全 文 ：1078 2010 年第 5 期
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到 52%、32%，相应增加了优等、1 级产品的比
例，提高了商品的高价值性。虽然目前农民还是依
靠筛选进行分级，但是新的特征参数可以依靠数字
图像特征提取得到，对未来的自动化、规模化发展
具有较好的指导意义，所以新的分级标准适于目前
我省山核桃生产水平，且有一定的先进性，同时也
对核桃选种，优胜劣汰，提高科学管理水平，推广
优良品种等工作具有一定的促进和指导作用。
参考文献:
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(责任编辑:戴美松)
收稿日期:2010-05-16
作者简介:李 桥 (1985 －)，男，宁夏西吉人，从事植物源农药与农药的环境毒理学研究工作。E-mail:liqiaoxinong@ 163. com。
杨梅叶提取物抑菌活性初步研究
李 桥1，杨小丰2，张绍勇1，张 旭1，陈安良1
(1. 浙江林学院 林业与生物技术学院，浙江 临安 311300;2. 浙江省湖州市新农村建设研究中心，浙江 湖州 313000)
摘 要:用菌丝生长速率法测定杨梅叶甲醇浸膏的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇 4 个萃取相对番茄灰
霉病菌 (Botrytis cinerea)，番茄早疫病菌 (Altemaria solani)，水稻纹枯病菌 (Rhizoctonia solani)，小麦赤霉病菌
(Fusaium graminearum)，黄瓜炭疽病菌 (Colletotrichum lagenarium)，玉米大斑病菌 (Setosphaeria turcica)6 种病原
菌的抑菌活性。结果表明，杨梅叶粗提物乙酸乙酯萃取相和正丁醇相抑菌活性最好，乙酸乙酯相对 4 种病原菌
的 EC50分别是 3. 32，4. 33，2. 21，5. 42 g·L
－ 1;正丁醇相 EC50分别是 1. 92，0. 88，8. 86，9. 22 g·L
－ 1。乙酸乙
酯相对水稻纹枯病菌、正丁醇相对番茄灰霉病菌的毒力最强。
关键词:杨梅叶;抑菌活性;提取物;毒力
中图分类号:S 667. 6 文献标志码:A 文章编号:0528-9017(2010)05-1078-03
植物源农药作为生物农药的一部分，其开发研
究一直是新农药研究的热点课题之一［1］。杨梅
(Myrica rubra)属杨梅科、杨梅属果树，多年生常
绿乔木，为我国特产。杨梅叶是可以快速生长的再
生资源，资源丰富。对杨梅叶的研究目前主要集中
在 2 个方面:一是对其中化学成分的研究［2 － 6］;二
是杨梅叶提取物的抑菌活性研究。胡静丽［7］测定
了杨梅叶乙醇提取物对食品常见污染菌的抑制效
果，结果显示，对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌革兰
氏阳性菌以及对食品中常见腐败菌如橘青霉、圆弧
青霉和黑曲霉效果较好。陈蓉蓉等［8］用矮杨梅叶
水煎物作了抑菌试验，结果表明，对 G + 金黄色葡
萄球菌有抑制作用。沈建国等［9］用杨梅叶提取物
进行了抗烟草花叶病毒的研究，结果表明，具有较
强的体外钝化和抗病毒侵染作用。夏其乐等［10］研
究了杨梅叶提取物的抗氧化活性，结果显示，具有
很强的抗氧化活性。刘洪波等［11］采用菌丝生长速
率法测定了杨梅叶粗提物对 6 种常见植物病原菌的
抑制活性，结果表明，杨梅叶丙酮提取物对常见植
物病原菌有较高的抑制作用。我们采用菌丝生长速
率法测定杨梅叶甲醇浸膏的石油醚、氯仿、乙酸乙
酯、正丁醇 4 个萃取相对农业上常见的植物病害病
原菌的抑菌作用，旨在为寻找杨梅叶中抑菌活性物
质奠定基础。
DOI:10.16178/j.issn.0528-9017.2010.05.060
李 桥，等:杨梅叶提取物抑菌活性初步研究 1079
1 材料与方法
1. 1 材料
试验用杨梅叶，2008 年 7 月采于浙江林学院校园
内，室温下自然风干，粉碎，过 40 目筛 (孔径 0. 37
mm)，密封，置于冰箱中 (0 ～4 ℃)备用。
1. 2 植物病原菌
植 物 病 原 菌， 番 茄 灰 霉 病 菌 (Botrytis
cinerea)，番茄早疫病菌 (Altemaria solani)，水稻纹
枯 病 菌 (Rhizoctonia solani)，小 麦 赤 霉 病 菌
(Fusaium graminearum )，黄 瓜 炭 疽 病 菌
(Colletotrichum lagenarium )，玉 米 大 斑 病 菌
(Setosphaeria turcica)，均由浙江林学院森林保护实
验室提供。
化学试剂，甲醇、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、
正丁醇均为分析纯。
1. 3 提取
取 1. 1 节所得样品 2 kg，在室温下用甲醇浸提
3 次，浸提时间分别为 24，24，48 h，每次浸提后
再超声提取 45 min，合并提取液，减压浓缩得浸膏
356. 85 g。将浸膏 300. 00 g 加去离子水 800 mL 混
匀得悬浊液，分别用等量的石油醚 (60 ～ 90 ℃)、
氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，每种溶剂萃取
3 次，浓缩至膏状，得石油醚相 19. 93 g、氯仿相
14. 81 乙酸乙酯相 18. 46 g、正丁醇相 28. 26 g。
1. 4 抑菌活性测定
1. 4. 1 不同溶剂萃取相毒力测定方法
采用菌丝生长速率法测定杨梅叶各萃取相对供
试植物病原菌的抑制作用。将各萃取相用丙酮溶
解，再配制含各萃取相质量浓度 10 g·L － 1的 PDA
培养基，倒入直径为 9 cm 的培养皿中，对照为丙
酮。每处理设 4 个重复，向上述各培养基中接入生
长旺盛的直径为 5 mm 的病原菌菌饼，每皿 1 块。
将接好菌的培养基用保鲜膜密封，置于 25 ℃条件
下培养，待空白对照菌丝长满培养皿后，采用十字
交叉法测量各自的菌落直径。菌丝生长抑制率计算
公式:抑制率 (%) = (对照菌落直径 － 处理菌
落直径) × 100 /对照菌落直径。菌落直径 (cm)
= 测量菌落直径平均值 － 0. 5。0. 5 为菌饼直径。
1. 4. 2 乙酸乙酯、正丁醇萃取相精密毒力测定
测定方法同 1. 4. 1 节，用丙酮溶解杨梅叶乙酸
乙酯和正丁醇萃取相，再配制不同浓度的培养基，
培养基中各萃取相浓度为 1，5，10，20 g·L － 1，
供试菌为玉米大斑病、番茄灰霉病、水稻纹枯病、
小麦赤霉病等 4 种。
2 结果与分析
2. 1 萃取相对病原菌菌丝生长的抑制作用
杨梅叶不同溶剂萃取相对供试植物病原菌菌丝
生长的抑制作用见表 1。在 10 g· L － 1浓度下，各
萃取相之间对多数供试病原菌抑菌作用差异较大。
其中乙酸乙酯相总体抑菌效果最好，其对番茄早疫
病菌、水稻纹枯病菌、小麦赤霉病菌和黄瓜炭疽病
菌的抑制效果均为最好，抑制率依次为 62. 61%，
73. 33%，59. 44%和 49. 31%;正丁醇相抑制效果
次之，其对番茄灰霉病菌和玉米大斑病菌的抑制率
最高，抑制率分别为 81. 52% 和 72. 12;石油醚相
的抑菌作用最差。
表 1 不同溶剂萃取相对供试植物病原菌菌丝生长的抑制作用
萃取相
抑制率 /%
番茄灰霉病菌
(7 d)
番茄早疫病菌
(9 d)
水稻纹枯病菌
(3 d)
小麦赤霉病菌
(5 d)
黄瓜炭疽病菌
(7 d)
玉米大斑病菌
(8 d)
石油醚 － 77. 45 d 26. 63 c 22. 64 d 33. 15 b 14. 44 c 26. 67 c
氯仿 － 18. 21 c 19. 26 c 4. 31 c 38. 46 b 15. 83 c 44. 24 b
乙酸乙酯 62. 50 b 62. 61 a 73. 33 a 59. 44 a 49. 31 a 60. 91 a
正丁醇 81. 52 a 39. 38 b 52. 77 b 50. 21 a 34. 17 b 72. 12 a
注:萃取相的浓度为 10 g·L － 1;抑制率为负表示萃取相对病原菌无抑制作用;同列数据后标不同字母者，表示两者差异显著。
2. 2 乙酸乙酯、正丁醇萃取相对病原菌的毒力
表 2、3 可见。杨梅叶乙酸乙酯萃取相对 4 种
供试病原菌的毒力差异不大，EC50最大值与最小
值之间的差值为 3. 21 g·L － 1。乙酸乙酯萃取物
对水稻纹枯病的毒力最强，EC50为 2. 21 g·L
－ 1，
对玉 米 大 斑 病 菌 的 毒 力 次 之， EC50 为 3. 32
g·L － 1;对小麦赤霉病菌的毒力最弱， EC50 为
5. 42 g·L － 1。
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表 2 杨梅叶乙酸乙酯萃取相对供试病原菌的毒力
供试病原菌 毒力回归方程 相关系数 EC50 / (g·L
－ 1) 95%置信限
玉米大斑病菌 y = 0. 853 8x + 4. 554 7 0. 988 3. 32 2. 95 ～ 3. 75
番茄灰霉病菌 y = 1. 141 2x + 4. 274 1 0. 993 4. 33 3. 97 ～ 4. 70
水稻纹枯病菌 y = 1. 111 4x + 4. 617 6 0. 986 2. 21 1. 97 ～ 2. 47
小麦赤霉病菌 y = 1. 234 9x + 3. 808 9 0. 999 5. 42 4. 98 ～ 5. 88
表 3 杨梅叶正丁醇萃取相对供试病原菌的毒力
供试病原菌 毒力回归方程 相关系数 EC50 / (g·L
－ 1) 95%置信限
玉米大斑病菌 y = 1. 003 4x + 4. 715 8 0. 986 1. 92 1. 68 ～ 2. 20
番茄灰霉病菌 y = 0. 753 0x + 5. 073 8 0. 990 0. 88 0. 62 ～ 1. 03
水稻纹枯病菌 y = 1. 277 5x + 3. 789 7 0. 991 8. 86 8. 15 ～ 9. 61
小麦赤霉病菌 y = 1. 234 9x + 3. 808 9 0. 997 9. 22 8. 46 ～ 10. 05
杨梅叶正丁醇萃取相对番茄灰霉病菌的毒力最强，
EC50为 0. 88 g·L
－ 1;对玉米大斑病菌的毒力次之，
EC50为 1. 92 g·L
－ 1;对小麦赤霉病菌的毒力最弱，
EC50为 9. 22 g·L
－ 1。
3 小结和讨论
杨梅叶中含有多种黄酮类化合物［2］，黄酮类
化合物具有广泛生物活性［12］，而乙酸乙酯可以萃
取出黄酮类化合物，因此本试验中乙酸乙酯对各种
供试菌的活性很可能是其中黄酮类化合物的抑菌作
用。此外，正丁醇相也具有良好的抑菌作用，说明
杨梅叶中除黄酮类化合物之外还有其它类型抑菌活
性物质，值得进一步研究。
本试验只研究了杨梅叶乙酸乙酯萃取相、正丁
醇萃取相对供试菌的菌丝生长速率的抑制活性，并
且只对几种供试菌种的毒力进行了测试，尚未进行
盆裁药效试验。下一步将进行活体和室外试验，并
扩大供试菌种范围，以确定杨梅叶提取物的杀菌
谱，为以后的防治工作提供参考。
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(责任编辑:张才德)