全 文 ：2016 年 8 月 1 日 第 8 期
No． 8 1 August 2016
中 医 学 报
ACTA CHINESE MEDICINE
第 31 卷 总第 219 期
Vol． 31 Serial No． 219
* 基金项目:河南省重点科技攻关项目(082102150025)
四味雪莲花颗粒中大黄酚、大黄素含量测定方法*
李奎1，贾少谦2
1．河南省药品审评认证中心，河南 郑州 450004;2．河南中医药大学，河南 郑州 450046
摘要:目的:建立四味雪莲花颗粒中大黄酚、大黄素的含量测定的方法。方法:采用反相高效液相色谱法(reversed phase
high － performance liquid chromatography，ＲP － HPLC)测定四味雪莲花颗粒中大黄酚、大黄素的含量，采用 Hypersil － ODS 2
(250 mm × 4． 6 mm，5 μm)色谱柱，以甲醇 －(体积分数)0． 1%磷酸溶液(8:2)作为流动相，以 254 nm作为检测波长，以 1
mL·min －1作为流速。结果:根据色谱图，大黄酚进样量为 0． 004 52 ～ 0． 045 2 μg，该范围与峰面积呈明显的线性关系
(r = 0． 998，P ＜ 0． 05)，平均回收率为 99． 15%，ＲSD为 0． 85%。大黄素进样量为 0． 003 19 ～ 0． 031 90 μg，该范围与峰面积
呈明显的线性关系(r = 0． 997，P ＜ 0． 05)，平均回收率为 99． 78%，ＲSD 为 1． 13%。结论:反相高效液相色谱法用于测定
四味雪莲花颗粒中大黄酚、大黄素的含量中具有高度灵敏度、准确度与简便性，有助于控制四味雪莲花颗粒的质量。
文献引用:李奎，贾少谦．四味雪莲花颗粒中大黄酚、大黄素含量测定方法［J］．中医学报，2016，31(8):1153 － 1155．
关键词:藏药;四味雪莲花颗粒;含量测定;中药
DOI:10． 16368 / j． issn． 1674 － 8999． 2016． 08． 325
中图分类号:Ｒ284． 2 文献标志码:A 文章编号:1674 － 8999(2016)08 － 1153 － 03
Content Determination Method of Chrysophanol and Emodin in Siweixuelianhua Granule
LI Kui1，JIA Shaoqian2
1． Henan Provincial Drug Evaluation and Certification Center，Zhengzhou Henan China 450004;2． Henan University of
Chinese Medicine，Zhengzhou Henan China 450046
Abstract:Objective:To establish content determination method of chrysophanol and rheum emodin in Siweixuelianhua granule．
Methods:Content determination of chrysophanol and rheum emodin in Siweixuelianhua granule were used by reversed-phase high
performance liquid chromatography (ＲP-HPLC)method，Hypersil ODS-2 (250 mm × 4． 6 mm，5 μm)chromatographic column，
methanol － 0． 1% phosphoric acid solution(8:2)as mobile phase，254 nm was detection wavelength，and 1 mL·min －1 as veloc-
ity． Ｒesults:According to the chromatogram，rhubarb phenol sample quantity was 0． 004 52 － 0． 045 2 μg，the scope and peak area
was showed obvious linear relationship (r = 0． 998，P ＜ 0． 05)，the average recovery rate was 99． 15%，ＲSD was 0． 85% ． Emodin
sample quantity was 0． 003 19 － 0． 031 90 μg，the scope and peak area was showed obvious linear relationship (r = 0． 997，P ＜
0. 05) ，the average recovery rate was 99． 78%，ＲSD was 1． 13% ． Conclusion:ＲP-HPLC has highly sensitivity，accuracy and sim-
plicity for the content determination of chrysophanol and emodin in Siweixuelianhua granule，it helps to control the quality of Si-
weixuelianhua granule．
Ｒeference citation:LI Kui，JIA Shaoqian． Content Determination Method of Chrysophanol and Emodin in Siweixuelianhua Granule
［J］． Acta Chinese Medicine，2016，31(8) :1153 － 1155．
Key words:Tibetan medicine;Siweixuelianhua granule;content determination;Chinese medicine
原标准中含量测定方法为高效液相色谱法
(high-performance liquid chromatography，HPLC)测定
大黄素含量［1-2］。本研究采用反相高效液相色谱法
(reversed phase high-performance liquid chromatogra-
phy，ＲP-HPLC)测定四味雪莲花颗粒中大黄酚、大黄
素的含量，具有重复性好、稳定与简单等优势，利于
有效控制四味雪莲花颗粒的质量。
1 材料与方法
1． 1 材料与仪器 四味雪莲花颗粒样品与阴性参
照品(生产企业:青海金诃格萨尔王藏药制药有限
公司，批准文号:国药准字 Z20026253，规格:10 g ×
10 袋)，样品批号分别为 081101、081102、081103、
081104、081105、081106。大黄酚对照品(110796-
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200412)用于含量测定，由中国药品生物制品检定
所提供，大黄素对照品 (110756-200110)用于含量
测定，由中国药品生物制品检定所提供，Agilent1100
反相高效液相色谱仪(美国 Agilent 公司)，HP 化学
工作站(美国 Agilent 公司)，Agilent G1314 VWD 紫
外检测器(美国 Agilent 公司)，超声波清洗器
(B2500s MT，上海必能信超声波清洗仪有限公司)，
电子天平(Sartorius BT224S，北京赛多力斯仪器公
司;METTLEＲ PB1502-S，瑞士 METTLEＲ 公司)，重
蒸馏水，甲醇为色谱纯，三氯甲烷和其余试剂均为分
析纯。
1． 2 实验方法 采用反相高效液相色谱法(re-
versed phase high-performance liquid chromatography，
ＲP-HPLC)法测定四味雪莲花颗粒中大黄酚、大黄
素的含量。
1． 2． 1 色谱条件 采用依利特 Hypersil-ODS 2(250
mm ×4． 6 mm，粒径 5 μm)色谱柱，以室温作为色谱
柱柱温，以甲醇 －(体积分数)0． 1%磷酸溶液(8∶
2)作为流动相，以 254 nm作为检测波长，以 1 mL·
min －1作为流速。理论板数按大黄酚峰值或大黄素
峰值计算，理论板数范围为 3 000 ～ 10 000。在上述
色谱条件下，采集四味雪莲花颗粒色谱图，大黄酚参
照品色谱图，大黄素参照品色谱图，其中大黄酚参照
品保留时间约为 11． 5 min，大黄素参照品保留时间
约为 8． 6 min。
1． 2． 2 制备样品溶液 取四味雪莲花颗粒样品装
量差异下内容物 0． 5 g左右，精密称量，置入锥形瓶
(含具塞)，精密加入 25 mL甲醇，称质量，加热回流
45 min，冷却，称质量，采用甲醇补足至 0． 5 g，混匀，
过滤。精密量取续滤液 10 mL，置入 100 mL锥形瓶
中，去溶剂，加入 10 mL 体积分数 8%盐酸溶液，超
声波清洗器(120 W，50 Hz)处理 2 min，加入 10 mL
三氯甲烷，加热回流 1 h，冷却，置入分液漏斗内，采
用少量三氯甲烷洗涤锥形瓶，并将少量三氯甲烷置
入分液漏斗内，分取三氯甲烷层，10 mL 三氯甲烷重
复提取盐酸液 3 次，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂
至干，甲醇溶解残渣，置入 10 mL 容量瓶内，加甲醇
至刻度，混匀，过滤，取续滤液作为样品溶液。
1． 2． 3 制备阴性对照品溶液 对照中药成分(红
景天、雪莲花、大黄、蕨麻与蔗糖等)，去大黄，参照
制备工艺要求制备药剂(不含大黄)，参照 1． 2． 2 项
下方法制备阴性参照品溶液。
1． 2． 4 制备对照品混合溶液 精密称定大黄酚对
照品 27． 55 mg置入 250 mL容量瓶内，混匀;精密称
定大黄素对照品 9． 93 mg置入 250 mL容量瓶内，加
入甲醇溶液稀释至刻度，混匀;精密称定上述大黄酚
对照品溶液 2 mL，大黄素对照品溶液 4 mL置入 100
mL量瓶内，加入甲醇稀释至刻度，混匀后可得对照
品混合溶液，即大黄酚对照品(2． 204 mg·L －1)，大
黄素对照品(1． 588 mg·L －1)。
1． 2． 5 采集色谱图 在 1． 2． 1 项下色谱条件下，精
密吸取样品溶液、阴性参照品溶液、大黄酚参照品溶
液、大黄素参照品溶液各 10 μL，加入色谱仪。样品
色谱图与大黄酚参照品色谱图相应保留时间上有相
同的色谱峰，样品色谱图与大黄素参照品色谱图相
应保留时间上有相同的色谱峰，而样品色谱图与阴
性参照品色谱图相应保留时间上则无相同的色谱峰
干扰，见图 1 －图 3。
图 1 样品 ＲP-HPLC色谱图
图 2 阴性对照品 ＲP-HPLC色谱图
图 3 对照品 ＲP-HPLC色谱图
1． 3 方法学考察
1． 3． 1 线性实验［3］ 精密称定对照品混合溶液 2
μL、4 μL、8 μL、12 μL、16 μL、20 μL，在 1． 2． 1 项下
色谱条件下，加入色谱仪，以参照品溶液进样量
(μL)为 X坐标，以峰面积积分为 Y 坐标，绘制标准
曲线，计算回归方程。
1． 3． 2 加样回收率实验［4］ 精密称定大黄酚对照
品 4． 28 mg置入 250 mL容量瓶中，甲醇溶解并稀释
至刻度，配备大黄酚 0． 017 1 g·L －1，大黄素0． 010 2
g·L －1的对照品混合溶液，取四味雪莲花颗粒样品
0． 25 g，9 份，置入锥形瓶中，分别精密称定对照品混
合溶液 1 mL、1． 5 mL、2． 5mL各 3 份，参照 1． 2． 2 项
下制备样品溶液方法制备溶液，在 1． 2． 1 项下色谱
条件下测定大黄酚、大黄素含量，计算回收率。
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1． 3． 3 重现性实验［5］ 制备样品溶液 5 份，分别进
样 10 μL，在 1． 2． 1 项下色谱条件下，加入色谱仪，
测定峰面积，以峰面积计算 ＲSD。
1． 3． 4 稳定性实验［6］ 取样品溶液，在 1． 2． 1 项下
色谱条件下，分别于 0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h进样
10 μL，测定峰面积，以峰面积计算 ＲSD。
1． 3． 5 精密性实验［7］ 取大黄酚对照品溶液
(2. 204 mg· L －1)与大黄素对照品溶液(1． 588
mg·L －1)，进样 10 μL 连续 5 次，在 1． 2． 1 项下色
谱条件下，加入色谱仪，测定峰面积，以峰面积计算
ＲSD。
2 结果
2． 1 线性关系 根据标准曲线，大黄酚 Y =
11. 825X －0． 942，r = 0． 998，P ＜ 0． 05，大黄酚进样量
为 0． 004 52 ～ 0． 045 2 μg，该范围与峰面积呈明显
的线性关系。根据标准曲线，大黄酚 Y = 6． 081X －
0． 103，r =0． 997，P ＜0． 05，大黄酚进样量为 0． 003 19 ～
0． 031 9 μg，该范围与峰面积呈明显的线性关系。
2． 2 加样回收率实验 大黄酚平均回收率为
99. 15%，ＲSD 为 0． 85%;大黄素平均回收率为
99. 78%，ＲSD 为 1． 13%。提示 ＲP-HPLC 法加样回
收性良好。
2． 3 重现性实验 大黄酚 ＲSD = 1． 5%，大黄素
ＲSD =1． 7%提示 ＲP-HPLC法重现性良好。
2． 4 稳定性实验 大黄酚 ＲSD = 1． 4%，大黄素
ＲSD =3． 1%提示样品溶液在 12 h内稳定性良好。
2． 5 精密性实验 大黄酚 ＲSD = 0． 9%，大黄素
ＲSD =0． 3%提示 ＲP-HPLC法精密性良好。
3 讨论
四味雪莲花颗粒主要由红景天、雪莲花、大黄、
蕨麻与蔗糖等中药成分组成［8-9］。四味雪莲花颗粒
具有温经活血、除脂化浊、调节气血与化瘀降脂等功
效［10］。中医主要用于高血压、高脂血症与习惯性便
秘的治疗中。藏医主要用于功能失调、三大因素平
衡紊乱的治疗［11］。四味雪莲花颗粒收载于《国家中
成药标准汇编》(中成药地方标准上升国家标准部
分内科心系分册)。根据《中华人民共和国药典》关
于大黄药材含量测定方法，其主要选用 254 nm检测
波长，样品峰值分离度较佳，且对阴性参照品无明显
干扰。但参照《中华人民共和国药典》［12］关于大黄
药材含量测定方法测定藏药四味雪莲花颗粒样品，
色谱峰峰形与分离度并不合理，后改用甲醇 －(体
积分数)0． 1%磷酸溶液(8∶2)作为流动相，20 min
内形峰，且色谱峰分离度良好。
本实验通过比较回流 30 min、45 min、60 min、75
min与超声 30 min、45 min、60 min、75 min提取四味
雪莲花颗粒中的大黄酚与大黄素含量，发现超声提
取样品含量明显高于回流样品含量。由于超声 45
min、60 min、75 min与超声 30 min 在提取四味雪莲
花颗粒中的大黄酚与大黄素含量中的差异无显著
性［13-14］。因此，本实验采用超声提取样品 30 min 作
为本次样品的主要提取手段。经色谱图分析显示，
ＲP-HPLC法具有良好的加样回收性、重现性与精密
性。同时，四味雪莲花颗粒样品溶液在 12h 内具有
良好的稳定性。
综上所述，反相高效液相色谱法用于测定四味
雪莲花颗粒中大黄酚、大黄素的含量中具有高度灵
敏度、准确度与简便性，有助于控制四味雪莲花颗粒
的质量。
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收稿日期:2016 － 04 － 14
作者简介:李奎(1961 －)，男，河南郑州人，理学学士，副高
级工程师，主要从事中药研究和中药临床应用工作。
编辑:纪彬
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