全 文 ：文章编号:1000-2332(2000)01-0050-04
收稿日期:1999-09-03
作者简介:张虹(1962-),女 ,北京人 ,讲师 ,硕士 , 1991年赴美国农
业部南方研究中心进修 ,主要从事天然产物的研究.
刘寄奴提取液对亚硝化反应的抑制作用
张　虹 ,许　钢 ,袁建耀
(杭州商学院 食品科学与工程系 ,浙江 杭州　310035)
摘要:研究了不同浓度的刘寄奴提取物对亚硝胺(NDMA)合成的阻断作用及对亚硝酸钠的清
除作用 ,并用Vc为对照品比较其阻断与清除能力.结果表明:当提取物中固形物含量为63.52
mg/mL(其黄酮含量相当于 9.06 mg/mL)时 ,对亚硝胺的阻断力可高达 93.88%;当提取物中固
形物含量为 111.16 mg/mL(其黄酮含量相当于 15.85 mg/mL)时 ,对亚硝胺的阻断力可高达
89.36%;与 1 mg Vc比较 ,当提取物中黄酮含量也为 1 mg 时 ,对亚硝胺的阻断力和对亚硝酸钠
的清除率分别为 49.64%和 21.99%;同样条件下 Vc 的阻断与清除率分别为 62.14%和
28.37%.
关键词:刘寄奴;亚硝酸钠;亚硝胺;阻断;清除
中图分类号:TS201.2　　　　文献标识码:A
1　前言
刘寄奴 ,又名奇蒿 ,六月霜 ,南刘寄奴 ,千粒
米 ,主要分布于长江流域 、两广 、云贵等地区 ,野生
于山坡 、林下 ,作为一种中草药其医疗作用早为人
们所熟悉 ,有祛风除湿 、解毒生肌 、止血止痛等功
效.在民间 ,夏季人们亦有直接泡水食用的习惯 ,
用以消暑 、养生 、保健 ,但目前在此方面的研究甚
少.刘寄奴的主要化学成分为 5 ,7-二羟基 6.3′.
4′-二甲氧基黄酮 、西米杜鹃醇 、生物碱 、其他黄酮
类化合物及其衍生物和酚类等[ 1].
N-亚硝基化合物及其前体物仲胺和亚硝酸盐
在人们的生活和工作环境中广泛分布 ,亚硝酸盐
与仲胺无论是在实验室还是在自然条件下 ,或在
人体和动物体内均能反应合成亚硝胺 ,尤其是在
人和动物的胃中更适宜于合成亚硝胺.亚硝胺能
引起人和动物的肝脏等多种器官的恶慢性肿瘤 ,
是当前最令人关注的致癌物之一[ 2].
　　本文采用了比色法[ 3]及紫外光解法[ 2]分别测
定刘寄奴提取液对亚硝酸盐的清除作用和对
NDMA合成的阻断作用 ,旨在为刘寄奴作为抗癌
防癌食品资源开发做些探索工作 ,同时弥补目前
研究刘寄奴对亚硝化反应抑制作用方面的空白.
2　实验材料
2.1　原料
刘寄奴购自于浙江临安的中药市场.
2.2　设备及试剂
2.2.1　主要设备
UV —160H紫外分光光度计 ,电动搅碎机 ,减
压旋转蒸发仪 ,PHS —2型酸度计 ,紫外分析仪.
2.2.2　主要试剂
甲醇 ,丙酮 ,无水乙醇 ,Vc ,亚硝酸钠 ,α-萘胺 ,
0.5 mol/L ,pH=3.0的柠檬酸钠-盐酸缓冲液(配
制方法见文献[ 4]), 1×10-3 mol/L 的二甲胺溶
液 ,0.5%的碳酸钠溶液 ,0.2%萘基盐酸二氨基乙
烯溶液 ,1%对氨基苯磺酸溶液 ,0.4%对氨基苯磺
酸溶液.
3　实验方法
3.1　刘寄奴提取液的制备
刘寄奴样品经电动搅碎机搅碎后备用.
称取以上搅碎的刘寄奴样品 ,以固液比 1∶10
的比例加入 55%的丙酮 ,75 ℃水浴 0.5 h ,所得的
提取液经抽滤 ,洗涤后 ,用减压旋转蒸发仪蒸干 ,
称量固形物重量 ,然后将固形物定容至 20 mL ,计
第 21卷第 1期　　　　　　　　　　　郑州粮食学院学报　　　　　　　　　　　Vol.21 ,No.1
2000年 3月　 　　　　　　　　Journal of Zhengzhou Grain College　　　　　　 　　　Mar.2000
DOI :10.16433/j.cnki.issn1673-2383.2000.01.014
算固形物浓度 ,并测定黄酮浓度.
黄酮浓度的测量方法:取以上挥干后并浓缩
的样液 1 mL到 25 mL 容量瓶中 ,加入 0.7 mL 的
NaNO2(1∶20)摇匀后放置 5 min , 加入 0.7 mL
Al(NO3)3(1∶10)放置 6 min ,再加入 5 mL 1 mol/L
的NaOH溶液 ,用 30%乙醇溶液定容至刻度 ,摇匀
后放置10 min ,510 nm紫外光下测吸光度 ,用空白
作对照.
3.2　NDMA阻断率的测定
3.2.1　原理
在模拟人体胃液的条件 ,二甲基胺与亚硝酸
钠在 37 ℃条件下 , 可适宜地生成二甲基亚硝
胺[ 3] ,反应式如下:
(CH3)2NH+NaNO2 　HCL　 (CH3)2N-N=0+
NaCl+H2O
实质是:
(CH3)2NH+HONO (CH3)2N-N=0+H2O
3.2.2　测定方法
取0.5 mol/L pH=3.0的柠檬钠-盐酸缓冲液
5.0 mL 加入到 10 mL 容量瓶中 , 加入 1 ×10-3
mol/L 的 NaNO2 液 0.5 mL , 然后加入提取液
0.5 mL ,再加 1×10-3 mol/L 的二甲胺溶液 0.5
mL ,最后将整个反应体系定容至刻度 ,37 ℃保温
反应 1 h ,用紫外光解法测定NDMA的含量.并与
不加提取液的 0号作对比 ,计算阻断率 ,阻断率计
算方法如下:
阻断率=(Ao -Ax/ Ao)×100%
Ao ———不加提取液的 0号的吸光度值;
Ax———各组样品的吸光度值.
紫外光解法:取 1.0 mL上述含 NDMA的水溶
液加入到 7 cm2 的平皿中 , 加 0.5%Na2CO3 溶液
0.5 mL ,于暗室中用紫外分析仪照 15 min ,紫外灯
离液面 15 cm , 取出后加 1%对氨基苯碘酸溶液
1.5 mL ,再加 0.1%的α-萘胺 1.5 mL ,加水至体积
精确为 5 mL ,放置 15 min ,在 525 nm 紫外光下测
吸光度值(A).
3.4　不同浓度(指固形物或黄酮)的提取液对
NDMA阻断的测定
按3.2.2的方法 ,但在加入最佳条件提取的
提取液量时依次改为为 0 , 0.02 , 0.05 , 0.1 , 0.4 ,
0.7 ,1.0 ,1.5 ,1.6 , 2.0 , 3.0 mL ,计算每一浓度的阻
断率 ,并进行分析.
3.5　不同浓度的提取液对 NaNO2清除作用的测
定
3.5.1　测定NaNO2 的原理
亚硝酸盐在弱酸性的条件下 ,与对氨基苯磺
酸重氮化后 ,再与萘基盐酸二氨基乙烯偶合生成
红色化合物.
3.5.2　NaNO2溶液标准曲线的绘制
　　精密吸取 5 mg/kg NaNO2标准液 0 , 0.2 , 0.4 ,
0.8 ,1.0 , 1.5 , 2.0 , 2.5 mL(相当于加入 NaNO2 量
0 ,2 , 4 ,5 , 7.5 , 10 ,12.5 mg)于 50 mL 容量瓶中 ,加
入 0.4%的对氨基苯磺酸溶液 2 mL ,摇匀放置 15
min ,在 540 nm 紫外光下测吸光度值 ,用 0 号调
零.
3.5.3　对 NaNO2清除物测定
在模拟胃液的条件下进行反应:加入 0.5
mol/L pH=3.0的柠檬酸钠-盐酸缓冲液 5 mL 至
10 mL容量瓶中 ,加入 100 mg/kg 的 NaNO2 溶液 1
mL ,再分别加入提取液 0 , 0.05 ,0.1 , 0.2 , 0.3 , 0.5 ,
0.7 ,1.0 ,1.4 , 1.8 , 2.1 , 2.8 , 3.2 mL ,定容至刻度 ,
37 ℃保温反应 1 h ,吸取 1 mL 用 3.4.2的方法测
定每一浓度的吸光度值 ,计算清除率.计算方法
如下 ,同根据标准曲线对阻断率进行定量.
清除率=Ao-Ax/ Ao)×100%
Ao ———保温反应时加提取液的 0号的吸光度
值;
Ax———不同浓度号的吸光度值.
3.6　提取液与 VC对亚硝化反应的抑制作用的对
照
根据以上提取液各浓度的阻断作用以及清除
作用趋势图 ,在图形的上升趋势线中选取一个浓
度 ,用相同量的提取液以黄酮计与 Vc进行阻断及
清除反应 ,计算各自的阻断率并进行比较.
4　结果与讨论
以下实验所使用的提取液的浓度为:以黄酮
计 5.66 mg/mL ,以固形物计 39.7 mg/mL.
4.1　不同浓度的提取液对 NDMA的阻断作用
各浓度的提取液对 NDMA 合成的阻断作用
见表 1.
51第 1期　 　　　　　　　张虹等:刘寄奴提取液对亚硝化反应的抑制作用　 　　　　　　　
表 1　不同样液的量对 NDMA的合成阻断作用
加入提取液量/mL 吸光度(A) 阻断率/ %
0 0.278
0.02 0.276 0.72
0.05 0.244 12.23
0.1 0.216 22.30
0.4 0.113 59.35
0.7 0.099 64.39
1.0 0.087 68.71
1.5 0.023 91.78
1.6 0.017 93.88
2.0 0.020 92.81
3.0 0.021 92.45
　　由表 1可知 ,提取液对 NDMA 合成阻断作用
开始时随浓度的增加而有增强的趋势 ,但当黄酮
的浓度达 9.06 mg/mL(1.6×5.66)、固形物含量为
63.52 mg/mL(1.6×39.7)时 ,阻断作用趋于最大 ,
这时阻断率可达 93.88%,而当浓度继续升高时 ,
阻断作用有趋于平缓的趋势.同时黄酮浓度在
0.566 ～ 2.264 mg/mL ,固形物含量在 3.97 ～ 15.72
mg/mL时 ,阻断率几乎可达 60%.
4.2　不同浓度的提取液对NaNO2的清除作用
4.2.1　NaNO2标准曲线的绘制
不同NaNO2量的吸光度值如表 2.
表 2　不同NaNO2 量的吸光度值
NaNO2 的量/mg 0 1 2 4 5 7.5 10 12.5
吸光度值(A) 0 0.015 0.030 0.059 0.074 0.114 0.147 0.184
　　经回归分析[ 5]得回归曲线为 y =0.014 7x +
0.000 662 ,回归曲线的相关系数为 0.999 8.
4.2.2　提取液对NaNO2 的清除作用
不同浓度(或不同样液的量)对 NaNO2 的清
除量及清除率见表 3 ,由表 3可知 ,未加刘寄奴提
取液的 0号中NaNO2含量为 95.46 mg ,随着加入
的提取液的量增加 ,清除作用有增强的趋势 ,但当
黄酮的含量达 15.85 mg/mL(2.8×5.66),固形物
含量(浓度)为 111.16 mg/mL(2.8×39.7)时 ,清除
作用趋于最大 ,这时在反应的容量瓶中有9.76 mg
的NaNO2 ,相当于清除了 85.70 mg 的 NaNO2 ,对
NaNO2清除率为89.36%.当浓度继续增大 ,清除作
用趋于平缓或稳定.黄酮浓度为0.283 mg/mL ,即清
除率为 9.22%,清除作用较小 ,当黄酮浓度为 2.83
mg/mL ,固形物含量为 19.85 mg/mL 时 ,原反应系统
中NaNO2含量为 49.89 mg ,清除了 45.57 mg ,相当于
清除了 47.52%的NaNO2 ,清除作用较好.
表3　不同样液量的提取液对 NaNO2的清除作用
加入的样液量
/mL 吸光度值(A)
反应系统中
NaNO2/mg
清除的
NaNO2/mg
清除率
/ %
0 0.141 95.46
0.05 0.128 86.62 8.84 9.22
0.1 0.120 81.18 13.28 14.89
0.2 0.111 75.06 20.40 21.28
0.3 0.095 64.18 31.28 32.62
0.5 0.074 49.89 45.57 47.52
0.7 0.068 45.81 49.65 51.77
1.0 0.038 25.40 70.06 73.05
1.4 0.036 24.04 71.42 74.46
1.8 0.032 21.32 74.14 77.30
2.1 0.026 17.24 78.22 81.56
2.8 0.015 9.76 85.70 89.36
3.2 0.016 10.43 85.03 88.65
4.3　提取液与 VC标准液对亚硝化反应的抑制作
用对照及分析
已经证明 VC 除了具有抗氧化作用外 , 对
NaNO2 等亚硝酸盐亦能有效的清除 ,又 NDMA的
合成阻断作用亦很强 ,所以用 VC 为对照物 ,比较
刘寄奴的清除和阻断作用.加入的 VV 对照物浓
度与提取液中黄酮含量均为 1mg.结果见表 4 、表
5.
表4　提取液以黄酮计与 VV 对 NDMA合成阻断
作用的对照
阻断剂(1 mg) 吸光度值(A) 阻断率/ %
VV 0.106 62.14
黄酮 0.141 49.64
0 0.280
表5　提取液以黄酮汁与 VC 对 NaNO2 的清除作
用的对照
阻断剂(1 mg) 吸光度值(A) 清除率/ %
VV 0.101 28.37
黄酮 0.110 21.99
0 0.141
由表 4 、表5可知 ,1mg 的VV对照物对NaNO2
的清除率可达 28.37%,对 NDMA 合成的阻断作
用 ,阻断率可达 62.14%,含 1 mg 的黄酮的刘寄奴
提取液对 NaNO2 的清除率为 21.99%,对 NDMA
合成的阻断率可达 49.64%,说明刘寄奴提取液
亦能有效地抑制亚硝化反应.
在以上各组 NDMA 合成的阻断作用测定实
验中 ,我们可以发现 ,空白值(0号值)有所不同 ,
52　　　　　　　 　　　　　　　　　郑州粮食学院学报　　　　　　　　　　　　 　　第21卷
其原因可能是由于 NDMA的合成与环境的温度 ,
反应时间等均对测定有较大影响 ,在操作的过程
中 ,各组实验的操作速度不同 ,而且外界环境中温
度 、光度亦有一定的差别 ,从而导致 NDMA 在各
组实验中的合成量有差异 ,而且 NDMA 见光易分
解 ,这也是致使空白值不同原因之一.但是空白
值不同 ,对于阻断作用的测定而言没有很大的影
响 ,因同组中的反应条件相同 ,这保证了阻断率测
定可不受影响.
5　小结
根据世界卫生组织(WHO)统计 ,全世界每年
约有 500万左右的人被癌症夺去生命.目前癌症
已成为威胁人类生命的最大杀手 ,而其中 NDMA
即是当前最令人关注的化学致癌物之一.人们从
食物中直接摄入的 NDMA 是微乎其微的 ,但形成
NDMA的前体类物质却大量存在于食品中 ,这些
物质也可产生于食物在体内的代谢过程中.ND-
MA可以在体内外合成 ,即当食物中同时有仲胺
和亚硝酸盐存在时 , 在一定的条件下便可生成
NDMA.因此 ,阻断NDMA合成或清除合成 NDMA
的前体是防癌的有效途径.
研究结果表明刘寄奴提取液具有阻断 NDMA
合成的显著作用 ,同时亦能有效清除亚硝酸盐 ,因
此刘寄奴作为新资源食品开发对防抗癌具有重要
作用;同时我国又是肝癌 、食道癌和胃癌的高发
区 ,更具特殊意义.刘寄奴在我国分布面积较广 ,
而且野生长于山坡 、林下 ,生命力强 ,量多 、易采
集 ,若能作为抗癌剂开发利用前景可观 ,因此它有
可能成为一种经济的 、有效的具有抗癌作用的天
然生物新资源食品.
参考文献:
[ 1] 　全国中草药汇编委员会.全国中草药汇编
(第 2版)[M] .北京:北京人民卫生出版社 ,
1996.
[ 2] 　胡荣梅 ,马立珊.N-亚硝基化合物分析方法
[M] .北京:科学出版社 ,1980.
[ 3] 　中华人民共和国卫生部.食品卫生检验方法
理化部分 [ M ] .北京:中国标准出版社 ,
1997.
[ 4] 　杭州大学化学系.分析化学手册(第 2分册)
[M] .北京:化学工业出版社 ,1982.
[ 5] 　郑用熙.数理统计在分析化学中的应用
[M] .北京:科学出版社 ,1986.
STUDY ON INHIBITING NITROSATION BY EXTRACT
OF ARTEMISIA ANOMALA S.MOORE
ZHANG Hong , Xu Gang ,YUAN Jian-yao
(Food Science and Technology Department , Hangzhou University of Commerce ,Hangzhou 310035 , China)
Abstract:The disconnecting nitrosodimethylamin(NDMA)compost and scavenging sodium nitrite by extract of
Artemisia Anomala S.Moore were studied and the capabilities of disconnection and scavenging of the extract were
compared with ascorbic acid.The result showed that when the content of solid in the extract was 63.52 mg/mL(cor-
respond to the content of flavonoids in the extract ,9.06 mg/mL), the highest capability of disconnecting of NDMA
was 93.88%, then when the content of solid in the extract was 111.6 mg/mL(correspond to the content of
flavonoids in the extract ,15.8 mg/mL), the highest capability of scavenging sodium nitrite was 89.36%.Under the
same condition , capabilities of disconnecting and scavenging were 49.64% and 21.99% respectively by 1 mg the
extract of artemisia Anomala S .Moore , compared with by 1 mg ascorbic acid , capabilities of disconnection and scav-
enging were 62.14% and 28.37% respectively.
Key words:Artemisia Anomala S.Moore;sodium nitrite;nitrosodimethylamin;disconnecting;Scavenging
53第 1期　 　　　　　　　张虹等:刘寄奴提取液对亚硝化反应的抑制作用