全 文 ：研究报告
2007年第 33卷第 4期(总第 232期) 49　
美味牛肝菌多糖的抗氧化性＊
李志洲
(陕西理工学院化学与环境科学学院 , 陕西汉中 , 723000)
摘　要　采用超氧阴离子自由基体系 、羟基自由基体系 , 研究了美味牛肝菌多糖的抗氧化活性 ,并与 Vc 进行了
比较。结果表明 ,美味牛肝菌多糖具有强的清除自由基能力 ,且随着浓度的增大其抗氧化作用亦增大。美味牛肝
菌多糖浓度约为 0.04 mg/m L时 , 其清除· OH 的能力与 0.02 mg/m L Vc的能力相当;对浓度为 0.1 mg/ mL 的
多糖溶液 , 其清除率达到 71.78%。对于 O 2 -·自由基 , 在浓度为 0.04 mg/ mL 时 ,抑制率达到 79.34%。
关键词　美味牛肝菌多糖 , 抗氧化 ,自由基
　作者:学士 ,副教授。
＊陕西理工学院科研基金资助项目(SLG0432)
　收稿日期:2006-09-27 ,改回日期 2006-12-26
　　人体内产生的自由基 ,只有在抗氧化剂或体内有
抗氧化作用的物质作用下 ,才能不断地被清除。现代
研究发现 ,黄酮类化合物 、植物多酚 、多糖等天然有机
化合物均具有抗氧化作用[ 1] 。
美味牛肝菌(Boletus ed ul is Bull)又名大脚菇 、白
牛肝菌;牛肝菌科;菌盖直径 4 ～ 15 cm ,呈扁半球形
或稍平展 ,不粘 、光滑 、边缘钝 ,黄褐色 ,土褐色 ,赤褐
色。我国各省均有分布 ,西南地区产量较高 。美味牛
肝菌味道鲜美 ,营养丰富。它不仅有一定的营养价
值 ,而且具有较高的药用价值 ,是“疏筋丸”的成分之
一 ,可治腰腿疼痛 、手足麻木 、盘骨不舒 、四肢抽搐等
症。该菌子实体的水体物对小白鼠肉瘤 180 的抑制
率为 100%,对艾氏腹水癌的抑制率为 90%[ 2] 。实验
就美味牛肝菌多糖的抗氧化作用进行了研究 。
1　材料与方法
1.1 　材　料
市售美味牛肝菌 ,产于陕西镇巴。
1.2　试　剂
胰蛋白酶 Tkypsin 1∶250(上海化学试剂购供应
站)、葡萄糖 、苯酚 、浓 H2 SO 4 、NaOH 、Vc 、Tris 试剂 、
硫酸亚铁铵 、邻二氮菲 、H 2O 2 、邻苯三酚 、HCl 、牛血
清蛋白 、考马斯亮蓝 G-250等均为分析纯试剂 。
1.3　主要仪器
722E可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司),
TDL-40B离心机(上海安亭科学仪器厂),GR-200电子
天平(A&D Company ,Limited.Made in Japan)等。
1.4　分析方法
1.4.1　多糖的测定[ 3 , 4]
1.4.1.1　对照品溶液的制备
精密称取经 80℃干燥至恒重的无水葡萄糖 0.1
g , 于 100 m L 量瓶中 , 加蒸馏水溶解并稀释至刻度 ,
浓度为 1 mg/mL ,备用。
1.4.1.2　标准曲线的制备
精密量取对照品溶液 0.0 、 0.5 、1.0 、1.5 、2.0 、
2.5 、 3.0 mL ,分别置 50 mL 量瓶中 , 加水至刻度 ,
摇匀。各精密吸取 1.0 mL 置于 7支具塞试管中 , 分
别加 8%苯酚溶液 1.0 mL , 摇匀 。再依次快速加入
浓 H 2SO 4 5.0 mL , 摇匀 。置水浴中加热 15 min , 取
出冷至室温。用 722E分光光度计于 490 nm 波长处
测定吸收度 ,以糖的含量为横坐标 ,以吸光度为纵坐
标 ,绘制标准曲线 。回归方程为:
A =9.36C -0.001 75(C:mg/mL)　r=0.9907。
1.4.2　蛋白质含量的测定[ 2]
考马斯亮蓝 G-250法 。以牛血清蛋白作标准曲
线 。精密称取牛血清蛋白 0.1 g ,配制浓度为 1 mg/
mL 的溶液 100 mL。分别吸取牛血清蛋白标准溶液(1
mg/mL)0.0 、1.0 、2.0 、3.0 、4.0 、5.0 mL ,加入蒸馏水 ,
定容至 5 mL。充分振荡。准确吸取所配各管溶液 0.2
mL ,放入具塞试管中 ,加入考马斯亮蓝 G-250 蛋白染
色剂 10 mL ,将试管中溶液混合后静置 2 min ,用 1 cm
厚的比色皿在 595 nm 下读取吸光度。以浓度为横坐
标 ,A为纵坐标 , 绘制标准曲线。回归方程为:
A =0.028+0.592C (C:mg/mL)　r=0.9989
1.5　多糖的提取和纯化 [ 2 ～ 5]
1.5.1　多糖的提取
称取 20 g 美味牛肝菌粉末 ,于烧杯中(料液比
1∶20)加入 400 mL 蒸馏水 , pH 至 8 , 80℃水浴加热
1 h ,趁热过滤 ,滤液离心 ,收集上清液 ,减压浓缩 ,然
后加入 2倍浓缩液体积的无水乙醇进行醇析 、过夜 ,
离心 ,弃去上清液 ,将沉淀烘干 ,即得粗多糖 。
食品与发酵工业 FOOD AND FERMENTAT ION IND USTRIES
50　 2007 Vol.33 No.4(Total 232)
1.5.2　三氯乙酸-正丁醇法脱蛋白
称取 0.600 0 g 粗多糖溶解于 100 mL 水中 ,加
入 2倍多糖溶液体积的 V(三氯乙酸)∶V(正丁醇混)
=1∶20 ,振荡 30 min ,静置 1.5 h 。取下层多糖层测
定蛋白含量 ,依含量变化重复此操作过程 ,至蛋白完
全去除为止。
后将下层多糖溶液 ,加入 3倍体积的无水乙醇进
行醇析。离心 ,烘干 ,得到纯多糖。
1.6　美味牛肝菌多糖抗氧化性研究
1.6.1　清除羟自由基(·OH)活性试验
Fenton反应。利用H2O2与Fe2+混合产生·OH ,邻
二氮菲-Fe2+水溶液经·OH 氧化为邻二氮菲-Fe3+后 ,其
最大吸收峰消失 ,然后测定其吸光度的变化[ 6 ～ 8] 。
取8支 10 mL比色管 ,均依次加入 1 mL pH8.20
的 Tris-HCL溶液 、0.3 mL 7.5 mmol/L 硫酸亚铁铵溶
液和 0.3 mL 7.5 mmol/L 的邻二氮菲溶液 , 1号为空
白 , 3 ～ 7号分别加入 0.2 、0.4 、0.6 、0.8和 1.0 mL 1
mg/mL 牛肝菌多糖溶液 , 8号加入 1 mL 0.2 mg/mL
的Vc溶液 ,最后往 2 ～ 8号分别加入 1 mL 7.5 mmol/
L H2O2 溶液 ,定容至刻度。在 37℃水浴中反应1 h ,在
510 nm 下测吸光度 A , 计算对 ·OH 的清除率。
清除率 / %=(A3 -A2)(A1 -A2)×100
式中 , A1和 A2分别为体系不加 H2O 2和加H 2O 2
时的吸光度 , A3 为加入多糖溶液后的吸光度 。
1.6.2　抑制超氧阴离子(O -2 ·)活性试验
邻苯三酚在碱性条件下自氧化形成中间产物 O -2
· ,此自由基能促进邻苯三酚的自氧化[ 7 ～ 9] ,因此通
过测定某物质对邻苯三酚自氧化的抑制作用 ,即可表
征其对 O-2 ·的清除作用。
取 5支 10 mL 试管 , 各加入 0.05 mol/ L T ris-
HCL 缓冲液 4.5 mL ,置于 25℃水浴中预热 25 min ,
分别加入 0.1 mL 不同浓度的多糖溶液和 0.4 mL
0.5 mmol/ L 邻苯三酚溶液 ,混匀后于 25℃水浴中反
应 4 min ,加入 8 mol/ L HCl 2 滴终止反应 , 320 nm
处测定吸光度(A i), 空白对照组以相同体积的蒸馏
水代替。清除率计算公式为:
P/% =A0 -A i
A 0
×100
式中 , A0 为空白的吸光度;A i 为多糖的吸光度 。
2　结果与分析
美味牛肝菌多糖为棕色固体 ,经测定计算得出多
糖第 1次的提取率为 7.29%。
利用考马斯亮蓝 G-250法初测美味牛肝菌的蛋
白含量为 19.01% ,经 4次脱蛋白后 ,其蛋白含量为
1.39%,蛋白清除率为 92.69%。蛋白含量与脱蛋白
的次数的关系见图 1。
图 1　蛋白含量与脱蛋白率的关系
通过图 1 可以得出 ,用三氯乙酸-正丁醇法脱蛋
白 ,因第 4次的蛋白含量与第 3次相差较小 ,考虑到
经济因素 ,进行 3次就可以了。
2.1　美味牛肝菌多糖对·OH的清除作用
利用Fenton反应 ,测定美味牛肝菌多糖对·OH 的
清除能力 ,其结果如图 2 所示 。同时 ,用 Vc对 ·OH
的清除作用进行对比 ,结果见表 1。
图 2　牛肝菌多糖对· OH 的清除作用
　　由图 2和表 1中的数据可看出 ,在所选质量浓度
范围内 ,随着质量浓度的增大 ,美味牛肝菌多糖对 ·
OH 的作用显著 ,美味牛肝菌多糖浓度约为 0.04 mg/
mL 时 ,其清除·OH 的能力与 0.02 mg/mL Vc的清
除能力相当 ,当美味牛肝菌多糖浓度大于 0.04 mg/
mL 后 ,其清除能力远优于 Vc ,这说明 ,美味牛杆菌多
糖对·OH 有较强的清除作用 。
表 1　不同量牛肝菌多糖和 Vc对·OH的清除率
多糖/ Vc(mg/mL) 清除率/ %
0.02/ 0.01 27.69/23.76
0.04/ 0.02 36.71/36.70
0.06/ 0.04 43.74/39.69
0.08/ 0.06 59.64/52.31
0.10/ 0.06 71.78/64.42
2.2　美味牛肝菌多糖对O-2 ·的清除作用
研究报告
2007年第 33卷第 4期(总第 232期) 51　
配制不同浓度的美味牛肝菌多糖溶液 ,测定其对
O -2 ·的清除作用 ,清除率变化见图 3;同时 ,与不同浓
度的 Vc溶液进行对比 ,结果见表 2。
图 3　牛肝菌多糖对 O -2.的清除作用
表 2　不同量牛肝菌多糖和 Vc对·OH的清除率
多糖/ Vc(浓度:mg/mL) 清除率/ %
0.01/ 0.01 20.69/ 23.76
0.02/ 0.02 39.81/ 40.70
0.03/ 0.03 59.74/ 52.69
0.04/ 0.04 79.34/ 63.31
　　结果表明 ,多糖浓度为 0.04 mg/mL 时对 O -2 ·
的抑制率达到 79.34%, 浓度为 0.02 mg/mL 时 ,其
抗氧化活性与相同浓度的 Vc 相当 。由于 O-2 ·是机
体代谢过程中产生中的一种活性氧自由基 ,在人体内
大量积聚会导致机体免疫活性减弱 ,而实验数据显
示 ,美味牛肝菌多糖对 O -2 ·具有高的抑制活性 。而
且 ,美味牛肝菌多糖的清除 O -2 ·活性能力随着浓度
升高而升高。
3　结　论
(1)实验采用热水浸提提取 , 80%乙醇沉淀的方
法从美味牛肝菌中得到美味牛肝菌多糖 ,提取率为
7.29%。美味牛肝 菌多糖的蛋 白初始 含量为
19.01% ,经 4次脱蛋白后 ,其蛋白含量为 1.39%,蛋
白清除率为 92.70%。未脱除的蛋白可能与多糖结
合牢固 ,形成复合物。
(2)抗氧化实验表明 ,牛肝菌多糖对 ·OH 具有
强的抑制作用 ,在浓度 0.1 mg/mL 时抑制率达到
71.78%。对 O -2 ·也有强的抑制生成作用 ,在浓度为
0.04 mg/mL 时对 O -2 ·的抑制率达到 79.34%。且
均随着浓度的增大其抗氧化作用亦增强。
参 考 文 献
1　郑德勇 , 安鑫南.植物抗氧化剂的研究概况与发展趋势
[ J] .林产化学与工业 , 2004(3):113～ 118
2　李志洲 , 邓百万 , 杨海涛 , 等.美味牛肝菌多糖的最佳提取
工艺研究[ J] .氨基酸和生物资源 , 2003(3):27 ～ 29
3　李淑惠 , 纪耀华 , 崔玉辉 , 等.白鲜皮粗多糖提取与总糖含
量测定[ J] .时珍国医国药 2000(1):14
4　张　青 ,张天民.苯酚-硫酸比色法测多糖含量[ J] .山东食
品科技 , 2004(7):17 ～ 18
5　王丽华.姬松茸多糖脱蛋白方法研究[ J] .食品科技 , 2003
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6　曹艳萍.苦荞叶提取物抗氧化性及其协同效应的研究[ J] .
西北农林科技大学学报(自然科学版), 2005(8):144 ～
148　
7　孟庆繁 , 于笑坤 , 徐睦芸 ,等.刺五加多糖的提取及其抗
氧化性[ J] .吉林大学学报(理学版), 2005(5):683～ 686
8　高春燕 , 田呈瑞 , 周默.枸杞多糖体清除自由基活性研究
[ J] .三峡大学学报(自然科学版), 2005(5):456～ 458
9　范智超 ,张志琪.川芎多糖的提取 、纯化及抗氧化活性的
研究[ J] .天然产物研究开发 , 2005(5):561～ 567
Study on the Antioxidative Activity of Boletus edulis Bull Polysaccharide
Li Zhizhou
(School of Chemistry and Environmental Science , Shaanxi Univ ersity of Technolo gy , Hanzhong 723000 , China)
ABSTRACT　The ant ioxidetive activi ty of Boletus edulis Bull polysaccharide w as studied and compared w i th
Vc by using the supero xide anion f ree radical sy stem , hydro xy l radical sy stem in this paper.The resul ts
show ed that the Boletus ed ul is Bull poly saccharide can clear out the radicals ef fectively , and the function of
ant ioxidetive become stronge r w ith the increase of the poly saccharide concentrat ion.When the concentration
of bo letus Edul is B ul l poly saccharide is about 0.04 mg/mL , the ability of scavenging hydro xy l radical is clo se
to 0.02 mg/mL Vc , and the scavenging abili ty can reaches to 71.78% at the concentrat ion of 0.10mg/mL.
The abili ty of scavenging supero xide anion f ree radical is 79.34% when the concentration of Boletus edul is
Bull poly saccharide is about 0.04 mg/mL .
Key words　Boletus edulis Bull po ly saccharide , antio xidet ive activity , f ree radical