全 文 ：点柄粘盖牛肝菌粗多糖体外抗氧化活性的研究 *
史振霞， 吴智艳 **
（廊坊师范学院生命科学学院， 河北 廊坊 065000）
摘要： 研究点柄粘盖牛肝菌子实体多糖的抗氧化活性。结果显示，随着多糖浓度的上升，还原能力不断增强，对·O2-
和·OH的清除效果也在加强，但多糖浓度更大时，清除率增强效果不明显，点柄粘盖牛肝菌子实体粗多糖对·OH的清
除能力较强，多糖浓度为 0.2 mg·mL-1时对·OH清除率最大，为 98.95%；但对·O2-的清除作用不明显，多糖浓度为 10
mg·mL-1时清除率为 21.68%。提取的点柄粘盖牛肝菌子实体粗多糖具有抗氧化活性，且活性呈现剂量效应。
关键词： 阿魏侧耳；多糖；体外抗氧化性
中图分类号： S646.9 文献标识码： A 文章编号： 1003-8310 （2012） 01-0039-03
Study on Antioxidant Activity of Coarse Polysaccharides from
Suillus granulatus Fruit Body in Vitro
SHI Zhen-xia, WU Zhi-yan
(College of Life Science, Langfang Teachers College, Langfang Hebei 065000)
Abstract: The antioxidation activity in vitro of coarse polysaccharide of Suillus granulatus were studied. The results
showed that the reduction capacity increased with the increasing concentration of polycaccharide, and also on the·O2-
and·OH removal effect, but when the polysaccharide concentration was bigger, the effect was not obvious. The·OH re-
moval effect of the fruit body polysaccharide of Suillus granulatus was better, and when the polysaccharide concentration
was 0.2 mg·mL-1, the removal capacity was best, and the removal capacity rate was 98.95%. But the·O2- removal effect
was not obvious, the removal capacity rate was 21.68% when the polysaccharide concentration was 10 mg·mL-1. The fruit
body polysaccharide of Suillus granulatus had antioxidation activity, and the activity was related to the dose.
Key words: Suillus granulatus; Polysaccharides; In vitro anti-oxidation
点柄粘盖牛肝菌 （Suillus granulatus） 又名黄花松茸、
栗壳牛肝菌， 是真菌门 （Enmycophyta）、 担子菌纲 （Basid-
iomycetes）、 担子菌亚门 （Basidiomycolina）、 层菌纲 （Hy-
menomycetes） 、 伞菌目 （Agaricales） 、 牛肝菌科 （Bole-
taceae）、 粘盖牛肝菌属 （Suillus） 的一种珍稀的食、 药兼
用真菌[1]。点柄粘盖牛肝菌营养成分全面且含量高， 具有较
好的医疗保健作用， 其具有的抗肿瘤、 抗病毒、 抗氧化、
提高人体免疫力等功效来源于多种生理活性物质， 如多
糖、 维生素、 矿物质等， 其中以点柄粘盖牛肝菌多糖的研
究为重点[2]。真菌多糖是继核酸和蛋白质之后的另一种有待
深入研究的生物大分子， 具有良好的生理调节作用， 可以
从根本上提高人体免疫力， 起到强身保健的功能， 因而具
有广泛应用前景。
自由基与许多病理生理现象， 如衰老、 肿瘤、 心血管
疾病和炎症等有关， 目前国内外已将抗氧化检测用于抗衰
老等保健食品的评价， 对保健品开发具有积极的作用 [3，4]。
本实验使用在河北燕山山区采集的点柄粘盖牛肝菌， 通过
热水浸提、 乙醇沉淀等方法， 对子实体粗多糖进行提取，
* 项目来源： 河北省科技计划项目 （11230908D-4-1）； 廊坊师范学院项目 （LSZY200904）。
作者简介： 史振霞 （1977-）， 女， 讲师， 主要从事药用真菌活性成分提取等方面的教学和科研工作。
** 通讯作者： E-mail: lfwuzhiyan@126.com
收稿日期： 2011-11-17
中国食用菌 2012， 31 （1）： 39~41
EDIBLE FUNGI OF CHINA
CN53－1054 ／ Q ISSN 1003－8310
在此基础上本实验进一步对点柄粘盖牛肝菌多糖的抗氧化
活性进行验证， 以抗氧化剂 Vc 作为阳性对照， 以测定点
柄粘盖牛肝菌粗多糖对活性氧自由基·O2-、 ·OH 的清除能
力和还原能力， 并研究点柄粘盖牛肝菌粗多糖的抗氧化活
性大小与其浓度的关系， 为全面开发利用点柄粘盖牛肝菌
在医药、 食品和保健品中的应用提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 供试材料
点柄粘盖牛肝菌 （Suillus granulatus）， 采集于河北燕
山山区平泉县辽河源国家级森林公园。
1.2 多糖提取
称取已干燥至恒重的点柄粘盖牛肝菌子实体 6 g， 在
提取温度为 95℃， 处理时间 3.5 h， 料液比 1∶40 条件下浸
提子实体多糖， 3 000 r·min-1离心 10 min， 上清液即多糖
提取液。 在多糖提取液中加入 3 倍体积 95%的乙醇沉淀多
糖， 冷冻干燥后得点柄粘盖牛肝菌粗多糖。
1.3 点柄粘盖牛肝菌粗多糖的脱蛋白
乙醇沉淀后的粗多糖类物质中含有一定的蛋白质， 按
上清液体积 ∶Sevag 试剂体积 4 ∶1 的比例加入 Sevag 试剂 ，
磁力搅拌器搅拌 30 min， 4 000 r·min-1、 20 min 的条件下
离心， 取上清液， 透析、 乙醇沉淀、 冷冻干燥后得点柄粘
盖牛肝菌粗多糖。
1.4 样品中总糖的测定
蒽酮比色法测定样品中总糖的含量 [4-9]。
1.5 样品中还原糖的测定
3,5-二硝基水杨酸法测定样品中还原糖含量 [9]。
1.6 样品中多糖含量的测定
多糖的含量＝总糖含量－还原糖含量。
1.7 粗多糖体外抗氧化活性测定
1.7.1 粗多糖对·OH的清除作用
采用 Fenton 体系测定点柄粘盖牛肝菌粗多糖对·OH
的清除作用， 即利用亚铁离子催化过氧化氢产生·OH， 由
于·OH可特异地使番红褪色， 根据褪色程度用比色法来衡
量·OH的含量[9]。
反应体系中加入 0.15 mol·L-1 pH7.4 磷酸缓冲液 1.5
mL， 番红花红 （浓度 260 mg·L-1） 0.2 mL， 0.56 mmol·L-1
EDTANa2-Fe (Ⅱ) 0.7 mL （新鲜配制）， 再加入不同浓度
的多糖液 0.8 mL， 最后加入 1%H2O2 0.8 mL （新鲜配制），
混匀后于 37℃水浴保温 30 min， 3 000 r·min-1离心 5 min，
取其上清液， 在波长 520 nm 处测吸光度值 [5]。 空白组以磷
酸缓冲液代替样品溶液， 对照组以磷酸缓冲液代替样品溶
液和 EDTANa2-Fe (Ⅱ) 溶液， 实验结果以清除率 （E1） 表
示， 计算公式如下：
E1= （A 样品-A 空白） /（A 对照-A 空白） ×100%
式中： A 样品为点柄粘盖牛肝菌粗糖液吸光度值； A 空白和 A 对照
分别为空白组和对照组吸光度值。
1.7.2 粗多糖对·O2-的清除作用
采用邻苯三酚自氧化法 [10]，在碱性条件下， 邻苯三酚
能够自氧化产生·O2-和有色中间产物 （在 320 nm 处有最大
吸收峰）， ·O2-又对自氧化起催化作用， 依据有色中间产物
生成量的多少可判断·O2-生成量的多少。 加入一定量的多
糖液可对·O2-产生不同的抑制作用， 进而导致吸光度值的
变化[11]。
取 6 mL pH8.2 的 Tris-HCl 缓冲液， 移至试管中， 加
入一定浓度的多糖样品 0.5 mL， 37℃温浴 10 min， 最后加
入 37℃预热过的 7 mmol·L-1 邻苯三酚盐酸溶液 1 mL， 混
匀， 精确反应 4 min， 立即用 0.5 mL 浓盐酸终止反应 [12]，测
320 nm 处吸光度值[13]。对照组以 Tris-HCl 缓冲液代替糖液。
空白组以 Tris-HCl 缓冲液代替糖液和邻苯三酚盐酸溶液。
实验结果以清除率 （E2） 表示， 计算公式如下:
E2= (A 对照-A 样品) /(A 对照-A 空白) ×100%
式中： A 样品为点柄粘盖牛肝菌粗多糖液吸光度值； A 空白和
A 对照分别为空白组和对照组吸光度值。
1.7.3 粗多糖的还原能力
试验采用 Oyaizu 法， 通过观察在多糖存在时， Fe3+-
Fe2+的转移来检测其还原能力。 取 1.0 mL 不同浓度的点柄
粘盖牛肝菌多糖液， 移至试管中， 加入 2.5 mL 磷酸盐缓
冲溶液 （pH6.6） 以及 2.5 mL 质量分数为 1.0%的铁氰化钾
溶液， 混合均匀后将该体系置于 50℃恒温水浴中恒温 20
min， 然后加入 2.5 mL 质量分数为 10%的三氯乙酸溶液，
混合均匀， 置于离心机内 3 000 r·min-1离心 10 min。 移取
2.5 mL 上清液于另一试管中 ， 加入 2.5 mL 蒸馏水及 0.5
mL 质量分数为 0.1%的三氯化铁溶液， 混合均匀， 在波长
700 nm 处测定体系的吸光度 [14-16]，吸光度值越大说明多糖
的还原能力越强 [13]。
2 结果分析
2.1 总糖、 还原糖的标准曲线
蒽酮比色法测定总糖含量的标准曲线的回归方程为
y=0.03876+7.90571x， r=0.99815； 3， 5-二硝基水杨酸法测
定还原糖的标准曲线的回归方程为 y=0.03671+2.16257x，
R=0.99647。
2.2 粗多糖对·OH 的清除作用
采用 Fenton 体系测定粗多糖对·OH 的清除作用， 结
果见图 1。
由图 1 可知， 在一定的浓度范围内， 多糖对羟基自由
基的清除能力随着多糖浓度的增加而增强， 多糖浓度为
0.2 mg·mL-1时能达到最大清除率 （98.95%）， 而后随着多
中国食用菌 EDIBLE FUNGI OF CHINA Vol． 31 No．140
史振霞等： 点柄粘盖牛肝菌粗多糖体外抗氧化活性的研究
糖浓度的增加而变化不大。 而 Vc 在浓度为 0.02 mg·mL-1
时清除率为 80%， 可见多糖对·OH 的清除能力很强。
2.3 粗多糖对·O2-的清除作用
粗多糖对·O2-的清除效果见图 2。
由图 2 可知， 在一定的浓度范围内， 多糖浓度越高，
对超氧阴离子自由基的清除率也越高， 而后随着多糖浓度
的增加变化不太明显。 多糖浓度为 10 mg·mL-1 时能达到
最大清除率 （21.68%）， 而 Vc 在浓度为 10 mg·mL-1 时清
除率为 97.69%， 可见与 Vc 相比点柄粘盖牛肝菌粗多糖
对·O2-的清除作用不太明显。
2.4 粗多糖的还原能力
点柄粘盖牛肝菌粗多糖的还原能力见图 3。
由图 3 可知， 点柄粘盖牛肝菌粗多糖有一定的还原能
力， 且还原能力随着多糖浓度的增加而增强， 多糖浓度
（x， mg·mL-1） 与还原能力 （y， %） 之间的回归方程为：
y=0.03004+0.00996x， R=0.98841。
3 结论
本试验通过用热水浸提点柄粘盖牛肝菌子实体， 乙醇
沉淀多糖 Sevag 法去除多糖中的蛋白 ， 并采用 Fenton 体
系、 邻苯三酚自氧化法、 Oyaizu 法测定了点柄粘盖牛肝菌
多糖对·OH、 ·O2- 的清除能力和还原能力， 为新药或保健
食品开发研究奠定了一定的理论基础。
研究表明点柄粘盖牛肝菌多糖具有较好的抗氧化活
性， 具有很强的还原能力， 对羟基自由基具有较好的清除
作用 ， 当多糖浓度为 0.2 mg·mL-1 时达到最大清除率
98.95%， 而对超氧阴离子的清除作用不太明显， 当多糖浓
度为 10 mg·mL-1时其最大清除率为 21.68%， 而在相同条
件下 Vc浓度为 10 mg·mL-1时， 其清除率为 97.69%， 点柄
粘盖牛肝菌多糖的还原能力良好且还原能力随着浓度的增
加而增强， 多糖浓度 （x, mg·mL-1） 与还原能力 （y， %）
之间的回归方程为 y=0.03004+0.00996x， R=0.98841。 试验
结果表明点柄粘盖牛肝菌粗多糖具有一定的抗氧化活性，
尤其对其清除·OH 的活性值得进一步研究和开发。
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