全 文 :[饮片炮制]
炮制对虎耳草中岩白菜素及其止咳抗炎作用的影响
覃容贵, 龙庆德, 范菊娣, 陆 路, 王玉娇
(贵阳医学院药学院,贵州 贵阳 550004)
收稿日期:2012-11-30
基金项目:贵州省中药现代化专项 [黔科合 中药专字 (2007)5016 号]
作者简介:覃容贵 (1970—) ,女,副教授,博士,从事中药资源及药理研究。Tel:18984114150,E-mail:qinronggui@ hotmail. com
摘要:目的 探讨不同炮制方法对虎耳草中岩白菜素的量及镇咳、抗炎作用的影响。方法 用 HPLC法测定虎耳草生
品、盐制品、醋制品、蜜制品、姜制品、酒制品中岩白菜素的量;采用浓氨水引咳法、二甲苯致小鼠耳廓炎症肿胀法
比较生品及各炮制品的镇咳、抗炎作用。结果 虎耳草中岩白菜素的量高低顺序为醋制 >蜜制 >盐制 >生品 >酒制 >
姜制。虎耳草延长小鼠的咳嗽潜伏期作用强弱为盐制组 >生品组 >蜜制组 >醋制组 >姜制组 >酒制组。虎耳草减少小
鼠的咳嗽次数作用强弱为醋制组 >姜制组 >蜜制组 >盐制组 >酒制组 >生品组。虎耳草对二甲苯致小鼠耳廓炎症肿胀
模型的抗炎作用强弱为姜制组 >盐制组 >醋制组 >生品组 >蜜制组。结论 不同炮制方法对虎耳草中岩白菜素含有量
及镇咳、抗炎作用有显著影响,虎耳草止咳宜用醋制品。
关键词:虎耳草;炮制;岩白菜素;止咳;抗炎
中图分类号:R284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2013)05-1027-04
doi:10. 3969 / j. issn. 1001-1528. 2013. 05. 040
Effect of processing on bergenit content of Saxifraga stolonifera related to cough
and inflammation
QIN Rong-gui, LONG Qing-de, FAN Ju-di, LU Lu, WANG Yu-jiao
(College of Pharmacy of Guiyang Medical University,Guiyang 550004,China)
KEY WORDS:Saxifraga stolonifera;processing;bergenit;preventing cough;anti-inflammation
虎耳草,为虎耳草科虎耳草属植物虎耳草 Sax-
ifraga stolonifera Meerb. 的干燥全草。味微苦、辛,
寒,有小毒;能祛风清热,凉血解毒。用于治疗急
性中耳炎、风热咳嗽、风丹热毒、风火牙痛等疾
病[1],是常用的民族药。《贵州省中药材、民族药
质量标准》2003 年版收载本品[2]。虎耳草的主要
成分岩白菜素具有镇咳祛痰作用,目前已从药用植
物中提取出来应用于临床,用于治疗慢性支气管
炎[3]。虎耳草临床多生用,为了降低毒性增强疗
效,对其进行了炮制方法的研究,旨在探讨其用于
止咳、抗炎的适宜炮制方法,炮制方法不仅限于传
统与止咳作用密切相关的方法 (如蜜制、盐制
等)。在前期炮制工作的基础上[4],本实验测定了
虎耳草止咳抗炎作用主要成分岩白菜素的量及止咳
抗炎作用在炮制前后的变化。
1 材料
1. 1 药材 虎耳草干燥药材,购自贵州省遵义市
药材市场,经龙庆德副教授鉴定为虎耳草正品 Sax-
firaga stolonifera Meerb.。
1. 2 主要药品与试剂 岩白菜素,购自中国药品
与生物制品检定所,编号 111532-200202;阿司匹
林,规格为 25 mg /片,江苏平光制药有限责任公
司,批号 110725;岩白菜片,规格为 125 mg /片,
云南白药集团大理药业有限责任公司,批号
100101;二甲苯,分析纯,上海试剂一厂;浓氨
水,25% ~28%,分析纯,太原市瑞正特化学试剂
有限公司。
1. 3 动物 昆明种小鼠,SPF 级,雌雄各半,体
质量 20 ~ 25 g。购自长沙市开福区东创实验动物科
技服务部,合格证号:SCXK (湘)2009-0012。
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1. 4 主要仪器 LC210A 岛津高效液相色谱仪,
附 Symmetry C18柱,美国 Waters公司;电子分析天
平,上海舜宇恒平科学仪器有限公司;计时器,鼎
国生物技术公司。
2 实验方法
2. 1 虎耳草炮制品的制备
2. 1. 1 生品 取干燥虎耳草药材,筛去碎屑,除
去杂质,作为生品。剪碎,置样品袋中,备用。
2. 1. 2 盐制 取 2 g 食盐,溶于 80 mL 蒸馏水,
制成盐水。称取生品 100 g,置密闭容器中,加入
上述盐水浸润,待浸透后,放入炒锅,调温至 100
℃,翻炒至黄色,冷却。置样品袋中,备用。
2. 1. 3 醋制 称取生品 100 g,置密闭容器中,加
入适量米醋闷润,待浸透后,放入预热至 100 ℃的
炒锅中,翻炒至黄色,冷却。置样品袋中,备用。
2. 1. 4 蜜制 取 45 g蜂蜜,溶于 15 g煮沸稍放冷
的蒸馏水,制成蜜水。称取生品 100 g,置密闭容
器中,加入上述蜜水浸润,待浸透后,放入炒锅,
调温至 100 ℃,翻炒至黄色,冷却。置样品袋中,
备用。
2. 1. 5 姜制 取 150 g 新鲜生姜置研钵中,加入
75 g蒸馏水,捣烂研磨制成姜水。称取生品 100 g,
置密闭容器中,加入上述姜水浸润,待浸透后,放
入炒锅,调温至 100 ℃,翻炒至黄色,冷却。置样
品袋中,备用。
2. 1. 6 酒制 称取生品 100 g,置密闭容器中,加
入适量黄酒闷润,待浸透后,放入炒锅,调温至
100 ℃,翻炒至黄色,冷却。置样品袋中,备用。
2. 2 生品及各炮制品中岩白菜素的测定[4]
2. 2. 1 色谱条件与系统性试验 Agilent Eclipse
XDB-C18色谱柱 (4. 6 mm ×150. 0 mm,5 μm) ;流
动相为甲醇-0. 1 mol /L H3PO4 水溶液 (13 ∶ 87,
V /V) ;检测波长为 260 nm;柱温为 35 ℃;体积
流量为 1. 0 mL /min;进样量为 5 μL。理论板数按
岩白菜素峰计算应不低于 7 800。
2. 2. 2 对照品溶液的配制 精密称取岩白菜素对
照品适量,加入 50% 甲醇配制成质量浓度为
0. 096 0 mg /mL的溶液,即得。
2. 2. 3 供试品溶液的配制 取供试品粉末 (过 40
目筛)1 g,精密称定,置于 100 mL 平底烧瓶中,
精密加入 75% 甲醇 25 mL,称定质量 (精确至
0. 000 1 g) ;回流提取 1 h,放冷,称定质量;用
75%甲醇补足减失的质量,摇匀,过滤,取滤液用
0. 45 μm微孔滤膜过滤,取续滤液,即得。
2. 2. 4 样品测定 分别吸取对照品溶液与供试品
溶液各 5 μL,注入液相色谱仪,按 2. 2. 1 项的色
谱条件测定,即得。
2. 3 生品及各炮制品止咳抗炎作用
2. 3. 1 样品制备 虎耳草生品及不同炮制品用 10
倍量 80%乙醇在 85 ℃水浴回流提取 2 次,每次 2
h,滤过,合并滤液。滤液减压回收溶剂至无醇
味,浓缩得膏状物。临用时用 0. 5%羧甲基纤维素
钠配制成所需浓度。
2. 3. 2 药物制备 取岩白菜片置于研钵中,加少
量乙醇润湿后,加 0. 5%羧甲基纤维素钠,边加边
研磨至均匀混悬液,并配制成所需浓度。阿司匹林
片同法制备,并配制成所需浓度。
2. 3. 3 对浓氨水引咳小鼠的止咳作用 取小鼠,
按体质量随机分为空白对照组、阳性对照组、酒制
组、姜制组、蜜制组、醋制组、盐制组、生品组。
每组 12 只,雌雄各半。空白对照组给予等体积的
0. 5%羧甲基纤维素钠溶液,阳性对照组给予岩白
菜片,各组每天按 0. 2 mL /10 g 灌胃给药 1 次,连
续给药 7 d,于末次给药后 60 min,将小鼠置于 1 L
的玻璃钟罩内,放置一棉球,棉球上用注射器注入
0. 5 mL 浓氨水刺激 30 s,记录小鼠开始咳嗽的时
间,即咳嗽潜伏期,然后取出小鼠继续观察并记录
3 min内的小鼠咳嗽次数。以腹肌收缩,同时张开
大口为指标,记咳嗽一次。
2. 3. 4 对二甲苯致小鼠耳廓炎症肿胀模型的作用
小鼠分组同上,除阳性对照组给予阿司匹林外,
其余各组给药及剂量同 2. 3. 3 项,连续给药 7 d,
于末次给药后 40 min,在小鼠右耳两面涂二甲苯
0. 04 mL致肿,左耳不涂为正常对照耳,1 h 后脱
颈椎处死,用 5 mm打孔器打下左耳和右耳同一部
位的耳片,电子分析天平上称定质量,计算肿胀
度。肿胀度 = [右耳质量 - 左耳质量] /左耳
质量。
2. 3. 5 数据处理 全部数据采用均数 ± 标准差
(珋x ± s)表示,采用 SPSS 13. 0 统计软件 Independ-
ent Samples T Test进行分析。P < 0. 05 作为显著性
差异界值。
3 结果
3. 1 生品及各炮制品岩白菜素的测定结果 与生
品比较,不同炮制方法对虎耳草中岩白菜素的量有
显著影响。其含有量高低顺序为:醋制 >蜜制 >盐
制 >生品 >酒制 >姜制。姜制明显降低药材中岩白
菜素的量,见表 1。
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表 1 虎耳草生品及各炮制品中岩白菜素含有量
Tab. 1 Content of bergenit in different processed products
of Saxifraga stolonifera
炮制方法 岩白菜素 /% RSD /%
生品 0. 119 0. 63
盐制 0. 125 1. 24
醋制 0. 394 1. 51
蜜制 0. 159 1. 16
姜制 0. 017 1. 25
酒制 0. 116 1. 04
3. 2 生品及各炮制品的止咳作用 与空白对照组
比较,虎耳草各给药组均能显著延长小鼠的咳嗽潜
伏期 (P < 0. 05) ,其作用强弱顺序为盐制组 >生
品组 >蜜制组 >醋制组 >姜制组 >酒制组。生品组
和盐制组延长小鼠的咳嗽潜伏期的作用强于阳性对
照组。
与空白对照组比较,虎耳草各给药组均能显著
减少小鼠 3 min内的咳嗽次数 (P < 0. 05) ,其作用
强弱顺序为醋制组 >姜制组 >蜜制组 >盐制组 >酒
制组 >生品组。醋制组、姜制组、蜜制组 3 min 内
咳嗽次数显著低于生品组,表明醋制、姜制、蜜制
均能显著增强虎耳草的止咳作用。醋制组减少咳嗽
次数作用与阳性对照组相当。
以上结果表明虎耳草生品及各炮制品对浓氨水
引咳小鼠具有显著的止咳作用 (见表 2)。
表 2 虎耳草生品及各炮制品的止咳作用 (x ± s,n =12)
Tab. 2 Preventing cough effects of different processed
products of Saxifraga stolonifera (x ± s,n =12)
组 别
剂量 /
(g·kg -1) 潜伏期
/ s 咳嗽次数 /
(次 /3 min)
空白对照组 — 18. 19 ± 4. 52 53. 46 ± 8. 02
生品组 10 32. 05 ± 8. 35*△ 44. 53 ± 7. 79*
盐制组 10 35. 21 ± 6. 64*△ 38. 71 ± 9. 43*
醋制组 10 25. 75 ± 3. 51* 29. 67 ± 5. 98* #□
蜜制组 10 31. 78 ± 7. 56* 37. 54 ± 6. 74* #
姜制组 10 24. 12 ± 7. 32* 31. 56 ± 8. 22* #
酒制组 10 22. 42 ± 8. 22* 42. 81 ± 7. 25*
阳性对照组 0. 07 27. 79 ± 8. 31 27. 78 ± 5. 64
注:与空白对照组比较,* P < 0. 05;与生品组比较,#P < 0. 05;
与阳性对照组比较,△P < 0. 05,□P > 0. 05。
3. 3 生品及各炮制品的抗炎作用 与空白对照组
比较,除酒制组外,虎耳草各给药组均能减少小鼠
耳肿胀率,表明该药对二甲苯致小鼠耳廓炎症肿胀
模型具有显著的抗炎作用。其作用强弱顺序为:姜
制组 >盐制组 >醋制组 >生品组 >蜜制组。姜制
组、盐制组、醋制组抗炎作用强于生品组,表明姜
制、盐制、醋制均能显著增强虎耳草的抗炎作用。
姜制组抗炎作用与阳性对照组相当 (见表 3)。
表 3 虎耳草生品及各炮制品的抗炎作用 (x ± s,n =12)
Tab. 3 Anti-inflammation effects of different processed
products of Saxifraga stolonifera (x ± s,n =12)
组 别 剂量 /(g·kg -1) 肿胀率 /%
空白对照组 — 1. 58 ± 0. 74
生品组 10 1. 24 ± 0. 63*
盐制组 10 0. 97 ± 0. 46* #
醋制组 10 1. 08 ± 0. 58* #
蜜制组 10 1. 37 ± 0. 50*
姜制组 10 0. 81 ± 0. 61* #□
酒制组 10 1. 92 ± 0. 21
阳性对照组 0. 085 0. 87 ± 0. 32
注:与空白对照组比较,* P < 0. 05;与生品组比较,#P < 0. 05;
与阳性对照组比较,△P < 0. 05,□P > 0. 05。
4 讨论
4. 1 虎耳草不同炮制品中岩白菜素的量高低为:
醋制 >蜜制 >盐制 >生品 >酒制 >姜制。醋制、蜜
制、盐制等加热炮制方法均能提高药材中岩白菜素
的量,而酒制、姜制使其量降低。岩白菜素为白色
疏松针状结晶或结晶性粉末,在甲醇中溶解,在水
或乙醇中微溶,其溶解度小,生物利用度低。本实
验结果醋制品中岩白菜素的量约为生品的 3 倍,据
文献报道,岩白菜素在 0. 1 mol /L HCl 中其溶解度
为 30. 73 mg /100 mL,在水中仅为 18. 20 mg /100
mL[5],说明岩白菜素在酸性溶液中溶解度显著提
高,因此醋制能提高虎耳草中岩白菜素的量。而其
他炮制方法对虎耳草中岩白菜素量也有较大影响,
其机理将在今后进行深入研究。
4. 2 虎耳草能延长小鼠的咳嗽潜伏期,其作用强
弱排序为:盐制组 >生品组 >蜜制组 >醋制组 >姜
制组 >酒制组。虎耳草能显著减少小鼠的咳嗽次
数,其作用强弱排序为:醋制组 >姜制组 >蜜制组
>盐制组 >酒制组 >生品组。虎耳草对二甲苯致小
鼠耳廓炎症肿胀模型具有显著的抗炎作用,其作用
强弱排序为:姜制组 >盐制组 >醋制组 >生品组 >
蜜制组。实验结果表明各种加热炮制方法使虎耳草
中岩白菜素的量发生显著改变,其止咳抗炎作用强
度也相应发生改变。止咳宜用醋制品,抗炎宜用姜
制品。
4. 3 从虎耳草的止咳作用来看,醋制组作用最强,
而醋制品中岩白菜素量约为生品的 3 倍,二者呈正
相关关系,说明醋制能显著提高药材中岩白菜素的
溶出,因而加强其止咳作用。但其他炮制品的止咳
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作用强弱与其岩白菜素量高低无直接正相关关系,
可能是因为止咳作用不仅与岩白菜素有关,还与虎
耳草中其他化学成分有关,是多组分作用的结果。
据文献报道,虎耳草主要化学成分有岩白菜素、槲
皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷、槲皮素 3-O-β-D-吡喃葡萄
糖苷、槲皮素、没食子酸、原儿茶酸、琥珀酸、反
甲基丁烯二酸、β-谷甾醇及长链烷烃等[6]。其中,
岩白菜素具有镇咳祛痰、抗炎作用[7],槲皮素具
有广泛的药理活性,包括抗癌、抗氧化、抗炎、抗
菌、心血管保护作用等[8],没食子酸具有较为肯
定的抗肿瘤、杀锥虫、抗炎、抑菌、抗病毒等作
用[9]。实验中发现,各种炮制方法不仅改变其中
岩白菜素量,而且也改变了槲皮素苷、槲皮素、没
食子酸、原儿茶酸等成分的量,醋制品止咳作用与
岩白菜素量之所以直接相关是因为其含量远远高于
生品,岩白菜素在其中起了主导作用。因此,如将
虎耳草用于止咳,建议进行醋制,下一步将对其醋
制工艺及其机理进行研究,以增强药物的疗效。
参考文献:
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透泵片制备工艺研究[J]. 时珍国医国药,2011,22(5) :
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昆明医学院学报,2012,(1) :150-154.
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2011,34(4) :440-442.
去皮晒干对北沙参挥发油成分的影响
张永清1,3,4, 崔海燕1,2, 胡晶红1,4
(1. 山东中医药大学,山东 济南 250355;2. 山东中医药高等专科学校,山东 莱阳 265200;3. 山东省中
药材良种选育工程技术研究中心,山东 济南 250355;4. 山东省高校中药资源学重点实验室,山东 济南
250355)
收稿日期:2012-09-03
基金项目:山东省科技发展计划项目 (2008GG2NS02022) ;山东省农业良种工程课题 (2009LZ01-03) ;国家重点基础研究发展计划
(973 计划)项目 (2007CB512601)
作者简介:张永清 (1962—) ,男,博士,教授,博士生导师,从事中药资源及其质量控制研究。E-mail:zyq622003@ 126. com
摘要:目的 比较直接晒干与去皮晒干北沙参挥发油成分差异,为确定合理的产地加工方法提供参考。方法 采集北
沙参植株根部,分别直接晒干和烫后去皮晒干,以水蒸气蒸馏法提取挥发油,采用 Agilent7890A-5973N 型气相-质谱
联用仪进行分析。结果 直接晒干与去皮晒干北沙参挥发油成分具有明显差异,直接晒干北沙参挥发油以萜类和醛酮
类化合物为主,去皮晒干北沙参挥发油中的萜类化合物相对含有量显著降低,直接晒干能够保留种类更多的化合物。
结论 直接晒干较去皮晒干更能保证北沙参药材质量。
关键词:北沙参;产地加工;去皮晒干;挥发油
中图分类号:R284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2013)05-1030-05
doi:10. 3969 / j. issn. 1001-1528. 2013. 05. 041
Effect of peeling-drying on volatile oil of Glehniae Radix
ZHANG Yong-qing1,3,4, CUI Hai-yan1,2, HU Jing-hong1,4
(1. Shandong University of Traditional Chinese Medcine,Jinan 250355,China;2. Shandong College of Traditional Chinese Medcine,Laiyang 265200,
0301
2013 年 5 月
第 35 卷 第 5 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
May 2013
Vol. 35 No. 5