and the detection wavelength was at 273 nm. Results Gallic acid showed a good linear relationship in the range
of 15.09~45.27 μg·mL-1(r=0.999 6,n=7). The average recovery of gallic acid was 101.83 %(RSD=1.67 %).
Conclusion The method is sensitive,accurate,and reproducible,and can be used for the quality control of
Compound Yanfumu Huazhi Capsules.
Keywords: Compound Yanfumu Huazhi Capsules; Gallic acid; HPLC
收稿日期:2010-10-15
作者简介:杜敏,女,副教授,研究方向:主要从事药学相关课程的理论及实践教学工作。Email:dum@gdyzy.edu.cn。
·102·
中药新药与临床药理 2011年 1月第 22卷第 1期
复方盐肤木化痔胶囊由盐肤木、三七、千里光等
六味药材制成,具有清热解毒,止血止痛,收涩止血
功效,主要用于大肠湿热所致的内痔、外痔、内外混
合痔等。本方重用盐肤木为君药,其有效成分没食子
酸具有较强的生物活性,文献中多用没食子酸作为药
材或制剂的检测指标[1-3]。为了利于市场推广、应用,本
研究旨在建立复方盐肤木化痔胶囊科学、可行的质控
标准。因此,本研究参考相关文献,采用 HPLC法测
定复方盐肤木化痔胶囊中没食子酸的含量,经方法
学验证,该方法分析快速、准确、灵敏度高、重现
性好,可用于复方盐肤木化痔胶囊中没食子酸的含
量测定,在保证检验精度的基础上大大缩短了检验
周期。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Anglent1100高效液相色谱仪(DAD检测
器),AnglentTC-18柱(4.6 × 250 mm,5 μm),德国
BP211D Sartorius电子天平(十万分之一)。超声波清
洗器。
1.2 试药 没食子酸对照品,购自中国药品生物制
品检定所,批号:110813-200302。复方盐肤木化痔
胶囊(自制,批号:090128、090613、091126)。甲醇
(色谱纯,SIGMA公司)。水为重蒸水,其他实验所
用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件和系统 适 用 性 试 验 色 谱 柱 :
AnglentTC-18柱(4.6 × 250 mm,5 μm),柱温为室温;
流动相:甲醇-0.5 %冰醋酸(5 ∶ 95);流速:1. 0mL·
min-1;检测波长为 273 nm。取供试品溶液 10 μL注
入液相色谱仪测试,没食子酸的保留时间约为 11.8
min,供试品溶液中没食子酸可与其他物质基线分离,
且阴性对照供试液无干扰,见图 1,理论塔板数以没
食子酸计不低于 2 000。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液 精密称取没食子酸对照品适量,
置量瓶中,用甲醇溶解,稀释制成每 1 mL含 25 μg
的溶液,摇匀,0.2 μm微孔滤膜滤过,即得(对照品
储备液浓度为 251.5 μg·mL-1,精密吸取对照品储备液
1.0 mL,置 10 mL量瓶,甲醇稀释至刻度,即得浓度
为 25.15 μg·mL-1工作对照品溶液)。
2.2.2 供试品溶液 取平均装量项下的本品细粉约
500 mg,精密称定,置具塞三角瓶中,精密移入 25 mL
甲醇,精密称重,超声 30 min,取出,放冷至室温,
以甲醇补足重量,摇匀,0.2 μm微孔滤膜滤过,即
得。
2.2.3 阴性对照液 取除盐肤木以外的其余药味,按
工艺制成缺味样品,取缺盐肤木阴性对照样品适量,
同供试品溶液制备方法制备阴性对照液。
2.3 线性关系考察 分别精密吸取没食子酸对照品储
备液(浓度为 251.5 μg·mL-1)0.3,0.4,0.5,0.6, 0.7,
0.8,0.9 mL,置 5 mL量瓶,加甲醇稀释至刻度,制
成没食子酸系列对照溶液,分别吸取上述对照品溶液
10 μL 注入液相色谱仪,测定,以没食子酸峰面积
(A)为纵坐标,没食子酸对照品系列溶液的浓度
(μg·mL-1)为横坐标,绘制标准曲线。实验数据经线
性回归得回归方程为:Y=25.965X-55.15,r=0.9996
(n=7),没食子酸进样浓度在 15.09 ~ 45.27 μg·mL-1
范围内与其峰面积呈良好的线性关系。
2.4 专属性试验 取对照品溶液、供试品溶液
(090128)、阴性对照溶液分别进样 10 μL,记录色谱
图,见图 1,结果阴性样品对测定无干扰。
2.5 精密度试验 精密吸取 2.2 项下供试品溶液
(090128)10 μL,在上述色谱条件下,重复进样 6
次,以峰面积 A计算 RSD=0.54 %,表明本实验精密
度良好。
2.6 稳定性试验 精密吸取 2.2 项下供试品溶液
(090128)10 μL,分别在 0,1,2,3,4,5,6,12
h进样,按上述色谱条件测定峰面积,以峰面积 A计
算 RSD=1.71 %,说明样品溶液中的没食子酸在 12 h
内稳定,可满足测定的需要。
2.7 重复性试验 取本品同一批号样品(090128)6份,
按供试品溶液的制备方法和色谱条件进行测定,外标
法计算,没食子酸平均含量为 0.130315 %,RSD=
0.38 %,结果表明本方法具有较好的重现性。
2.8 加样回收率试验 取已知含量的复方盐肤木化痔
胶囊(090128,没食子酸平均含量为 0.130315 %)250
mg,精密称定,共计 6份,分别精密加入没食子酸
对照品储备液(每 1 mL中含没食子酸 251.5 μg)1.0
mL,低温蒸干,精密移入甲醇 25 mL,按正文含量
测定项下方法测定,结果见表 1,没食子酸平均加样
回收率为 101.83 %,RSD=1.67 %,表明本法具有较
好的加样回收率。
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Traditional Chinese Drug Research & Clinical Pharmacology,2011 January,Vol.22 No.1
t /min
t /min
t /min
表1 没食子酸加样回收率试验结果(n=6)
250.5
258.1
246.1
259.4
253.1
230.7
326.46
336.32
320.77
338.10
329.87
300.70
251.5
251.5
251.5
251.5
251.5
251.5
583.74
589.58
578.80
600.92
584.64
551.19
257.28
253.26
258.03
262.82
254.77
250.49
102.3
100.7
102.6
104.5
101.3
99.6
称样量/mg 已知量/μg 加入量/μg 测得量/μg 回收量/μg 回收率/%
2.9 样品含量测定 取复方盐肤木化痔胶囊(090128、
090613、091126),按 2.2.1项下对照品溶液制备方法
制备对照品溶液,按 2.2.2项下供试品溶液制备方法
制备供试品溶液,分别进样 10 μL,记录峰面积,外
标法计算没食子酸的含量,结果见表 2。
3 讨论
3.1 三七具有散瘀止血,消肿定痛等功效,为处方中
常用的名贵中药,含有人参皂苷 Rb1、Rg1、Rg2及
黄酮苷等成分。含三七的复方制剂中常以人参皂苷
Rb1、Rg1[4-6]的含量为指标。本制剂曾研究了 HPLC
法测定制剂中的人参皂苷 Rb1、Rg1,但由于本方中
三七入药量很低,被测成分很难有富集,因此不适合
作为质控指标。盐肤木是本方君药,为漆树科植物盐
肤木的根及叶,具有清热解毒,散瘀止血的功效,其
主要成分为没食子酸(五倍子酸),因此,本研究选择
没食子酸为质控指标。
3.2 由上述表2结果可知,三批次复方盐肤木化痔胶
囊中没食子酸含量略有差异,根据同时检测的盐肤木
药材中没食子酸含量,表明复方盐肤木化痔胶囊中没
食子酸含量的变化与药材有相关性。实验中曾观察到
柱温的变化会影响不同图谱中同一色谱峰的保留时
间,为获得重现性较好的色谱图及相应的峰面积,应
保持柱温恒定。HPLC法测定复方盐肤木化痔胶囊中
没食子酸的含量,可以排除干扰,得到较好分离效
果,直接采用色谱峰面积定量,结果准确,且方法简
单,重现性较好,便于推广。
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(编辑:宋威)
图1 HPLC色谱图
1. 没食子酸;A.对照品;B.复方盐肤木化痔胶囊;C.空白样品
表2 样品含量测定结果
090128
090613
091126
0.1321
0.2093
0.1648
0.1304
0.2137
0.1663
0.1284
0.2197
0.1562
0.1303
0.2142
0.1624
1.40
2.43
3.34
批 号 没食子酸含量/% 平均含量/% RSD/%
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