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新疆紫草不同部位不同溶剂提取物体外抑菌效果的研究



全 文 :食 品 科 技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY提取物与应用
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2014年 第39卷 第02期
新疆紫草Arnebia euchroma (Royle) Johnst为紫
收稿日期:2013-08-21 *通讯作者
基金项目:石河子大学高层次科研启动基金项目(RCZX200664);石河子大学自然科学与技术创新重点项目(ZRKX2009ZD05)。
作者简介:余风华(1991—),男,硕士研究生,研究方向为生药学及天然药物活性成分研究。
草科Boraginaceae拟紫草属多年生草本植物,药用
余风华1,高婷婷1,张之慧2,谭 勇1,3*,秦冬梅1
(1.石河子大学药学院,石河子 832002;2.石河子大学医学院第一附属医院,石河子
832008;3.新疆特种植物药资源省部共建教育部重点实验室,石河子 832002)
摘要:采用不同溶剂对新疆紫草的根和地上部分进行提取,利用纸片扩散法对大肠杆菌、金黄
色葡萄球菌、八叠球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌进行体外抑菌实验,研究不同溶剂提取
物的抑菌能力,并测定其抑菌直径和最小抑菌浓度。结果表明,紫草根的乙醇提取物对上述5
种细菌均有明显的抑菌作用,最小抑菌浓度分别为250、125、15.7、62.5、500 mg/mL;新疆紫
草根水提取物、新疆紫草地上部分水提取物和醇提取物对上述5种病原菌均无明显抑制作用。
关键词:新疆紫草;根;地上部分;抑菌作用
中图分类号:R 284 文献标志码:A 文章编号:1005-9989(2014)02-0202-03
Antimicrobial activities of different solvent extracts from
different parts of Arnebia euchroma (Royle) Johnst
YU Feng-hua1, GAO Ting-ting1, ZHANG Zhi-hui2, TAN Yong1,3*, QIN Dong-mei1
(1.College of Pharmacology, Shihezi University, Shihezi 832002; 2.The First Affiliated
Hospital of Medical College, Shihezi University, Shihezi 832008; 3.Key Laboratory of
Xinjiang Phytomedicine Resources of Ministry of Education, Shihezi 832002)
Abstract: In this study, the antimicrobial activities and MIC of different solvent extracts from different
parts of Arnebia euchroma (Royle) Johnst. were investigated, inhibitory test in vitro about E.colin, Bacillus
subtilis, Sarcina, Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa by Kirby-Bauer, measuring its
bacteriostatic diameter and the MIC. The result show that ethanol extract of radix lithospermi has obvious
bacteriostatic action of the above fi ve kinds of bacteria, and the MIC respectively are 250, 125, 15.7, 62.5,
500 mg/mL; the antimicrobial activities of water extract of root and ground part, ethanol extract of ground
part from Arnebia euchroma (Royle) Johnst. are unconspicuous.
Key words: Arnebia euchroma (Royle) Johnst; root; ground part; antimicrobial activities
新疆紫草不同部位不同溶剂提取物
体外抑菌效果的研究
食 品 科 技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 提取物与应用
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2014年 第39卷 第02期
其根部,是《中国药典》(2010年版)药材紫草的主
要来源[1],习称软紫草,主要分布于新疆、甘肃及
西藏西部[2],其味甘、咸,性寒,归心、肝经,有
清热凉血、活血解毒、透疹消斑等功效。已有文
献报道表明,紫草具有抗病原微生物作用、肝损
伤保护作用、抗肿瘤作用、抗免疫缺陷作用、抗
炎作用等药理活性[3-4],多种提取物及活性单体具
有较好的抗菌活性[5-9],但目前对于新疆紫草根和
地上部分的抑菌活性的系统性研究鲜见报道。因
此,现对新疆紫草的不同部位的醇提物及水提物
抑菌作用进行体外实验研究并进行比较,旨在为
促进新疆紫草的综合开发利用提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验材料 新疆紫草药材采自新疆塔城地区
托里县(海拔:2000 m),将根和地上部分分开,自
然干燥、粉碎装袋后备用。
1.1.2 试剂 LB培养基、牛肉膏蛋白胨培养基:新
疆特种植物药资源省部共建教育部重点实验室;
乙醇、NaCl等均为分析纯。
1.1.3 仪器 DHP-9162电热恒温培养箱:上海齐
欣科学仪器有限公司;Metter EL104电子分析天
平:梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司;P300
超声提取器:天鹏电子新技术有限公司;LDZX-
30FBS立式压力蒸汽灭菌器:上海申安医疗器械
厂;SHA-C水浴恒温振荡器:金坛市医疗仪器厂。
1.1.4 供试菌种 大肠杆菌(E.coli):石河子大
学药学院药理实验室;枯草芽孢杆菌(Bacil lus
subtilis)、八叠球菌(Sarcina)、金黄色葡萄球菌
(Staphylococcus aureus):石河子大学医学院病理实
验室;铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,编
号20240):中国工业微生物菌种保藏中心。
1.2 方法
1.2.1 新疆紫草根及地上部分水提物的制备 称取
新疆紫草的根、地上部分干燥粉末各5.0 g,溶于
50 mL蒸馏水中,冷浸24 h后,过滤弃去药渣,将
提取液蒸发浓缩至5.0 mL,备用。
1.2.2 新疆紫草根及地上部分醇提物的制备 称
取新疆紫草的根、叶干燥粉末各5.0 g,溶于50
mL95%的乙醇中浸泡6 h,超声30 min,过滤弃去
药渣,将提取液蒸发浓缩至5.0 mL,备用。
1.2.3 菌悬液的制备 在无菌条件下,用接种环将
贮存的大肠杆菌用平板画线法接种于牛肉膏蛋白
胨培养基中,37 ℃下培养24 h复壮;取复壮后菌
种再接种于LB培养基,制成菌悬液,37 ℃培养24
h,待用。
1.2.4 药敏纸片的制备 将打孔器将洁净滤纸制成
直径为5 mm的圆片,经高压蒸汽灭菌后,分别置
于紫草根、叶的醇提药液、冷浸药液及蒸馏水、
95%乙醇和庆大霉素注射液中浸泡12 h后取出阴干
备用。
1.2.5 抑菌活性测定——纸片法[10] 将LB固体琼脂
培养基溶化后,倾注于培养皿上,每个培养皿15
mL,待冷凝后,用移液枪加入供试菌悬液0.4 mL
菌悬液于平板中央,均匀涂布。将药敏纸片贴于
含菌培养基上,每皿放置4片,各纸片间的距离均
等,每一样品重复3次;同时用浸有溶剂的滤纸片
做阴性对照,用浸泡过庆大霉素注射液的纸片做
阳性对照。将放置过药敏片的培养皿在37 ℃倒置
培养24 h,用十字交叉法测量抑菌圈直径,重复3
次取平均值,用SPSS软件进行数据统计分析。
1.2.6 新疆紫草根醇提取物MIC的测定 取10支无
菌试管,前9支每管加入2 mL LB培养基,然后在
第1管加入2 mL灭菌的新疆紫草根醇提取物,混匀
后吸取2 mL加入第2管中,混匀后吸取2 mL加入
第3管中,依法对药液进行2倍倍比稀释,直至第8
管,第8管吸取2 mL弃去,使药液质量浓度在线性
范围内;第9管仅加菌液作为对照,以观察细菌的
生长情况;第10管仅加受试新疆紫草根醇提取物2
mL,以便观察受试新疆紫草根醇提取物是否被污
染。取培养好的菌液0.2 mL接种于前9支试管中,
37 ℃下培养24 h观察结果。每种细菌重复3次取平
均值,用SPSS软件进行数据统计分析。
2 结果与分析
2.1 新疆紫草根及地上部分不同溶剂提取物抑菌
活性测定
由表1可知,新疆紫草根的醇提取物对大肠
杆菌、金黄色葡萄球菌、八叠球菌、枯草芽孢杆
菌、铜绿假单胞菌均有一定的药敏作用,其抑菌
圈大小分别为(6.1±0.3)、(8.3±1.0)、(8.4±1.0)、
(11.4±1.0)、(6.4±0.4) mm。新疆紫草根水提取
物、新疆紫草叶醇提取物和水提取物对上述5种病
原菌均无明显抑制作用。
2.2 新疆紫草根醇提取物MIC的测定
由表2可知,新疆紫草根醇提取物对大肠杆菌
的MIC为250 mg/mL,对金黄色葡萄球菌的MIC为
食 品 科 技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY提取物与应用
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125 mg/mL,对八叠球菌的MIC为15.7 mg/mL,对
枯草芽孢杆菌的MIC为62.5 mg/mL,对铜绿假单胞
菌的MIC为500 mg/mL。
表2 新疆紫草根醇提取物MIC的测定(n=3)
药液浓度/
(mg/mL)
大肠
杆菌
金黄色
葡萄球菌
八叠
球菌
枯草芽
孢杆菌
铜绿假单
胞菌
1 500 - - - - -
2 250 - - - - +
3 125 + - - - +
4 62.5 + + - - ++
5 31.3 + + - + ++
6 15.7 ++ ++ - + +++
7 7.86 +++ ++ + ++ +++
8 3.93 +++ +++ + ++ +++
9 药液 - - - - -
10 菌液 ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
注:“-”:无菌生长;“+”:少许浑浊;“++”:比较浑浊;
“+++”:很浑浊;“++++”:非常混浊。
3 结论与讨论
从本实验可以看出,新疆紫草根的醇提取物
对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、八叠球菌、枯草
芽孢杆菌、铜绿假单胞菌均有比较明显的抑制作
用,根的水冷浸液及其地上部分的水冷浸液、醇
提取液对上述5种菌无明显抑制作用。
近年来,食品安全与食品添加剂问题日益突
出,抗生素、激素及防腐剂的大量使用对人类健
康造成了极大威胁,因此从天然植物中提取具有
抗菌防腐活性的物质更是突显现实意义。本实验
对新疆紫草地上部分不同提取物进行了体外抑菌
实验,已初步确定新疆紫草中抑菌活性成分主要
集中在其根部,为开发新疆紫草中天然抗菌活性
成分及其综合利用提供理论依据。
参考文献:
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表1 紫草根、叶不同提取物的抑菌作用(n=3)
样品
抑菌圈直径(X±SD)/mm
大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 八叠球菌 枯草芽孢杆菌 铜绿假单胞菌
紫草根(醇提取液) 6.1±0.3 8.3±1.0 8.4±1.0 11.4±1.0 6.4±0.4
紫草根(水提取液) - - - - -
紫草叶(醇提取液) - - - - -
紫草叶(水提取液) - - - - -
阴性对照 - - - - -
阳性对照 19 25 28 21 30
注:“-”:无抑菌圈,纸片直径5 mm,阳性对照药为40 mg/mL的庆大霉素。
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