全 文 ：中国药业 China Pharmaceuticals
2010年第 19卷第 21期
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高效液相色谱法测定旋复花中咖啡酸含量
杨 斌，李耘胜
(四川宜宾市第二人民医院药剂科，四川 宜宾 644000)
摘要:目的 建立测定旋复花中咖啡酸含量的高效液相色谱法。方法 采用 Kromasil C18 色谱柱(200 mm × 4． 6 mm，5 μm)，流动相为乙腈 －
0． 1%磷酸溶液(10 ∶ 90)，检测波长为 320 nm，流速为 1． 0 mL /min。结果 咖啡酸的进样量线性范围为 0． 017 38 ～ 0． 434 4 μg( r = 0． 999 5)，
平均回收率为 99． 40%，RSD = 2． 03% ( n = 6 )。结论 所用方法准确、可靠，可作为旋复花的质量控制方法。
关键词:高效液相色谱法;旋复花;咖啡酸;含量测定
中图分类号:R284． 1;R282． 71 文献标识码:A 文章编号:1006 － 4931 (2010 )21 － 0013 － 02
Determination of Caffeic Acid in Flos Inulae by HPLC
Yang Bin， Li Yunsheng
( Department of Pharmacy， Yibin Second People  s Hospital， Yibin， Sichuan， China 644000 )
Abstract: Objective To develop an HPLC method for the determination of caffeic acid in Flos Inulae． Methods The separation was
performed on the Kromasil C18 column (200 mm × 4． 6 mm，5 μm) with acetonitrile － 0． 1% phosphoric acid (10 ∶ 90 ) as the mobile phase．
The detective UV wavelength was 320 nm． The flow rate was 1． 0 mL / min． Results The linear range of caffeic acid was 0． 017 38 －
0． 434 4 μg ( r = 0． 999 5 ) ． The average recovery rate of caffeic acid was 99． 40% ， RSD = 2． 03% ( n = 6 ) ． Conclusion This method is accu-
rate and reliable，which could be used for the quality control of Flos Inulae．
Key words:HPLC; Flos Inulae; caffeic acid; content determination
样品含量(μg)
0． 068 8
0． 062 4
0． 064 0
0． 061 6
0． 064 4
0． 063 2
加入量(μg)
0． 086 8
0． 086 8
0． 065 2
0． 065 2
0． 043 6
0． 043 6
测得量(μg)
0． 156 3
0． 148 0
0． 130 2
0． 127 4
0． 106 4
0． 106 0
回收率(%)
100． 81
98． 62
101． 53
100． 92
96． 33
98． 17
X(%)
99． 40
RSD(%)
2． 03
表 1 咖啡酸加样回收试验结果 ( n = 6 )
1. 咖啡酸
A. 对照品溶液 B. 供试品溶液 C. 50%乙醇溶液
图 1 高效液相色谱图
旋复花为菊科旋复花属植物水朝阳花 Inula helianthus － aquat-
ica C． Y． Wu ex Ling 的干燥头状花序，为《四川省中药材标准》1987
年版收载品种，具有降气、消痰、行气、止呕功效，用于治疗风寒咳
嗽、痰饮蓄结、胸膈痞满、喘咳痰多、呕吐噫气、心下痞硬等症 [1 ]。目
前关于旋复花化学成分的报道较少，预试验发现旋复花中含有咖
啡酸，因此笔者采用高效液相色谱法测定旋复花中咖啡酸含量，结
果表明该法准确、专属，可用于旋复花的质量控制。
1 仪器与试药
Waters 高效液相色谱仪(美国)，Sartorius CP225D 型电子天
平(德国)。咖啡酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号为
110885 － 200102)，旋复花药材(市售品);乙腈为色谱纯，水为超纯
水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2．1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱:Kromasil C18柱(200 mm ×4． 6 mm，5μm); 流动相:乙腈－
0． 1%磷酸溶液(10 ∶ 90);流速:1． 0 mL /min; 检测波长:320 nm; 柱
温:35 ℃; 进样量:20 μL。理论板数按咖啡酸峰计算应不低于
2 000。在此色谱条件下，咖啡酸与相邻峰的分离度良好，溶剂对测
定无干扰(图 1)。
2．2 溶液制备
精密称取咖啡酸对照品适量，用甲醇配制成 108． 6 μg /mL的
对照品贮备液，精密量取 5 mL对照品贮备液，置 25 mL量瓶中，用
甲醇定容，摇匀后作为对照品溶液(21． 72 μg /mL)。精密称取 1 g
旋复花粉末，置具塞锥形瓶中，精密加入 50 mL 50%乙醇，称定质
量，水浴回流 1 h，放冷，再称定质量，用 50%乙醇补足减失的质量，
摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。
2．3 方法学考察
线性关系考察:精密量取对照品贮备液5，4，3 mL，对照品溶液
5，3，1 mL，分别置 25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，进样，记录峰
面积。以组分峰峰面积对其进样量进行线性回归，得回归方程 Y =
4． 293 × 106X + 4． 069 × 104，r = 0． 999 5( n = 6)。结果表明，咖啡酸进样
量在 0． 017 38 ～ 0． 434 4 μg范围内与组分峰峰面积线性关系良好。
精密度试验:精密吸取对照品溶液20 μL，重复进样 6 次，测得
咖啡酸峰面积的 RSD为 0． 3%，表明仪器的精密度良好。
稳定性试验:分别吸取上述对照品溶液和供试品溶液各20 μL，
每隔 2 h 测定 1 次，共测定 6 次，对照品溶液与供试品溶液中咖啡
酸峰面积的 RSD分别为 1． 9%和 2． 6%。结果表明，对照品溶液和
供试品溶液均在 8 h内稳定。
重复性试验:制备供试品溶液6 份，分别进样，记录色谱图，按
外标法计算含量。结果咖啡酸含量的 RSD为 1． 2%，表明方法重复
性良好。
加样回收试验: 取已知咖啡酸含量为0． 312 mg / g 的旋复花
粉末 0． 5 g 共 6 份，分别准确加入咖啡酸对照品贮备液 1． 0，1． 5，
2． 0 mL，按供试品溶液制备方法配制成低、中、高不同质量浓度的
溶液。进样 20 μL，记录色谱图，计算回收率，结果见表 1。
2．4 样品含量测定
取旋复花粉末，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，进样
测定。以外标法计算样品中的咖啡酸含量，结果 4 批旋复花药材的
1
t / min
1． 00 6． 00 11． 00 16． 00 21． 00
1
t / min
1． 00 6． 00 11． 00 16． 00 21． 00
A
B
t / min
C
1． 00 6． 00 11． 00 16． 00 21． 00
药物研究
中国药业 China Pharmaceuticals
2010年第 19卷第 21期
·14·
紫外分光光度法测定肿节风不同部位总黄酮的含量
励 娜，杨荣平，王宾豪，张小梅
(重庆市中药研究院，重庆 400065)
摘要:目的 建立肿节风中总黄酮含量测定的方法并检测其不同部位总黄酮的含量。方法 以芦丁为对照品，采用紫外分光光度法于 500 nm
波长处测定肿节风中总黄酮的含量。结果 芦丁质量浓度在 0． 351 5 ～ 3． 163 5 g / L范围内与吸光度线性关系良好( r = 0． 999 9)，平均回收
率为 98． 78%，RSD = 0． 51%(n = 9);其叶、茎、根中总黄酮含量分别为 3． 17%，2． 38%，2． 11%(n = 5)。结论 所用方法简便、准确、可靠，
可作为该药材中总黄酮含量检测的方法。
关键词:肿节风;不同部位;总黄酮;紫外分光光度法
中图分类号:R284． 1;R282． 71 文献标识码:A 文章编号:1006 － 4931 (2010 )21 － 0014 － 02
Determination of Total Flavonoids in Different Sections of Herba
Sarcandrae by UV Spectrophotometry
Li Na， Yang Rongping， Wang Binhao， Zhang Xiaomei
( Chongqing Academy of Chinese Materia Medica， Chongqing， China 400065 )
Abstract: Objective To develop a quantitative method for the determination of total flavonoids in different sections in Herba Sarcandrae．
Methods Using rutin as the reference substance，the total flavonoids in Herba Sarcandrae were determined by UV absorption at 500 nm．
Results The linearity of rutin was obtained within the range of 0． 351 5 － 3． 163 5 g / L ( r = 0． 999 9 ) ． The average recovery rate was
98． 78% and RSD was 0． 51% ( n = 9 ) ． The content of total flavonoids in Herba Sarcandrae from leaf was 3． 17% ，branch was 2． 38% and
root was 2． 11% ( n = 5 ) ． Conclusion The method is convenient，accurate and reliable，which can be used as the quality control method to
determine total flavonoids in Herba Sarcandrae．
Key words:Herba Sarcandrae; different sections; total flavonoids; UV spectrophotomety
咖啡酸含量分别为 0． 312，0． 258，0． 221，0． 405 mg / g。
3 讨论
以甲醇为溶剂，在 200 ～ 400 nm 波长范围内测定咖啡酸的紫
外吸收光谱，结果其最大吸收波长为 320 nm，故选择 320 nm 为检
测波长;实验中比较了乙腈－水、乙腈 －磷酸水溶液系统 [2 ]、甲醇 －
磷酸水溶液系统，采用乙腈 －磷酸水溶液系统时，咖啡酸的峰形与
分离度均良好，因此选择乙腈 －磷酸水溶液作为流动相;对供试品
溶液的提取方法、提取溶剂、提取时间也分别进行了考察，最终选
择 50%乙醇回流 1 h。
作者简介:李耘胜，女，主管药师，主要从事医院药学及中
药质量研究工作，本文通讯作者，(电话)0831 － 8255060(电子
信箱)liuyanyangbin@ 126． com。
参考文献:
[ 1 ] 江苏新医学院． 中药大辞典 (下册 ) [ M ] ． 上海: 上海科学技术出版社，
1977:2 216 － 2 218．
[ 2 ] 耿红梅 ． 高效液相色谱法测定欧亚旋覆花中绿原酸的含量 [ J ] ． 时珍
国医国药，2009，20(1):201 － 202．
(收稿日期:2009 － 11 － 01;修回日期:2010 － 03 － 02 )
肿节风 Sarcandra glabra ( Thunb． ) Nakai 又名九节茶、草珊瑚、
接骨木等，是金粟兰科草珊瑚属植物，在民间广泛用于接骨祛风、
消炎解毒，现代医学研究证明其具有抗菌消炎、抗癌和增强免疫功
能等功效，已制成针剂、片剂、膜剂、含漱剂、口服液等多种剂型。主
要用于各种常见炎症性疾病的治疗和癌症的辅助性治疗。肿节风
中所含黄酮类化合物是其主要有效成分 [ 1 ]。笔者根据黄酮类化合
物特性，以芦丁为对照品，采用紫外分光光度法对肿节风的叶、茎、
根中总黄酮进行了含量测定，现报道如下。
1 仪器与试药
UV － 1601 型紫外可见分光光度计、AEG － 45SM 型电子天平
(十万分之一，日本岛津);BP121 － S 型电子天平(万分之一，德国
Sartorius 公司);HH － 2 型恒温水浴箱、KQ － 250 型超声波清洗器
(巩义市英峪予华仪器厂)。肿节风(重庆红池药业有限公司提供，
本院生药鉴定室秦松云副研究员鉴定);芦丁对照品(中国药品生
物制品检定所，批号为 100080 － 200306);所有试剂均为分析纯(重
庆川东化工 ＜集团 ＞有限公司化学试剂厂)。
2 方法与结果
2．1 溶液制备
精密称取芦丁对照品 7． 03 mg，置 10 mL 量瓶中，加乙醇溶解
并稀释至刻度，置水浴上微热使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀，
即得质量浓度为 0． 703 g / L的对照品溶液。取肿节风药材各部位粉
末(40 目)约 5 g，精密称定，置烧瓶中，加 85%乙醇 100 mL，冷浸
30 min后，在水浴上加热回流提取 3 次，每次 1 h，滤过，合并滤液，
浓缩至 50 mL，作为供试品溶液。
2．2 测定波长选择 [ 2 ]
取对照品溶液和供试品溶液 0． 5 mL，分别置 25 mL量瓶中，加
5% NaNO2 1 mL，混匀，放置 6 min，加 10% Al (NO3 ) 3 1 mL，摇匀，放
置 6 min，加 NaOH 试液 10 mL，加 85% 乙醇至刻度，摇匀放置
15 min后，在 400 ～ 800 nm波长范围内扫描。结果二者在 500 nm波
长处有最大吸收，故选择 500 nm为测定波长。
2．3 方法学考察
标准曲线绘制:精密量取对照品溶液0． 5，1． 0，1． 5，2． 0，2． 5 mL，
分别置 25 mL量瓶中，加 5% NaNO2 1 mL，混匀，放置 6 min，加 10%
Al (NO3 ) 3 1 mL，摇匀，放置 6 min，加 NaOH 试液 10 mL，加 85%乙
醇至刻度，摇匀，放置 15 min 后，于 500 nm 波长处测定吸光度。以
芦丁质量浓度为横坐标(X)、吸光度值为纵坐标(Y)进行线性回归，
得回归方程 Y = 0． 496 2 X － 0． 026，r = 0． 999 9(n = 5)。结果表明，
芦丁质量浓度在 0． 351 5 ～ 3． 163 5 g / L范围内与吸光度呈良好的
线性关系。
精密度试验:精密吸取对照品溶液(0． 703 g / L)1 mL，置 25 mL
檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨
药物研究