全 文 ：第 28卷 第 5期
2 0 1 0年 5月
中 华 中 医 药 学 刊
CH INESE ARCH IVES OF TRAD IT IONAL CH INESE MED IC INE
Vo.l 28 No. 5
M ay 2 0 1 0
中
药
研
究
扫
描
中华中医药
学刊
4种省沽油属植物总酚类物质抗氧化活性的研究
朱 倩
(海宁市人民医院, 浙江 海宁 314400)
摘 要:目的:比较省沽油属 4种植物干燥叶片中不同提取部位总酚类物质含量及其抗氧化活性测定, 为开
发利用打下基础。方法:用 70%乙醇提取各植物干燥叶片,浓缩得乙醇浸膏, 并用系统溶剂萃取法得到乙酸乙酯
和氯仿两个部位; 然后采用改良的 Folin -C iocalteu比色法测定各植物各部位总酚类物质含量, 并通过 DPPH氧化
自由基清除活性实验及抗过氧化亚硝酸盐硝化活性实验分析各总酚类物质抗氧化活性。结果:比色法结果表明,
四种植物中乙酸乙酯部位总酚类物质含量均高于氯仿部位,其中省沽油干燥叶片乙酸乙酯部位总酚类物质含量
最高,抗氧化活性最强。结论: 省沽油属植物叶片中含有活性酚类物质, 其中省沽油叶片乙酸乙酯部位含量最高,
活性最强,值得进一步开发利用。
关键词:省沽油;含量测定; 活性分析
中图分类号: R284. 1 文献标识码: A 文章编号: 1673 - 7717( 2010) 05 -1100 - 03
Study of the tota lPhenolic the Total Phenolic Content and Antiox idant
Activity in D ifferent Fractions of FourS taphy lea L. Species
ZHU Q ian
(H aining Peop le s Hospita,l H aining 314400, Zhejiang, Ch ina)
Abstrac:t Ob jective: To compare the to tal pheno lic conten t and antiox idant ac tivity in d iffe rent frac tions of fou r
S taphy lea L. species, and pave thew ay fo r its further exp lo ita tion. Me thods: The 70% e thano l ex tracts o f the dried and
c rashed leaves of the four different species we re d rawn and furthe r separa ted w ith sy stem ic so lvent ex traction to ge t ch lo ro-
fo rm and e thy l ace tate fractions. The an tioxidant po tentia l ( DPPH rad ica l and pe roxyn itrite scavenging activ ity) o f these
frac tions we re a lso de term ined and a co rre la tion be tw een the pheno lic content and antioxidan t activ ities of the e thy l acetate
frac tion has been found th rough chrom atom e try and HPLC m ethods. R esu lts: chrom atom e try resu lts revealed tha t a ll e thy l
aceta te fractions w ere con tentm ore pheno ls than that of ch lo ro form fractions, and one of them, obtained from S. bum a lda
DC. po ssessed the highe st activ ity. Conclusion: The leaves of S. bum alda L. plan t con tain pheno ls, and S. bum a ldaDC.
w ith them ost con tent which we rem a in ly d istributed in e thy l aceta te frac tion and po ssess h igh antiox idant ac tiv ity, dese rve
fur ther study
Keyw ords: Staphy leaceae; assay ing ; activ ity ana ly sis
收稿日期: 2009 - 12 - 16
作者简介:朱倩 ( 1972 - ),女,浙江海宁人,主管药师,学士,研究方
向:临床药学。
省沽油 ( Staphy lea bum a lda DC )别名珍珠花、双蝴蝶、
马铃柴,为省沽油科多年生落叶灌木;约 10种, 分布于北温
带,我国有 4种; 其叶鲜绿,花白色, 具有较高观赏价值。果
实和根入药, 5中华本草6中记载其果实水煎剂具有润肺止
咳作用; 5中草药售6记载, 省沽油可清热解毒、消肿、散结。
民间应用表明,长期食用对无名肿毒、皮炎、跌打损伤、动脉
粥样硬化、肠炎等疾病具有一定的疗效。周芳 [ 1]等研究发
现,省沽油嫩梢中具有较高含量的蛋白质、氨基酸和脂肪等
营养物质,可作为天然食品资源开发。毛多斌等 [2 - 4 ]采用
超临界萃取、气 -质连用等方法对省沽油种子中脂肪酸组
成、角鲨烯和维生素 E等的含量进行了分析, 发现种子中
含有近 20种脂肪酸, 其中亚麻酸和亚油酸含量较高, 分别
为 9. 08%和 53. 83% ; 此外,超临界萃取的种子油中含角鲨
烯 4. 65% , 含维生素 E1. 58% , 两者含量均远高于常用食用
油,作为食用油及化妆品油源具有广阔的开发和利用前景。
从上可以看出,国内对该植物的种子化学成分及其药
用价值等方面研究报道较多, 而对该植物其它部位研究报
道相对较少。 Jantov‚等 [5 - 6 ]对该植物生物活性研究发现,
其叶片提取物具有较强的细胞毒性及抗菌活性, 但其具体
活性物质仍然未知。Lacikova L等 [7]研究发现其中含有氨
基、黄酮类、三萜类、类固醇、大柱烷、糖类及有机脂肪酸等
化合物。为此, 本研究将对省沽油属中四个不同种
( S taphy lea buma lda DC. 、S taphy lea shwe lien sis W. W.
1100
DOI：10.13193/j.archtcm.2010.05.206.zhuq.049
第 28卷 第 5期
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中 华 中 医 药 学 刊
CH INESE ARCH IVES OF TRAD IT IONAL CH INESE MED IC INE
Vo.l 28 No. 5
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中华中医药
学刊
Sm ith.、S taphy lea ho lo carpa H em s.l 和 S taphy lea fo rresti-
i Ba l.f .f )的叶片中极性 (乙酸乙酯部位 )和非极性部位
(氯仿 )总酚类物质的含量进行比较, 并对其抗氧化生物性
进行评价,以考察其总酚含量与生物活性之间的关系,为进
一步开发利用省沽油属植物打下基础。
1 实验材料
1. 1 实验药品
四种省沽油属植物: 省沽油 ( Staphy lea bum a lda DC,
SB)、腺齿省沽油 ( S taphy lea shwe lien sis W. W. Sm ith,
SS)、膀胱果 ( S taphy lea ho locarpa H em s.l , SH )和嵩明省沽
油 ( S taphy lea forrestii Ba l.f .f , SF )叶子均由本实验室采
集,室温晾干后粉碎备用。
1. 2 主要的实验试剂
2, 2 -联苯 - 1 -三硝基苯肼, DPPH: 美国 Sigm a公司;
没食子酸:四川锦润健康产业有限公司; 儿茶素: 四川锦润
健康产业有限公司; 甲酸 色谱纯: 天津市光复精细化工研
究所;乙菁 色谱纯: m erck公司;氢氧化钠 分析纯: 常熟市
杨园化工有限公司; 硫酸铜: 上海中声化工有限公司; 酒石
酸:浙江省临安市宏山化工厂;碳酸钠: 眉山市川美化工有
限公司。
1. 3 主要实验仪器
HP 1100 H PLC: 德国 Ag ilent公司; UV -V IS分光光度
计:上海棱光技术有限公司; SHZ - D ( Ó )循环水式真空
泵:巩义市英谷予华仪器厂; SENCO R - 201旋转蒸发仪:
上海中顺生物科技有限公司; AR2130电子精密天平: Ohaus
Co rp. P ine; Brook, N J, USAPB602 -N电子精密天平: e ttle r -
To ledo Instr. ( Shanghai) L td. ; DGG - 9070A电热恒温鼓风
干燥箱:上海森信实验仪器有限公司。
2 实验方法
2. 1 药物提取
分别称取 4种省沽油属植物粉碎叶片干品 100g,分别用
70%乙醇回流提取 3次, 每次 300mL, 过滤收集滤液,减压回
收乙醇; 残余物用适量蒸馏水稀释后用系统溶剂萃取法分成
石油醚、氯仿、乙酸乙酯和水 4个部位,并对非极性的氯仿部
位 ( CH )和极性的乙酸乙酯部位 ( EE)做进一步分析。
2. 2 总酚含量测定
以没食子酸为标准品, 采用改良的 Folin - C ioca lteu比
色法对上述 CH和 EE两个部位的总酚含量进行测定:称取
适量上述 CH和 EE粗品于 10mL容量瓶中, 用 700u lDM SO
溶解,加入 400LL Fo lin - Cioca lteu反应液, 混匀 3m in后用
Na2CO3 ( 75 g /L ) 定容至刻度; 2h 后上清液取出并于
5000rpm离心 5m in, 然后立即于 760nm 处测定吸光度值。
总酚含量以没食子酸为标准, 换算其 100g叶片干品中含总
酚量克数表示 - g /100g,每个样品重复 3次, 最后数据以 €x
? s表示 [8 ]。
2. 3 抗氧化活性分析
2. 3. 1 DPPH自由基清除活性分析 称取 CH 和 EE适
量,用 DMSO溶解并稀释成 1m g /m L工作液, 吸取 30LL并
用 0. 1mM的 DPPH 甲醇液稀释至 2. 0m L, 静置 5m in后于
517nm处测定吸光度值。以儿茶素为对照计算自由基清除
活性,并以每 100g叶子干品中相当于儿茶素毫摩尔含量表
示,重复测定 3次,最后数据以 €x ? s表示 [9]。
2. 3. 2 抗过氧化亚硝酸盐硝化活性分析 称取 CH和 EE
适量, 用 DMSO 溶解并用等体积的酪氨酸 ( 1. 0mM ) -
KH2PO4 -Na2HPO 4缓冲液 ( pH = 6. 0)稀释成 1m g /mL工
作液,然后吸取 42LL立即与 8LL过氧化亚硝酸盐 ( 10. 0
mM )的 N aOH ( 0. 1mM )溶液于 HPLC自动采样器中混合均
匀,直接进样 HP1100HPLC系统: 色谱柱为 Supe lcosil ABZ
+ P lus色谱柱 ( 250mm @ 4. 6mm, 粒度 5Lm 柱温 25e ); 流
动相为 90% 40 mM HCOOH 和 10% CH 3CN ( v /v ), 流速
1mL /m in;检测波长 ( 276 ? 20) nm。以儿茶素为对照计算样
品抗过氧化亚硝酸盐硝化活性,并以每 100g叶子干品中相
当于儿茶素毫摩尔含量表示,重复测定 3次, 最后数据以 €x
? s表示 [10]。
3 实验结果
3. 1 总酚含量测定实验结果
按照实验方法中所述, 采用改良的 Fo lin -C iocalteu比
色法测定 4种省沽油属植物氯仿和乙酸乙酯提取部位总酚
含量,结果如表 1所示。其中各品种中乙酸乙酯部位 ( EE)
总酚含量均高于氯仿部位 ( CH ), EE中总酚含量在各品种
中的变化较大, 从 10. 6 ~ 2. 3不等, 其中 SBEE中含量最
高, SFEE中含量最低; CH中酚类物质相对较少, 其含量从
高到低依次为 SBCH > SHCH > SSCH > SFCH。
表 1 省沽油属乙酸乙酯部位和氯仿部位总酚含量
及其抗氧化活性分析结果
样品# 总酚含量
( g /100g)
DPPH自由基清除
活性 (mm ol /100g)
过氧化亚硝酸盐清除
活性 (mm ol /100g)
SBEE 10. 6 ? 0. 1 22. 0 ? 0. 2 26. 8 ? 0. 4
SSEE 6. 1 ? 0. 2 10. 9 ? 0. 2 13. 3 ? 0. 3
SH EE 7. 2 ? 0. 2 15. 5 ? 0. 4 17. 2 ? 0. 4
SFEE 2. 3 ? 0. 1 2. 2 ? 0. 2 4. 6 ? 0. 1
SBCH 4. 2 ? 0. 5 - 6. 1 ? 1. 7
SSCH 3. 5 ? 0. 1 - 8. 0 ? 1. 8
SHCH 3. 8 ? 0. 1 - 4. 0 ? 1. 0
SFCH 2. 9 ? 0. 1 - 2. 1 ? 0. 7
注: / #0XXEE = 乙酸乙酯部位; XXCH = 氯仿部位。
3. 2 抗氧化活性分析结果
3. 2. 1 DPPH自由基清除活性测定结果 按照实验方法
中所述步骤对省沽油属 4种 EE和 CH部位进行了 DPPH
自由基清除活性分析,发现该法可以对 EE部位进行测定,
结果表明, 其 DPPH 自由基清除活性与各品种中 EE部位
总酚类物质含量呈正相关;然而, 该法不能对上述 4个品种
CH部位进行 DPPH活性准确测定, 这可能是由于 CH部位
含有某些未知化学成分对反应试剂有干扰,而无法准确标
定清除 DPPH自由基活性。为此, 只有进一步通过下述抗
过氧化亚硝酸盐硝化活性测定来反应各 CH部位抗氧化活
性。
3. 2. 2 抗过氧化亚硝酸盐硝化活性测定结果 酚类物质
对过氧化亚硝酸盐引起的酪氨酸硝化作用有保护作用, 为
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收稿日期: 2009 - 12 - 22
作者简介:刘芳芳 ( 1984 - ) ,女, 山东泰安人,硕士研究生, 研究方
向:药物化学中药新药研究。
通讯作者:赵正保 ( 1961 - ) ,男, 山西运城人, 教授,博士,研究方
向:药物化学中药新药研究。Te:l 0351-4690242。
此,笔者采用此法进一步对上述省沽油属 4种 EE部位和
CH部位抗过氧化亚硝酸盐硝化活性进行了分析。结果表
明,酚类物质含量与其清除过氧化亚硝酸盐活性有很好的
相关性,而其中 EE部位活性仍然均比 CH部位强, 其各品
种 EE部位和 CH部位活性强弱顺序同前总酚含量顺序。
4 讨 论
现已研究证实许多疾病的发生与发展与自由基产生的
氧化损伤密切相关,而自由基清除剂在清除机体内自由基,
保护机体免受氧化损害中起重要作用。因此, 近年来对自
由基清除剂的研究备受关注; 其中多酚是一大类具有较强
抗氧化活性的物质, 它们往往可以通过清除体内氧化自由
基而起到抗癌、抗动脉粥样硬化、抗炎及抗衰老等作用。为
此,笔者首次对省沽油属 4种植物中不同提取部位总酚含
量及其抗氧化活性进行了初步研究。发现, 省沽油属 4个
不同种中酚类物质基本上位于乙酸乙酯部位, 其中省沽油
叶乙酸乙酯部位总酚类物质含量最高, 抗氧化活性最强,值
得进一步研究开发。
参考文献
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第 28卷 第 5期
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比较钴 - 60辐照灭菌与高温灭菌对四神丸主要成分的影响
刘芳芳, 白志宇,曲婷丽,赵正保,毕小平
(山西医科大学药学院,山西 太原 030001)
摘 要:目的: 研究钴 - 60辐照灭菌对四神丸主要成分的影响。方法: 对中药四神丸平行进行钴 - 60辐照灭
菌和传统高温灭菌对比试验, 通过微生物检查对两种灭菌方法的效果进行比较;采用薄层色谱法 ( TLC ) 定性研
究两种灭菌方法对处方中肉豆蔻、补骨脂、吴茱萸中有效成分的影响; 采用高效液相色谱法 ( H PLC )定量研究两
种灭菌方法对四神丸中有效成分补骨脂素和异补骨脂素含量的影响。结果:钴 - 60辐照灭菌和高温灭菌均达到
灭菌要求。四神丸主要成分在钴 - 60辐照前后没差异。结论: 钴 -60辐照可用于四神丸的灭菌。
关键词:钴 -60灭菌;四神丸; 薄层色谱法,高效液相色谱法
中图分类号: R284. 1 文献标识码: A 文章编号: 1673 - 7717( 2010) 05 -1102 - 03
I nfluences of Co - 60 Irrad iation Ster i lization onM ajor Constituent of S ishen P i lls
L IU Fang-fang, BA I Zhi-yu , QU T ing-l,i ZHAO Zheng-bao, BI X iao-ping
( S chool of Pharmaceu tical S cience, Sh anxiM ed icalUn iversity, Taiyuan 030001, Shanx,i Ch ina)
Abstrac:t Ob jective: To study the influences of Co -60 irrad iation ste rilization on m ajor constituent of Sishen P ills.
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