全 文 ：激素氢化可的松为 CYP3A 诱导剂加快 ITZ 代谢有
关。因此，临床上对某些特定类型的患者(如免疫
力低下的患者)在服用 ITZ 并进行合并用药时需进
行血药浓度监测，并且有必要在免疫力功能低下的
患者中调整给药剂量或进行预防用药，以保证达到
安全而有效的血药浓度。
参考文献:
［1］ Khoschsorur G，Fruehwirth F，Zelzer S． Isocratic high-performance
liquid chromatographic method with ultraviolet detection for simulta-
neous determination of levels of voriconazole and itraconazole and its
hydroxy metabolite in human serum［J］． Antimicrob Agents Che-
mother，2005，49(8) :3569-3571．
［2］ Timmers GJ，Kessels LW，Wilhelm AJ，et al． Effects of cyclospo-
rine a on single-dose pharmacokinetics of intravenous itraconazole
in patients with hematologic malignancies［J］． Ther Drug Monit，
2008，30(3) :301-305．
［3］ Kwan JT，Foxall PJ，Davidson DG，et al． Interaction of cyclospor-
in and itraconazole［J］． Lancet，1987，2:282．
［4］ 姜云武．汤晓云． 家兔低免疫功能动物模型的制造及注意事项
［J］．云南中医中药杂志，2000，21(3) :9-10．
［5］ 杨婉花，李娟，余自成． HPLC-荧光法测定兔血浆中伊曲康唑
及其代谢产物羟基伊曲康唑的浓度［J］． 中国药房，2009，
(19) :1463-1465．
［6］ Isoherranen N，Kunze KL，Allen KE，et al． Role of itraconazole
metabolites in CYP3A4 inhibition［J］． Drug Metab Dispos，2004，
32(10) :1121-1131．
［7］ Buchkowsky SS，Partovi N，Ensom MH． Clinical pharmacokinetic
monitoring of itraconazole is warranted in only a subset of patients
［J］． Ther Drug Monit，2005，27(3) :322-333．
［收稿日期］2010-07-09
［基金项目］石河子大学自然科学与技术创新重点项目(编号:ZRKX2009ZD01-2) ;兵团医药卫生专项(编号:2007GG23) ［作者简介］李倩，
女，硕士研究生，电话:0993-2057005，E-mail:meetbj2008． 8@ 163． com ［通讯作者］陈韩英，女，博士，副教授，电话:0993-2057005，E-mail:hany-
ingchen@ sina． com
新疆软紫草多糖对小鼠免疫功能的影响
李倩1，陈韩英1，2，廉宜君3，田春芳1，王晓琴1，2，张波1，2，郑秋生1，2 (1．石河子大学药学院，新疆 石河子 832002;2．
新疆特种植物药资源省部重点实验室，新疆 石河子 832002;3．石河子大学化学化工学院，新疆 石河子 832002)
［摘要］ 目的:研究新疆软紫草多糖(ARPS)对环磷酰胺(CTX)致小鼠免疫功能低下的影响。方法:采用腹腔注射 CTX 制造
小鼠免疫损伤模型，同时应用软紫草多糖 100(低)、200(中)、300(高)mg·kg-1 3 个剂量给小鼠连续灌胃 7 d，观察其对小鼠胸
腺指数、脾脏指数、巨噬细胞吞噬指数、血清溶血素水平和淋巴细胞增殖率等指标的影响。结果:ARPS 可提高免疫低下小鼠
的脏器指数、吞噬指数和血清溶血素水平，可以改善免疫抑制小鼠低下的脾淋巴细胞增殖反应，且以 ARPS 200 mg·kg-1剂量组
作用较为显著。结论:ARPS对环磷酰胺致免疫功能低下小鼠具有一定免疫增强作用。
［关键词］ 软紫草多糖;环磷酰胺;免疫作用
［中图分类号］R285． 6 ［文献标识码］A ［文章编号］1001-5213(2011)10-0829-04
Effects of polysaccharides from Arnebia euchroma on immune functions of mice
LI Qian1，CHEN Han-ying1，2，LIAN Yi-jun3，TIAN Chun-fang1，WANG Xiao-qin1，2，ZHANG Bo1，2，ZHENG Qiu-
sheng1，2(1． College of Pharmaceutical，Shihezi University，Xinjiang Shihezi 832002，China;2． Key Laboratory of Phytomedicine Re-
sources ＆ Modernization of TCM，Xinjiang Shihezi 832002，China;3． College of chemical engineering，Shihezi University，Xinjiang
Shihezi 832002，China)
ABSTRACT:OBJECTIVE To investigate the preventive effect of polysaccharide from Arnebia euchroma (Royle)Johnst． (ARPS)
in immuno-suppressed mice induced by cyclophosphamide(CTX)．METHODS The immuno-suppressed mice were induced with CTX
by ip． Meanwhile，mice were treated with three doses of ARPS at 100，200，300 mg·kg-1 by ig for 7 days except in the normal and
model groups． The effects of ARPS on thymus index，spleen index，phagocytosis percentage of macrophage，quantitative hemolysis of
cock red blood cells and proliferative rate of lymphocytes were observed． RESULTS ARPS could increase indexes of thymus and
spleen，the rate of clearance index，quantitative hemolysis of cock red blood cells and enhance the proliferation of splenic lymphocytes．
ARPS at 200 mg·kg-1 could significantly increase these indexes． CONCLUSION ARPS significantly improves non-specific and spe-
cific immunologic functions of immunosuppressed mice．
KEY WORDS:Arnebia euchroma (Royle)Johns polysaccharide;cyclophosphamide;immunity
紫草为紫草科植物新疆紫草 Arnebia euchroma (Royle)Johnst．或内蒙紫草 Arnebia guttata Bunge的
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干燥根。新疆紫草又名软紫草，性寒味甘、咸，入心、
肝经，具有凉血活血、解毒透疹的功效［1］。紫草主
要成分有两类，一类为脂溶性的蒽醌类化合物(紫
草素及其衍生物) ;另一类是水溶性成分，主要为紫
草多糖［Arnebia euchroma (Royle)Johns polysaccha-
ride，ARPS］，含量在 2%左右。为更好地开发利用
新疆的软紫草资源，本研究采用环磷酰胺(cyclo-
phosphamide，CTX)致小鼠免疫功能低下模型［2］，从
机体的非特异性和特异性免疫角度探讨软紫草多糖
的免疫增强作用，为软紫草多糖的研究及其临床应
用提供实验依据。
1 材料
AXIO imager A1 型荧光显微镜(德国 ZEIZZ 公
司) ;多 功 能 酶 标 仪 (Thermo 3001 VARIOSKAN
FLASH) ;CO2培养箱(Forma 3110，ΜSA) ;96 孔细胞
培养板(Costar，USA) ;软紫草采自新疆阿克苏地区，
经石河子大学药学院李鹏副教授鉴定为紫草科新疆
软紫草 Arnebia euchroma (Royle)Johnst． 的干燥根，
干燥粉碎过筛备用;环磷酰胺(CTX，江苏恒瑞医药股
份有限公司，批号 09020521) ;DMEM 培养液(Gibco
公司) ;胎牛血清(Sigma) ;刀豆蛋白 A(ConA，Sig-
ma) ;MTT(上海美季生物技术有限公司) ;石油醚(天
津市富宇精细化工有限公司，批号 071010) ;其他试
剂均为分析纯;昆明种小鼠，200 只，8 ～ 12 周龄，体质
量 18 ～22 g，♀♂各半;豚鼠，2只，新疆自治区实验动
物研究中心，合格证号:SCXK(新)2003-0002。
2 方法
2． 1 豚鼠血清的制备 用乙醚将豚鼠麻醉后采血，
将所得血液置室温中凝固 1 h，然后置 4 ℃冰箱放置
数小时析出血清，备用。鸡红细胞的制备(CRBC) :无
菌静脉取血，置于三角瓶中，摇动 10 min 以除去纤维
蛋白，加入相当于 2倍的生理盐水，摇匀，置于 4 ℃冰
箱内保存备用。临用时取上述保存的鸡红细胞，用生
理盐水洗涤 3次，每次用 1 000 r·min-1离心 5 min，弃
去上清液，洗涤后以 1∶ 20 生理盐水稀释备用。都氏
试剂:碳酸钠 1． 0 g，氰化钾 0． 05 g，高铁氰化钾
0． 2 g，加水定容至 1 000 mL，4 ℃保存。
2． 2 软紫草多糖的提取 称取软紫草粗粉 100 g，
用石油醚 600 mL(30 ～ 60 ℃)室温下超声脱脂 3
次，滤渣挥干溶剂后，加入 80%乙醇超声提取 2 次，
过滤，滤渣挥干溶剂后加入纯化水 1 000 mL加热提
取 3 h，重复 3 次。合并水提液并浓缩至原体积的
1 /4，加入 3 倍量无水乙醇，静置过夜后抽滤。将沉
淀用无水乙醇、丙酮和乙醚依次洗涤，真空干燥，即
得粗软紫草多糖，苯酚-硫酸法测定粗多糖含量为
25． 8%。用生理盐水溶解为质量浓度 100，200，300
g·L-1溶液，过滤除菌，分装后置 4 ℃保存备用。
2． 3 试验动物分组及处理 将昆明种健康小鼠，♀
♂各半，饲养 1周后，分为 4 批进行实验，每批 50 只，
第 1批用来检测脾指数、胸腺指数;第 2 批用于血清
溶血素的测定实验;第 3 批用于巨噬细胞吞噬实验;
第 4批用于淋巴细胞增殖实验。将每批小鼠随机均
分为 5组:正常对照(生理盐水)组、模型(环磷酰胺)
组、给药组:软紫草多糖低(100 mg·kg-1)、中(200 mg·
kg-1)、高 (300 mg·kg-1)剂量组。实验期间一组一
笼，自由摄食与饮水。实验开始后，除正常对照组外，
均连续 3 d腹腔 ip CTX溶液(80 mg·kg-1) ，制备免疫
功能低下模型;造模后，给药组给予 ARPS，正常对照
组和模型组灌喂等量的生理盐水，连续灌喂 7 d。
2． 4 免疫器官指数实验 小鼠末次用药 1 h 后，称
体质量，用乙醚麻醉后颈椎脱臼处死，剖取胸腺及脾
脏，滤纸吸去表面残血，立即称其湿重，按下式计算
脾脏指数和胸腺指数:
脾脏指数 =脾脏质量(mg)
体质量(g)
胸腺指数 =胸腺质量(mg)
体质量(g)
2． 5 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验［3］ 小
鼠末次给药 1 h后，除正常对照组 ip生理盐水外，其
余组 ip 含 5%鸡红细胞的生理盐水0． 4 mL，4 h 后
用乙醚麻醉后颈椎脱臼处死，再经腹腔注入 Hank’s
液 2 mL，轻揉小鼠腹部 2 min，剪开腹部皮肤，吸取
腹腔液 1 mL，分滴于 2 片干净载玻片上，温育 30
min，洗去未被吸附的鸡红细胞，晾干，丙酮-甲醇溶
液(1∶ 1)固定 5 min，4% Giemsa-磷酸盐缓冲液染色
3 min，纯化水漂洗，晾干，计数 100 个巨噬细胞，按
下列公式计算吞噬指数:
吞噬指数 =被巨噬的鸡红细胞总数100 个巨噬细胞数
× 100%
2． 6 血清溶血素实验 于第 4 天给药后 1 h，每鼠
腹腔注射 5% CRBC 0． 4 mL进行致敏，并继续给药。
末次给药后 2 h，眼球取血，分离血清，取用生理盐水
稀释好的血清样品 1 mL 加至反应管内，再加入
10% SRBC 0． 5 mL，并于每管中加入 1 mL以 NS 1∶
10 稀释的豚鼠血清(补体) ，37 ℃保温 30 min，冰浴
10 min终止反应，离心 10 min，上清液 1 mL 加都氏
试剂 3 mL，摇匀，放置 10 min，于 540 nm 处测吸光
度(OD) ，以 HC50作为判定血清溶血素的指标，按下
式计算 HC50。另取 10% SRBC 0． 25 mL加都氏试剂
至 4 mL，测吸光度(OD) ，该值为实验中所用 SRBC
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半数溶血时的吸光度(OD)。
HC50 =
样品的吸光度
SRBC半数溶血时的 OD
×稀释倍数
2．7 ConA诱导的小鼠淋巴细胞增殖实验 末次给
药 1 h后，用乙醚麻醉小鼠后颈椎脱臼处死，无菌条
件下取脾脏，常规制备脾淋巴细胞悬液，调整细胞浓
度为4． 0 × 106个 /mL。在 96 孔培养板上，每孔加入
100 μL脾细胞悬液(终浓度为每孔2． 0 × 105个) ，10
μL(20 mg·L-1)刀豆蛋白(ConA) ，每孔的终体积达到
200 μL，不足的用完全 DMEM培养液补齐，每份样本
设 5个复孔。置 37 ℃、5%CO2培养箱培养 48 h，终止
培养 4 h前，每孔中加入 10 μL MTT 液，继续培养 4
h，离心10 min，吸弃上清，每孔加入100 μL的DMSO，
轻微混匀，于 30 min内用酶标仪在 570 nm测量吸光
度(OD)。将光密度值按下式转化为淋巴细胞增殖率
(%)= OD试验组 / OD对照组 ×100%。
2． 8 数据处理 应用 SPSS 11． 5 for Windows 进行
统计学处理，各组均数之间比较进行 One-way ANO-
VA检验和组间多重比较。
3 结果
3． 1 ARPS对免疫器官质量、腹腔巨噬细胞功能以
及血清溶血素含量的影响 免疫抑制组小鼠胸腺脏
器指数比正常对照组显著降低(P ＜ 0． 05) ，同时小
鼠脾脏脏器指数与正常对照组相比也有所降低，但
差异不显著;ARPS组均可以提高脾指数，与模型组
比较在统计学上差异显著(P ＜ 0． 05) ，ARPS(200
mg·kg-1)可以显著提高胸腺指数(P ＜ 0． 05) ，提示
ARPS对实验性免疫低下小鼠的脾、胸腺均具有一
定的保护作用。免疫抑制模型组吞噬指数明显低于
正常对照组(P ＜ 0． 05) ;ARPS组的吞噬指数均高于
模型组(P ＜ 0． 05) ，但量效关系不明显。ARPS 中剂
量组能明显改善环磷酰胺所引起的半数溶血素水平
降低，使免疫抑制小鼠的半数溶血素水平显著提高
(P ＜ 0． 05) ，提示本品对 CTX 诱导降低的特异性体
液免疫具有一定的增强作用，见表 1。
表 1 ARPS对免疫器官质量指数、腹腔巨噬细胞功能以及血清溶血素含量的影响(n =10，珋x ± s)
Tab 1 Effects of ARPS on weight of immune organs，phagocytosis percentage of macrophage and hemolysin in immunodepressed mice
(n = 10，珋x ± s)
组别 剂量 /mg·kg-1 脾脏指数 /mg·g-1 胸腺指数 /mg·g-1 吞噬指数 HC50
正常对照组 - 11． 7 ± 2． 7 2． 6 ± 0． 4a 0． 65 ± 0． 03a 118． 2 ± 29． 2a
环磷酰胺组 80 8． 7 ± 2． 6 1． 34 ± 0． 09b 0． 47 ± 0． 06b 54． 9 ± 17． 0b
ARPS组 100 13． 1 ± 1． 4a 1． 97 ± 0． 17 0． 62 ± 0． 04a 40． 0 ± 10． 1b
200 15． 3 ± 2． 9a 2． 51 ± 0． 28a 0． 63 ± 0． 04a 121． 5 ± 24． 4a
300 14． 0 ± 0． 6a 1． 52 ± 0． 27b 0． 61 ± 0． 06a 56． 6 ± 18． 8
注:与环磷酰胺组比较，aP ＜ 0． 05;与正常对照组比较，bP ＜ 0． 05
3． 2 ARPS对脾淋巴细胞增殖的影响 用 MTT 法
检测了受 ConA 作用后的淋巴细胞增殖情况。表 2
显示，ARPS均能促进体外培养的小鼠脾脏 T 淋巴
细胞增殖，与模型组比较，ARPS 组的 T 淋巴细胞增
殖率均显著增加(P ＜ 0． 05)。
表 2 ARPS对免疫低下小鼠脾淋巴细胞增殖的影响(n =
10，珋x ± s)
Tab 2 Effects of ARPS on splenic lymphocytes proliferation in
immunodepressed mice(n = 10，珋x ± s)
组别 剂量 /mg·kg-1 OD570nm 增殖率 /%
正常对照组 - 0． 305 ± 0． 011a 100 ± 0． 0a
环磷酰胺组 80 0． 226 ± 0． 006b 73． 9 ± 2． 0b
ARPS组 100 0． 276 ± 0． 015a 90． 4 ± 4． 9a
200 0． 330 ± 0． 013a 108． 1 ± 4． 4a
300 0． 32 ± 0． 04a 106． 8 ± 6． 4a
注:与环磷酰胺组比较，aP ＜ 0． 05;与正常对照组比较，bP ＜ 0． 05
4 讨论
CTX是广泛应用的抗肿瘤药物，可抑制免疫活
性细胞的生成，阻碍浆细胞生成抗体。作为化疗药
品，它也不可避免地对机体产生很大伤害，能够显著
降低机体的免疫水平，杀伤淋巴细胞，造成机体的抑
制免疫［4］。本实验以 CTX 所致免疫低下小鼠作为
研究药物免疫抑制的模型。
本研究从小鼠免疫器官质量、非特异性免疫、体
液免疫反应和细胞免疫反应 4 个方面观察了 ARPS
对免疫低下小鼠的调节作用。结果显示，ARPS 能
明显改善环磷酰胺引起免疫低下小鼠的脾和胸腺萎
缩，对免疫抑制小鼠巨噬细胞吞噬能力有促进作用，
提示 ARPS可以增强机体的非特异性免疫功能;细
胞培养实验观察 ARPS 对小鼠脾细胞增殖的影响，
发现 ARPS能促进体外培养的小鼠脾脏 T淋巴细胞
的增殖，表明 ARPS 能促进免疫功能低下小鼠的细
胞免疫功能;血清溶血素实验显示，ARPS 能够提高
免疫抑制小鼠低下的血清溶血素水平，提示 ARPS
可增强小鼠的体液免疫功能。
本结果提示，ARPS 对免疫功能具有促进作用，
为 ARPS 防治免疫失调 /低下及肿瘤等疾病提供了
科学依据。由于多糖的分离纯化及结构分析等较为
困难，使多糖药理作用的分子机制、构效关系等研究
以及开发利用等均受到极大限制。同样，ARPS 免
·138·中国医院药学杂志 2011 年第 31 卷第 10 期 Chin Hosp Pharm J，2011 May，Vol 31，No． 10
疫调节的确切作用机制尚不清楚。通过对 ARPS 的
进一步分离纯化、保留活性片段的分离，从细胞、分
子等不同层面阐明其免疫调节作用机制是本实验室
正在进行的研究工作。
参考文献:
［1］ 中国药典．一部［S］． 2005:238．
［2］ 费改顺，贾正平，张强，等． 贞芪增免胶囊对环磷酰胺所致小鼠
低下免疫功能的影响［J］． 中国医院药学杂志，2008，28(21) :
1838-1840．
［3］ 徐淑云，卞如濂，陈修． 药理方法学［M］． 3 版，北京:人民出版
社，2001:1492-1493．
［4］ 胡泽开，刘会丽，乔靖怡，等． 猫爪草多糖对环磷酰胺致小鼠免
疫低下模型免疫功能的影响［J］．中国现代应用药学，2010，27
(2) :89-91．
［收稿日期］2010-03-21
［作者简介］刘俊芳，女，学士，副主任药师，电话:0379-64830815，E-mail:lliiuu889900@ yahoo． com． cn
山楂叶总黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的探讨
刘俊芳1，李昌俊2，郑瑶1，郭莲军2 (1．河南科技大学第一附属医院，河南 洛阳 471003;2．华中科技大学同济医学院，湖
北 武汉 430030)
［摘要］ 目的:探讨山楂叶总黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法:采用改良 Zea Longa’s 法制作大脑中动
脉闭塞(MCAO)模型。将健康雄性 SD大鼠随机分成假手术组、模型组、尼莫地平组、山楂叶总黄酮(HLF)低、中、高剂量组 6
组。用神经功能评分评价大鼠脑缺血再灌注后行为障碍;用 2，3，5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法测定梗死灶面积;用相应
试剂盒测定脑组织内白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。结果:模型组缺血脑组织内的 IL-1β、TNF-α 含量显
著升高，与假手术组相比差异有显著性，尼莫地平组和 HLF组能明显降低缺血脑组织内 IL-1β、TNF-α 含量，与模型组相比有
显著差异，HLF高剂量组和尼莫地平组缺血脑组织内 IL-1β、TNF-α 含量与 HLF 与低剂量组相比也有显著差异。结论:HLF
可能通过抑制缺血再灌注后炎症反应过程而起到抗脑缺血再灌注损伤作用。
［关键词］ 山楂叶总黄酮;脑缺血再灌注;IL-1β ;TNF-α
［中图分类号］R954 ［文献标识码］A ［文章编号］1001-5213(2011)10-0832-04
Protective effects of hawthorn leaves flavonoids against rat cerebral ischemia-reperfusion in-
jury
LIU Jun-fang1，LI Chang-jun2，ZHENG Yao1，GUO Lian-jun2(1． NO． 1 Afflicted Hospital of Henan Science and Technology
University，Henan Luoyang 471003，China;2． Tongji Medical College，Huazhong Science and Technology University，Hubei Wuhan
430030，China)
ABSTRACT:OBJECTIVE To investigate the effects of hawthorn leaves flavonoids (HLF)on cerebral ischemia-reperfusion injury
in rats，and to elucidate the neuroprotective machanisms of HLF． METHODS The model of focal ischemic reperfusion in Sprague-
Dawley (SD)rats was prepared by middle cerebral artery occlusion (MCAO)with a nylon monofilament suture． Adult male SD rats
were divided randomly into sham operation group，model group，nimodipine treatment group，HLF treatment group (low dosage，mid-
dle dosage，high dosage)． The behavioral disturbance was evaluated according to neurological deficit scores，the infarction volumes
were evaluated by 2，3，5-triphenyltetrzolium chloride (TTC)staining，the levels of MDA，SOD，NO in the brain tissues of ischemia-
reperfusion rats were measured by the corresponding kits． RESULTS Compared with the sham operation group，model group’s IL-
1β，TNF-α increased significantly． Compared with the model group，nimodipine and HLF groups’IL-1β，TNF-α decreased signifi-
cantly． As the dosage of HLF increasing，IL-1β，TNF-α decreased significantly． Compared with HLF-L group，HLF-H and nimodipine
groups’IL-1β，TNF-α decreased significantly． CONCLUSION HLF has inhibitory effects on inflammation caused by ischemia-
reperfusion，and then protects cerebral ischemic injury．
KEY WORDS:hawthorn leaves flavonoids;cerebral ischemia-reperfusion;interleukin-1β;tumor necrosis factor
山楂叶总黄酮(hawthorn leaves flavonoids，
HLF)是从蔷薇科山楂属植物山里红(Crataegus pin-
natifi-da Bge． VarMajorN． E． Br)或山楂的干燥叶中
提取的活性成分。多种资料表明，山楂叶总黄酮主
要具有降节血脂、抗氧化、抗心肌缺血缺氧、抗血栓
和降血压等药理作用。但其抗脑缺血及对神经细胞
的保护作用报道［1-2］较少。纪影实等［1］认为山楂叶
总黄酮可减轻 CIR神经细胞损伤，其机制可能与抗
自由基损伤、减轻 NO神经毒性有关。
·238· 中国医院药学杂志 2011 年第 31 卷第 10 期 Chin Hosp Pharm J，2011 May，Vol 31，No． 10