全 文 ：2008年9月第5卷第25期·药物研究·
中国医药导报 CHINAMEDICALHERALD
HPLC法测定线叶旋覆花中1,5-二咖啡酰奎宁酸
含量
王彩芳 1,2,李海霞 1,王 娜 1,张秋荣 1,马景景 1
(1.郑州大学药学院,河南郑州 450051;2.浙江大学药学院,浙江杭州 310058)
[摘要]目的:建立线叶旋覆花中1,5-二咖啡酰奎宁酸(IBE-5)的HPLC测定方法。方法:采用高效液相色谱法,色谱条
件:Scienhome C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:甲醇-乙腈-5%醋酸(5∶20∶75,V/V/V),流速:0.8 ml/min,柱温:25℃,检
测波长:327 nm。结果:IBE-5在0.3～1.5μg/ml之间与峰面积呈现良好的线性关系,其回归方程为Y=3 397.5X-46.92,
r=0.999 9,平均加样回收率为103.5%,RSD为2.28%(n=3),旋覆花中IBE-5的平均含量为2.35%。结论:该测定方法简
便、准确、分离效果好,可用于测定线叶旋覆花中IBE-5的含量。
[关键词]旋覆花;1,5-二咖啡酰奎宁酸;HPLC
[中图分类号]R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2008)09(a)-032-02
Determination on the content of 1,5-di aff oyl quininc acid in the flowers of
Inula lineariaefolia Turcz by HPLC method
WANGCai-fang1,2, LI Hai-xia1, WANGNa1, ZHANGQiu-rong1, MAJing-jing1
(1.School ofPharmaceutical Sciences, Zhengzhou 450051,China;2.School ofPharmaceutical Sciences, Hangzhou 310058,
China)
[Abstract] Objective: To establish an HPLC method for the determination of 1,5-dicaffeoyl quinic acid (IBE-5) in the
flowers ofInula lineariaefolia Turcz. Methods: HPLCmethod was developed. Scienhome C18(250 mm×4.6 mm,5μm)column
wasused and mobile phase:methanol-acetonitrile-5%acetic acid(5∶20∶75,V/V/V),flowrate:0.8 ml/m n,column temperature:
25℃,wavelength:327 nm. Results: The linearityrelationship ofIBE-5 was good in the range of 0.3-1.5μg/ml. The equa-
tion ofstandard curve: Y=3 397.5X-46.92,r=0.999 9. The average recoverywas 103.6%,RSDwas 2.28%(n= ). The con-
tent ofIBE-5 in Inula lineariaefolia Turczwas 2.35%. Conclusion: The method is reliable, simple and precise,which could
be used as the determination ofIBE-5 ofthe flowers ofInula lineariaefolia Turcz.
[Key words] Inula lineariaefolia Turcz;1,5-Dicaffeoyl quinic aicd;HPLC
旋覆花为常用中药,始载于《神农本草经》,具有降气、消
痰、行水、止呕等功效,中医用于风寒咳嗽、痰饮蓄结、胸膈痞
满、喘咳痰多、呕吐噫气、心下痞硬等症[1]。1,5-二咖啡酰奎宁
酸(简称 IBE-5)为旋覆花的有效成分,具有多方面的生理活
性,尤其在保护肝细胞、抗肝损伤、抗肝纤维化方面具有显著
的作用[2,3]。有专利报道IBE-5具有治疗乙型肝炎和逆转录病
毒感染有关的疾病的作用[4]。咖啡酰奎宁酸类普遍存在于菊
科植物中,但未见到对IBE-5的高效液相色谱分析方法,作
者采用反相高效液相色谱法首次对采自河南栾川县龙峪湾
林场的线叶旋覆花(Inula lineariaefolia Turcz)中IBE-5进行含
量测定,以期建立旋覆花中 IBE-5的 HPLC测定方法,为旋
覆花的生产开发和质量控制提供科学依据,也为含有该成分
的药材提供一定的参考。
1仪器与试药
AilgentLC1200,VWD检测器,旋转薄膜蒸发仪(RE-52AA,
上海亚荣),JHBE-50A闪式提取器 (北京金鼐科技发展有限
公司);乙腈(色谱纯,天津四友),甲醇(色谱纯,天津四友),其
余试剂为分析纯;IBE-5为作者自制,用HPLC面积归一化法
测试其质量分数为99.50%;线叶旋覆花 (Inula lineariaefolia
Turcz)由作者自河南栾川县龙峪湾林场采集并鉴定。
2方法与结果
2.1色谱条件
Scienhome C18柱 (250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲
醇-乙腈-5%醋酸水溶液(5∶20∶75,V/V/V);流速:0.8 ml/min;
柱温:25℃;检测波长:327 nm。色谱图见图1。
a b
图1旋覆花样品IBE-5的HPLC色谱图
(a:旋覆花样品色谱图,b:IBE-5对照品色谱图,1:IBE-5)
[作者简介]王彩芳(1974-),女,讲师,主要研究方向为天然药物中有效
成分研究。
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2008年9月第5卷第25期 ·药物研究·
CHINAMEDICALHERALD 中国医药导报
2.2对照品溶液的制备
取IBE-5对照品适量,精密称定,以甲醇制成0.15mg/ml
的对照品溶液。
2.3供试品溶液的制备
精确称取线叶旋覆花样品8g,利用闪式提取器进行破
碎提取,甲醇溶液 400ml,提取时间 2min,提取 2次,室温
(20℃),合并提取液浓缩至干,干浸膏用氯仿超声浸提一次,
滤去氯仿液部分,将氯仿不溶物用甲醇溶解并转移至100ml
容量瓶,用流动相定容至刻度,作为储备液。精确吸取该储备
液0.5ml至10ml容量瓶,流动相定容至刻度。此即为旋覆
花样品液。进样量10μl。
2.4标准曲线的制备
分别精密吸取0.15mg/mlIBE-5对照品溶液,配制成一
系列浓度 0.3、0.6、0.9、1.2、1.6μg/ml标准溶液,注入液相色
谱仪,测定峰面积积分值。以峰面积积分值为纵坐标,样品浓
度为横坐标,绘制标准曲线。结果表明,IBE-5在0.3～1.5μg/ml
与峰面积积分值呈现良好的线性关系,其回归方程为 Y=
3397.5X-46.92,r=0.9999。
2.5精密度试验
取IBE-5对照品溶液,重复进样 5次,测定其峰面积积
分值,计算得其 RSD为 0.87%,各取供试品 A液和 B液,重
复进样 5次,测定 IBE-5峰面积积分值,RSD分别计算得
1.02%和2.16%。
2.6稳定性试验
取供试品溶液,分别在 0、1、2、3、4、5h进样测定,5h内
IBE-5峰面积积分值稳定,其RSD分别为1.01%(n=6)。
2.7重复性试验
取线叶旋覆花,按“2.3”项下制备方法制备 5份,各进样
10μl测定,计算得IBE-5的峰面积积分值RSD为2.54%。
2.8加样回收试验
精密称取已知含量的线叶旋覆花3份,分别加入精密称
定的 IBE-5对照品,按“2.3”项下制备方法制备 3份供试品
溶液,进样测定,计算IBE-5的质量分数,结果见表1。
2.9样品测定
分别精密吸取样品液10μl,注入高效液相色谱仪,依照
上述色谱条件测定峰面积,按标准曲线法计算 IBE-5,结果
见表2。
表1加样回收试验结果
表2线叶旋覆花中IBE-5的含量
3讨论
试验中考察了甲醇-水(10∶90,V/V)、甲醇-5%醋酸(40∶
60,V/V)等多种色谱条件,最后确定在甲醇-乙腈-5%醋酸(5∶
20∶75,V/V)、流速 0.8ml/min、柱温 25℃下,对照品保留时间
较短、峰形良好,供试品液中对照品峰与其它杂质峰能得到
较好的基线分离。
供试品溶液制备时考虑到药材为花类,含有较多的色
素等脂溶性杂质成分,该类成分可能会严重污染色谱柱,也
将影响到样品的分析时间,故而曾试验了多种提取液进行
除杂的方案,排除了用活性碳吸附色素的设计方案,方案中
活性炭对 IBE-5的吸附较多,最后作者确定采用提取液浓
缩至干再用氯仿超声提取一次的方法,氯仿液进行薄层色
谱分析,未见到 IBE-5的斑点,且氯仿未溶物部分在薄层色
谱中斑点纯度较高,高效液相色谱峰形良好,出峰时间约在
10.26min。
[参考文献]
[1]楼之岑,秦波.常用中药品种整理和质量研究(北方编)[M].北京:北京
医科大学、中国协和医科大学联合出版社,1995.576.
[2]孙燕荣.二咖啡酰奎宁酸抗实验性肝损伤及肝纤维化的研究[D].广州:
第一军医大学硕士学位论文,2001.67.
[3]孙燕荣,董俊兴,吕秋军,等.二咖啡酰奎宁酸对大鼠肝原代细胞保护
作用的研究[J].解放军药学学报,2004,20(2):81-84.
[4]董俊兴,汤仲明,米志宝,等.二咖啡酰奎宁酸在治疗乙型肝炎及与逆
转录病毒有关疾病中的用途及新咖啡酰奎宁酸衍生物[P].中国:
96111691.2002-07-17.
(收稿日期:2008-07-21)
加入量
(mg)
1.70
1.62
1.53
测得量
(mg)
回收率
(%)
25.90
25.22
25.08
105.9
101.2
103.3
平均回收
率(%)
RSD(%)
103.5 2.28
1
2
3
样品编号
供试品
含量(mg)
24.10
23.58
23.50
平均值(%)
2.35
RSD(%)
3.31
1
2
3
样品编号 含量(%)
2.25
2.46
2.34
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·编读往来·
论文写作技巧——计量单位和符号
1.文中涉及的量和单位应按《中华人民共和国法定计量单位》规定执行,并用规定缩写符号表示。
2.每一个组合单位符号中,斜线不得多于1条,如每天每千克体重用药剂量应写成mg/(kg·d)。
3.量符号均应使用斜体,如m(质量)、t(时间)、V(体积)等,且应注意某些希腊字母与拉丁(或英文)的区别。
4.图、表中的量和单位应量符号在前,单位符号在后。单位符号前的数字最好为0.1～1000间的整数或小数,避
免使用分数。当过大或过小时,应改用适当词头中M,P或10n,10-n表示,但应遵守有效数和修约规则。
5.当表示变动范围时,范围号“~”前后两数字中的%、‰或10n、10-n均应同时写出,不能省略前者只写后者。
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