全 文 ：1 99 5年 第 7卷 第 l期 化 学 研 究 与 应 用伪 em ia c ls c Ra o re ha n dA p Pi la c ti o n V心1
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7 N
o
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1 1 99 5
西藏雪莲花中总黄酮含量测定研究
庞志功 汪宝琪 杨 云
(西安医科大学药学系 1 71 00 6)
关键词 ;日一C D,西藏雪莲花 ,总黄酮
西藏雪莲花 (as us 盯 ae itr da o ylt a eS h 一 iD p ) , 又名三指雪莲 , 为菊科青木香属多年生植
物 ,分布在西藏海拔 4 0 0 0m 以上的高山上 。 每年 6一 8 月开花时采集 ,全株晒干入药〔 , ’ 。
对于雪莲的成分及总黄酮的测定 , 国内外学者都作了一定的研究比 ’ , ` , ,但用 日一环糊精
(日一① )单分子胶束荧光法进行总黄酮的测定尚属一种新的方法 . 本文采用 日一cD 为单分子胶 束在优化的实验条件下进行测定其最低检测限为 7 . 26 x 1 0一 1 0 9 /而 , 线性范 围
2 x 1 0一“ ~ 8 x 1 0一 79 /m l
,平均回收率 9 5 . 1 3% 。
实验部分
一 、 仪器 、材料
RF 一 5 4 0 型荧光分光光度计 (日本岛津 ) ; 7 52 可见紫外分光光度计 (上海第三分析仪器
厂 ) ; s K一 1型快速混匀器 (江苏国华仪器厂 ) 。
日一环糊精 (苏州味精厂 ) ,尿素 , 95 % 乙醉等 。 芦丁对照品 (中国药品生物制品检定所 ) 。
西藏雪莲由中共西藏自治区党委办公厅周宽厚同志在西藏定日县海拔 4 5 0 0m 的山地
采集 ,经我系生药教研室吕居娴教授鉴定 。
本文所用试剂均为分析纯或优级纯 ,所用水为去离子重蒸水 。
二 、 实验方法
1
. 前处理 : 按随机取样方法 ,精称在 70 一 80 ℃烘至恒重的雪莲粉未 0 . 5 0 2 59 ,用 70 %的
乙醇浸泡 72 h ,过滤 、洗涤定容在 25 m l 的量瓶中 ,用微量注射器量取 20 ml 雪莲浸泡液 , 在聚
酞胺薄膜上点样 ,并用芦丁对照品溶液点样对照 , 以甲醇— 醋酸— 水 ( 1 8 : 1 : 1) 为展开剂 ,上行展开 ,待展开剂上行至 1sc m 时 ,并立即喷洒 0 . l mo l/ L 的 1A 0 。 溶液显色 ,剪取与对
照品 R , (0 . 5 9) 相等的斑点 ,用乙醇浸泡 、溶解 、 洗涤 ,并定容于 1 0而 量瓶中待测 。
2
. 上机测定 : 在 25 ml 量瓶中加人一定量的系列标准溶液或样品液 lml ,再加 汗一仁D 溶
液 3而 , 加适量 70 %乙醇稀释 , 在快速混匀器上振荡 10 而 n ,再用 70 %乙醇稀释至刻度 , 混
匀 ,静置片刻后 , 在 凡二一 3 2 o n m 、 凡。 ~ 4 2 On m 的条件下进行荧光测定 , 以荧光强度对浓度作
图 ,绘制工作曲线 ,求取样品中总黄酮的含量 。
三 、 结果和回收
1
. 测定结果 : 用本法对 4 个平行样品测定结果和用紫外光度法测定结果对照见表 1 。
本文于 19 93 年 4 月 13 日收到
1 0 2
表 1测定结果
本 法 紫 外 法样品 含量 (%)平均含量 (%) c v%含量 (%)平均含量 (%) c v写
l
。
3 13
21
.
3 5 1
3 1
.
43 0
1 4
.
3 4 0
1
.
29 0
1
.
3 5 3
1
.
3 5 1 2
.
7 91
.
1 4 01
.
3 45 3
.
7
1
.
3 25
2
.回收试验 :按标准加入法测得平均回收率为 5 9 .3 1 % (n ~) 4
四 、讨 论
1
.激发波长和发射波长的选择 :经 R F一5 4 0型荧光分光光度计扫描 ,芦丁的激发波长
为 320 nr ,发射波长为 42 0 ln ,加入 日一 { D 后激发和发射波长无红移 、 紫移现象 。为了考查溶
剂拉曼光的影响 ,根据文献淘在不同汞射线照射下数种溶剂的拉曼光的波长 ,见表 2 。
表 2 在不同汞射线照射下数种主要;容剂的拉曼光波长
激 发 波 长 (nr )溶剂
2 4 8 3 1 3 3 6 5 4 0 5 4 36
水 2 7 1 3 50 4 1 6 469 5 1 1
乙醇 2 6 7 3 4 4 4 0 9 4 5 9 5 0 0
四氯化碳 — 3 2 0 3 7 5 4 1 8 4 5 0氯 仿 — 3 4 6 4 1 0 4 6 1 5 0 2
本文使用的激发波长为 320 nr 与 31 3n m 激发波长相近 , 其拉曼光谱应为 3 4 mn 和
3 5 0 n m
, 而本文的发射波长为 42 Oln ,显然在这种条件下无拉曼光的干扰 。
2
. 尿素对 日一DC 的增溶作用 : 由于 日一DC 在水中的溶解度较小 ,仅为 1% , 当使用
峨. Om of / L 的尿素溶液溶解 日一DC 时 ,经加热助溶过滤 ,可以得到 5%的日一CD 溶液 ,用此溶
液与 1%的 日一DC 榕液进行对照实验表明 ,荧光强度可以增加 2~ 3 倍 。
3
. 测定介质的选择 :本文曾选择了 Na A c 一HA C 、 柠檬酸钠一盆酸 、 硼砂一盐酸等不同
PH 值的缓冲体系 ,结果表明其荧光强度基本不变 ,为测定简便 ,本文选用其自身介质 。
4
. 日一cD 加入体积的选择 :本文在同一条件下先后加入 0
.
5~ 4m毋一DC 溶液 , 实验结果
表明 ,在实验条件相同的条件下 ,加入 3而日一 C D 具有最大的荧光强度 .
5
. 振荡时间的选择 :在同一条件下本文分别在 5~ 20 而 n 内进行振荡实验 , 实验表明以
1 0 3
振荡 1 0 ~1 5而 n荧光值最大且稳定 。 在快速混匀器上进行旋涡振荡的过程是客体分子 (黄酮
类分子 )嵌入主体分子腔的过程 , 时问过短 ,未能完全嵌入 , 荧光值不高 , 时间过长 ,日一 c D 包
含物可能破裂 , 荧光值也不高 , 只有当客体分子完全嵌入到 日一。 空腔内 ,而且形成动态平
衡时 ,才有最大的荧光值 。
6
. 工作曲线 : 本文研究了 1 0一 6一 1 0一 , g / m .l 个数量级 内的线性关 系 , 实验表 明在
1 0一 , ~ 1 0一乍 /而 两个数量级呈良好的线性关系 。 1 0一 , g / ml 数量级的回归方程为 I ; 一 0 . 91C +
1 8
.
7 (灵敏度为 2 )相关系数 r = 0 . 9 9 8 8 。 1 0一 ` g / m l 数量级的回归方程为 I F = 1 . 3 2 5e + 1 7 . 7
(灵敏度为 3 ) ,相关系数 r 一 0 . 9 9 1 9 。
参 考 文 献
[ lj 西藏自治区卫生局编 ,西藏常用中草药 , P . 35 1 ,西藏人民出版社 , 19 71 年
〔2」 贾忠健等 ,高等学校化学学报 , 1 9 8 3 , 4 ( 5 ) , 581 .
[ 3〕 赵春荣等 ,西北药学杂志 , x 9 5 5 , 3 ( 3 ) , 2 2 .
[ 4〕 李瑜等 ,高等学校化学学1及, 一9 5 , , x o ( 9 ) , 9 09 .
〔5」 陈国珍等编 ,荧光分析法 , P . 10 4 ,科学出版社 ,第二版 ,北京 , 199 0年
S T U D Y O N T H E D E T E R人41N A T IO N O F T O T A L C O N T E N T
F L A V O N O ID S IN S A U S S U R E A T R I D A C T Y L A
P a n g Z h i g o n g W
a n g B a o q i Y a n g Y u n
( cD 因 r tm e n t o f Ph a r am e y , X ia n M曲 ca l U n i v e r s i ry , 7 1 0 0 6 1 )
A B S T R A C T
aS us
u r e a t r i da e t y la e o n ta i n e d sc v e r a l k i n ds
o f f l a v o n o ids
.
U s i n g r u t i n w l五e h op s se se
f la v o n o ids
o r iig n s t r u e t u r e as e o n t r a s t
, a n d 日一 C D t o i m P r o v e sc n s i ti v i ty a n d e o n c e n s t r a t io n , w e
de et r m i n ed t he to at l o f e o n t e n t f la v o n o ids i n sa u s u r ea t r id a e t y l a w i t h sa t is fa e ot r y r es u l st
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cK
y w o r ds
: 日一 C D , sa us u r e a t r id a e ty la , to ta l f la v o n o ids
.
(责任编辑 李方 )
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