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作 者 ： 李芳

期 刊 ：新疆农业大学 2004年 04期 页码： 52

关键词：雪莲；cDNA文库；EST；BLAST；

摘 要 ： 从新疆野生雪莲中提取总RNA，运用“SMART cDNA文库构建试剂盒”进行LD-PCR合成双链cDNA；产物经蛋白酶K消化，SfiI酶切，Chroma Spin-400分级分离，回收400bp以上片段。并与λTripLEx2载体连接，体外包装，产生未扩增文库，文库滴度为4.03×107 pfu/ml，重组率为93％。经扩增后滴度为1.75×109pfu/ml。随机挑选120个阳性菌落,碱裂解提取质粒DNA,经测序得到80个有效EST序列。GenBank网上进行BLAST同源性分析，有52个序列有同源,其中10个为未知功能蛋白；42个为已知功能蛋白。

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