全 文 ：植物资源与环境学报，2016，25(1) :102 － 104
Journal of Plant Ｒesources and Environment
毛豹皮樟叶水提物的活性成分及其清除亚硝酸钠和
阻断亚硝胺合成的作用
芶 琳a，王春薇b，倪 苏b，①，钟宣伯b
(四川农业大学:a． 生命科学学院，b． 农学院，四川 成都 611130)
Active components in water extracts from leaf of Litsea coreana var． lanuginosa and its effects on scavenging
sodium nitrite and blocking nitrosamine synthesis GOU Lina，WANG Chunweib，NI Sub，①，ZHONG Xuanbob
(Sichuan Agricultural University:a． College of Life Science，b． College of Agronomy，Chengdu 611130，China) ，
J． Plant Ｒesour． ＆ Environ．，2016，25(1) :102 － 104
Abstract:Contents of total polyphenols and total flavonoids in water extracts from leaf of Litsea coreana var． lanuginosa
(Migo)Yang et P． H． Huang were determined，and effects of these water extracts on scavenging sodium nitrite (NaNO2)
and blocking nitrosamine synthesis were studied． The results show that contents of total polyphenols and total flavonoids in
water extracts from leaf of L． coreana var． lanuginosa are 4． 64% and 2． 96%，respectively． With enhancing of mass
concentration of water extracts，both NaNO2 scavenging rate and blocking rate of nitrosamine synthesis increase gradually，
and there are obvious dose-effect relationships between mass concentration of water extracts with NaNO2 scavenging rate and
blocking rate of nitrosamine synthesis，their half-effect dose (ED50)are 0． 06 and 0． 25 mg·mL
－1，respectively． It is
suggested that the effects of water extracts from leaf of L． coreana var． lanuginose on scavenging NaNO2 and blocking
nitrosamine synthesis are related to polyphenols and flavonoids in the water extracts．
关键词:毛豹皮樟叶;总多酚;总黄酮;清除亚硝酸钠;阻断亚硝胺合成;半效剂量(ED50)
Key words:leaf of Litsea coreana var． lanuginosa (Migo)Yang et P． H． Huang;total polyphenols;total flavonoids;
scavenging sodium nitrite;blocking nitrosamine synthesis;half-effect dose (ED50)
中图分类号:S571． 9;Ｒ284． 2 文献标志码:A 文章编号:1674 － 7895(2016)01 － 0102 － 03
DOI:10． 3969 / j． issn． 1674 － 7895． 2016． 01． 13
亚硝酸盐在食材、食品加工和食品储存过程中普遍存
在，它是亚硝基化合物合成的前体物质，在一定条件下亚硝
酸盐极易转化为亚硝胺，二者均可致癌［1 － 2］，因此，清除亚硝
酸盐和阻断亚硝胺合成对于预防和控制癌症的发生具有重
要意义。关于清除亚硝酸盐和阻断亚硝胺合成的研究已有
较多报道，一些植物含有的天然活性成分，如植物中所含的
多酚和黄酮类物质等，具有抗氧化、抗菌、清除亚硝酸盐和阻
断亚硝胺合成的作用。顶羽菊〔Acroptilon repens (Linn．)
DC．〕［3］、黄 花 菜 (Hemerocallis citrina Baroni)［4］ 和 簕 菜
〔Acanthopanax trifoliatus (Linn．)Merr．〕［5］等提取物具有清除
亚硝酸盐和阻断亚硝胺合成的作用;黄俊生［6］从南姜
〔Alpinia galanga (Linn．)Willd．〕表皮中提取的色素也具有较
强的清除亚硝酸钠和阻断亚硝胺合成活性。
毛豹皮樟〔Litsea coreana var． lanuginosa (Migo)Yang et
P． H． Huang〕为樟科(Lauraceae)木姜子属(Litsea Lam．)植
物［7］，其嫩叶经加工后为老鹰茶或白茶。毛豹皮樟叶中含有
多酚、黄酮和多糖等生物活性成分［8 － 10］，具有抗氧化、抗病毒
和降血糖等作用［11 － 13］，但关于毛豹皮樟叶水提物清除亚硝
酸盐和阻断亚硝胺合成的研究却鲜见报道。为此，作者测定
了毛豹皮樟叶水提物中总黄酮和总多酚的含量，并在体外模
拟人体胃液(pH 3． 0)条件下研究毛豹皮樟叶水提物清除亚
硝酸钠(NaNO2)及阻断亚硝胺合成的作用，以期为毛豹皮樟
资源的进一步开发和利用提供科学依据。
1 材料和方法
1． 1 材料
供试材料毛豹皮樟叶由四川雅安市名山区双河乡老鹰
茶园提供，并经四川农业大学杨瑞武教授鉴定。新鲜叶晒干
后于 60 ℃烘干 6 h，粉碎并过 60 目筛，干燥保存、备用。
主要试剂:芦丁(纯度≥95%)购自美国 Sigma － Aldrich
公司;二甲胺水溶液(质量分数 33%)为国产化学纯;没食子
酸、NaNO2、对氨基苯磺酸、盐酸萘乙二胺和 α －萘胺等其他
试剂均为国产分析纯。
收稿日期:2015 － 04 － 02
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30971795)
作者简介:芶 琳(1963—) ，女，四川成都人，硕士，副教授，主要从事生物化学及分子酶学方面的研究。
①通信作者 E-mail:ns13@ 163． com
主要仪器:FW80 型高速万能粉碎机(北京市永光明医疗
仪器厂) ;UV －1200 型紫外 /可见分光光度计(上海美谱达仪
器有限公司) ;ESJ － B 系列多功能电子分析天平(沈阳龙腾
电子有限公司) ;DK －8D三孔电热恒温水槽(上海齐欣科学
仪器有限公司) ;SC － 04 低速离心机(安徽中科中佳科学仪
器有限公司)。
1． 2 方法
1． 2． 1 叶 水 提 物 的 制 备 称 取 1． 0 g
叶粉末样品，按固液比 1∶ 30(m∶ V)加蒸馏水浸润 5 min 后
煮沸 5 min，冷却至室温，6 000 r·min －1离心 5 min，取上清
液;沉淀加 30 mL蒸馏水后再煮沸 2 min，冷却至室温，6 000 r
·min －1离心 5 min，取上清液，余下沉淀重复此操作 1 次。合
并 3 次上清液并用蒸馏水定容至 100 mL，配制成质量浓度 10
mg·mL －1叶水提物溶液。
1． 2． 2 总多酚和总黄酮含量的测定 采用 Folin － Ciocalteu
法［14］测定毛豹皮樟叶水提物中的总多酚含量。以没食子酸
为标准品，于波长 765 nm 处测定吸光值;并以吸光值(Y)为
纵坐标、没食子酸质量浓度(X)为横坐标绘制标准曲线，得到
的线性回归方程为 Y = 0． 009 4X + 0． 007 3(Ｒ2 = 0． 999 1)。
按同法测定毛豹皮樟叶水提物溶液的吸光值，根据标准曲线
方程计算总多酚含量。实验重复 3 次。
采用硝酸铝 －亚硝酸钠法［15］测定毛豹皮樟叶水提物中的
总黄酮含量。以芦丁为标准品，于波长510 nm处测定吸光值;并
以吸光值(Y)为纵坐标、芦丁质量浓度(X)为横坐标绘制
标准曲线，得到的线性回归方程为 Y = 11． 68X + 0． 003 9
(Ｒ2 =0．999 5)。按同法测定毛豹皮樟叶水提物溶液的吸光值，
根据标准曲线方程计算总黄酮含量。实验重复 3次。
1． 2． 3 对 NaNO2清除率的测定 采用盐酸萘乙二胺法
［16］测定
质量浓度 0． 00、0． 02、0． 04、0． 20、0． 40、0． 80、1． 20 和 1． 60 mg·
mL －1毛豹皮樟叶水提物对 NaNO2的清除率。分为 3组处理，其
中，A0为检测体系中添加 NaNO2但不添加叶水提物溶液，A1为检
测体系中添加 NaNO2和叶水提物溶液，A2为检测体系中添加叶
水提物溶液并添加同体积蒸馏水代替 NaNO2;分别在波长 538
nm处测定吸光值，并按公式“NaNO2清除率 =
A0 －(A1 －A2)
A0
×
100%”计算 NaNO2清除率。实验重复 3次。
1． 2． 4 对亚硝胺合成阻断率的测定 采用 α －萘胺法［17］测定
质量浓度 0． 00、0． 04、0． 08、0． 16、0． 24、0． 32、0． 40和 0． 48 mg
·mL －1毛豹皮樟叶水提物对亚硝胺合成的阻断率。分为 3组处
理，其中，A0为检测体系中不添加叶水提物溶液，A1为检测体系中
添加叶水提物溶液，A2为检测体系中添加叶水提物溶液但不添
加NaNO2;分别在波长525 nm处测定吸光值，同时做空白对照实
验;按公式“亚硝胺合成阻断率 =
A0 －(A1 －A2)
A0
× 100%”计算亚
硝胺合成的阻断率。实验重复 3次。
1． 3 数据处理
采用 SPSS 16． 0统计分析软件对实验数据进行统计分析，并
使用该软件中的 Curve Estimation模块进行曲线拟合，选择最优
模型，确定 NaNO2清除率和亚硝胺合成阻断率分别为 50%时毛
豹皮樟叶提取物的质量浓度(半效剂量 ED50)。
2 结果和分析
2． 1 叶水提物中总多酚和总黄酮的含量
测定结果显示:毛豹皮樟叶水提物中总多酚含量为
4． 64%，总黄酮含量为 2． 96%。
2． 2 叶水提物对 NaNO2的清除作用
随质量浓度提高，毛豹皮樟叶水提物对 NaNO2清除率的
变化趋势见图 1。结果显示:随毛豹皮樟叶水提物质量浓度
的提高，NaNO2清除率逐渐升高;当水提物质量浓度在 0．
02 ～ 0． 20 mg·mL －1时，NaNO2清除率急速升高;当水提物质
量浓度高于 0． 40 mg·mL －1时，NaNO2清除率增幅趋缓并趋
于稳定。当毛豹皮樟叶提取物质量浓度为 1． 60 mg·mL －1
时，NaNO2清除率可达 99． 1%。毛豹皮樟叶水提物质量浓度
(X)与 NaNO2清除率(Y)的拟合方程为:Y = e
－0． 035 3
X + 4． 545 6
(Ｒ2 = 0． 964) ，据此方程计算出 NaNO2清除率达 50%时毛豹
皮樟叶水提物的质量浓度(半效剂量 ED50)为 0． 06 mg·
mL －1。
图 1 不同质量浓度毛豹皮樟叶水提物亚硝酸钠清除率的变化
Fig． 1 Change in sodium nitrite scavenging rate of water extracts
with different mass concentrations from leaf of Litsea coreana var．
lanuginosa (Migo)Yang et P． H． Huang
2． 3 叶水提物对亚硝胺合成的阻断作用
随质量浓度提高，毛豹皮樟叶水提物对亚硝胺合成阻断
率的变化趋势见图 2。结果显示:随叶水提物质量浓度的提
高，亚硝胺合成阻断率逐渐升高;当提取物质量浓度达到 0．
48 mg·mL －1时，亚硝胺合成阻断率为 63． 3%。毛豹皮樟叶
水 提 物的质量浓度 (X )与亚硝胺合成阻断率 (Y )
的拟合方程为 Y = － 218． 631X2 + 217． 543X + 9． 259(Ｒ2 = 0．
997) ，据此方程计算出亚硝胺合成阻断率达 50%时毛豹皮樟
叶水提物的质量浓度(半效剂量 ED50)为 0． 25 mg·mL
－1。
301第 1 期 芶 琳，等:毛豹皮樟叶水提物的活性成分及其清除亚硝酸钠和阻断亚硝胺合成的作用
图 2 不同质量浓度毛豹皮樟叶水提物亚硝胺合成阻断率的变化
Fig． 2 Change in blocking rate of nitrosamine synthesis of water
extracts with different mass concentrations from leaf of Litsea
coreana var． lanuginosa (Migo)Yang et P． H． Huang
3 讨 论
在生物的体内和体外系统中多酚和黄酮类成分都具有
较强的清除亚硝酸盐和阻断亚硝胺合成的作用［18 － 19］。本研
究结果显示:毛豹皮樟叶水提物中总多酚和总黄酮的含量分
别为 4． 64%和 2． 96%，该水提物对 NaNO2的清除作用和对亚
硝胺合成的阻断作用均较为明显;并随水提物质量浓度的提
高，NaNO2清除率和亚硝胺合成阻断率也逐渐升高，表明出一
定的量效关系。据此推测毛豹皮樟叶水提物对亚硝酸盐的
清除作用和对亚硝胺合成的阻断作用可能与叶片中所含的
多酚和黄酮类成分有关，但其相关性有待进一步研究。综上
所述，毛豹皮樟叶水提物能有效清除亚硝酸盐并阻断亚硝胺
的合成，因此，可以将毛豹皮樟叶进行深入研究并开发成相
关保健产品。
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(责任编辑:张明霞)
401 植 物 资 源 与 环 境 学 报 第 25 卷