全 文 ：国际药学研究杂志 2012 年 2 月 第 39 卷 第 1 期 J Int Pharm Res， Vol.39， No.1， February， 2012
反相高效液相色谱法定量分析旋覆花中 1, 5-二-O-咖啡酰奎尼酸
王艳敏 1, 2，于能江 1，赵 骏 2,赵毅民 1
旋覆花为 2010 年版《中国药典》收载的常用
中药，为菊科（Compositae）旋覆花属植物旋覆花
（Inula japonica Thunb.）的干燥头状花序，具有降
气、消痰、行水、止呕的功效［1］。旋覆花中含有旋覆
花素、旋覆花内酯、槲皮素、异槲皮素、咖啡酸、绿
原酸、菊糖及蒲公英甾醇等物质［2-3］。 含量测定是
中药材质量控制中的一个重要手段，文献虽已报
道了旋覆花中旋覆花内酯 ［4］、黄酮类成分 ［5］、咖啡
酸 ［6］ 等成分的含量测定方法， 但 2005 年版和
2010年版药典均未收载旋覆花含量测定项，一个
主要原因可能为旋覆花中高含量有效成分和指
标性成分一直不十分清楚。 本文作者从旋覆花植
物中分得了一个含量可达 1.5 %左右的双咖啡酰
奎尼酸化合物 1, 5-二-O-咖啡酰奎尼酸，含量远高
于旋覆花内酯等化合物，HPLC 指纹图谱初步分
析也表明其是旋覆花中主要的化学成分，因而可
指征 1, 5-二-O-咖啡酰奎尼酸为旋覆花的指标性
成分。且文献报道 1, 5-二-O-咖啡酰奎尼酸有较强
的抗氧化 ［7］、抗炎 ［8］、抗微生物 ［9］和抑制 HIV-1 整
合酶［10］、抑制黄嘌呤氧化酶 ［11］，抑制甘油三酯增高［12］
［摘要］ 目的 建立旋覆花药材中 1，5-二-O-咖啡酰奎尼酸含量的 HPLC 测定方法。 方法 色谱柱为 Agilent
Eclipse XDB-C18色谱柱（4.6 mm × 250 mm, 5 μm）；流动相甲醇-0.1 %冰醋酸水溶液 〔32∶ 68 （0 min）~32∶ 68 ( 15 min )~36∶ 64 (
40 min )〕梯度洗脱；检测波长 320 nm；柱温 30℃；流速 1.0 ml/min。 结果 1，5-二-O-咖啡酰奎尼酸在 0.62～12.48 μg（r =
0.999 9）具有良好的线性；平均加样回收率（n = 6）为 100.9%（RSD = 1.13%），方法精密度、稳定性、重复性好。10批药材中
1，5-二-O-双咖啡酰奎尼酸的含量范围为 1.03%～2.09%，平均含量为 1.53%。 结论 该定量分析方法可用于旋覆花药材
的质量控制。
［关键词］ 旋覆花；1，5-二-O-咖啡酰奎尼酸；反相高效液相色谱法；定量分析
［中图分类号］ R917；R284 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1674-0440（2012）01-0045-04
Quantitative analysis of 1, 5-di-O-caffeoylquinic acid in Inula japonica
Thunb. by RP-HPLC
WANG Yan-min1,2， YU Neng-jiang1， ZHAO Jun2， ZHAO Yi-min1
（1. Institute of Pharmacology and Toxicology, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100850, China；
2. Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300193, China）
［Abstract］ Objective A method was established for quantitative analysis of 1, 5-di-O-caffeoylquinic acid in Inula japonica
Thunb. by RP-HPLC. Methods The analysis was performed on an Agilent Eclipse XDB-C18 analytical column ( 4.6 mm × 250
mm，5 μm ) with the mobile phase of methanol and water （0.1 % CH3COOH）in gradient mode 〔 32∶68 （0min）-32∶68 （15min）-
36 ∶ 64 ( 40 min ) 〕. And the flow rate was 1.0 ml/min with the detection wavelength of 320 nm as well as the column temperature at
30 ℃. Results The linear equation was determined as Y=2581.50 X-326.15 (r= 0.999 9). And the average recovery and RSD
were 100.9 % and 1.13 %. The precision, reproducibility and stability were all consistent with the request of quantitative analysis.
The content range of 1, 5-di-O-caffeoylquinic acid in 10 samples was determined as 1.03 %-2.09 %, average content was 1.53 %.
Conclusion The established method is good for the quality control of Inula japonica Thunb.
［Key words］ Inula japonica Thunb.; 1, 5-di-O-caffeoylquinic acid; RP-HPLC; quantitative analysis
基金项目：国家十一五重大专项“重大新药创制”课题（2009ZX09301-002）
作者简介：王艳敏，女，在读硕士研究生，研究方向：主要从事中药活性成分及质量评价研究，Tel：010-66874617， E-mail： wangyanmin0635@163.com
作者单位：1. 100850 北京，军事医学科学院毒物药物研究所（王艳敏，于能江，赵毅民）；2.300193 天津，天津中医药大学（王艳敏，赵 骏）
通讯作者：于能江，副研究员，研究方向：中药新药和天然产物活性成分研究，Tel:010-66874617， E-mail: nengjiang-yu@163.com
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DOI:10.13220/j.cnki.jipr.2012.01.006
国际药学研究杂志 2012 年 2 月 第 39 卷 第 1 期 J Int Pharm Res， Vol.39， No.1， February， 2012
等作用。 所以对 1,5-二-O-咖啡酰奎尼酸进行含量
测定对旋覆花的质量控制具有重要的意义。 本文
采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）建立了旋
覆花中 1,5-二-O-咖啡酰奎尼酸的含量测定方法,
并对 10 批不同产地或来源的旋覆花药材中 1,5-
二-O-咖啡酰奎尼酸的含量进行了考察。
1 仪器与材料
API 3000 三重四极杆串联质谱仪，美国应用
生物系统公司 ，Analyst 1. 4 数据处理系统 ；
Agilent-1200高效液相色谱仪， 美国 Agilent公司；
BT25S 型十万分之一分析天平、BSA124S 型万分
之一分析天平，德国 Sartorius公司；FW100型高速
万能粉碎机，天津市泰斯特仪器有限公司；CH-300
型超声波清洗机，北京创新德超声电子研究所。
色谱纯甲醇，Fisher公司；娃哈哈纯净水，杭州
娃哈哈集团有限公司；其他化学试剂均为分析纯。
1,5-二-O-咖啡酰奎尼酸（纯度 98.64%），由本
课题组分离纯化得到并经过分析质谱、1H NMR、
13C NMR 数据鉴定结果，薄层检测无明显杂质，1H
NMR 中未见杂质信号，HPLC 峰面积归一化法测
定纯度。
不同产地和来源的旋覆花药材 10 批， 经由
军事医学科学院毒物药物研究所马其云高级工
程师鉴定为菊科植物旋覆花 Inula japonica Thunb.
的干燥头状花序。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件
Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱 (4.6 mm × 250
mm, 5μm)， 流动相甲醇-0.1 %冰醋酸水溶液梯度
洗脱体系〔32 ∶ 68 （0 min）-32 ∶ 68 （15 min）-36 ∶ 64
（40min）〕；检测波长 320nm,柱温 30℃；流速 1.0ml/
min；进样量 5μl；外标法定量。 阴性对照、对照品
及旋覆花样品 HPLC色谱图见图 1。
2. 2 对照品溶液的制备
取 1, 5-二-O-咖啡酰奎尼酸对照品适量，精密
称定，用 70 %甲醇制成每 1 ml含 624 μg的溶液，
即得对照品溶液。
2. 3 供试品溶液的制备
取旋覆花药材粉末（过 40目筛）约 200mg，精
密称定，置 50ml锥形瓶中，精密加入 70%甲醇溶
液 15 ml，浸泡过夜，称重，超声提取 30 min，放冷，
再称定重量，甲醇补足减失的重量，摇匀，经 0.45
μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
2. 4 方法专属性考察
按 2. 1 项下色谱条件对供试品进行 HPLC/
ESI-MS 分析，质谱条件为：电喷雾离子化源,负离
子检测(离子源喷射电压：-3800 V;离子源温度为
300℃)。HPLC/ESI-MS分析的总离子流图谱，选择
离子流图谱和目标色谱峰的质谱图见图 2。 结果
表明，总离子流图谱和选择离子流图谱中的最高
色谱峰和对照品 HPLC 的保留时间基本一致，而
且该色谱峰的质谱图特征与对照品的质谱图一
致，主要离子为 515.2 ［M-H］-、353.3 ［M-H-162］-、
191.0 ［M-H-162-162］-。 表明该方法具有良好的
专属性。
2. 5 线性关系考察
按 2. 1 项下色谱条件精密吸取 2. 2 所述对
照品溶液 1、2、4 、6 、8 、10 和 20 μl 进样分析，以
对照品进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，
计算得到回归方程为 Y=2581.50 X-326.15，r=
0.999 9，线性范围 0.62 ～12.48 μg。
2. 6 精密度实验
精密吸取对照品溶液 5 μl，按上述色谱条件
重复进样 5 次 ， 记录峰面积为 7487.2、7492.7、
7504.3、7494.4 和 7501.6，各次测定结果的平均值
为 7496.0，RSD为 0.09 %，表明仪器精密度良好。
图 1 阴性对照（A）、对照品（B）和旋覆花提取物（C）的 HPLC 谱图
Fig. 1 HPLCchromatogramsof negative sample (A ), reference substance (B ) and extract of Inula japonicaThunb .(C ) *.1，5-
di-O-caffeoylquinic acid
A B C
时间（min） 时间（min） 时间（min）
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2. 7 重复性实验
取同一批旋覆花药材粉末 6份， 每份约 200
mg，精密称定，分别按照 2. 3 项下方法制备供试
品溶液，在上述色谱条件下进样分析，记录峰面
积，计算含量。 1, 5-二-O-咖啡酰奎尼酸的含量分
别为 1.51 %、1.53 %、1.56 %、1.52 %、1.56 %和 1.
53 %，平均含量为 1.54 %，RSD 为 1.35 %，表明方
法重复性良好。
2. 8 稳定性实验
取同一供试品溶液，室温放置，分别在 0、3、
6、9、12和 15 h进样，测定 1，5-二-O-咖啡酰奎尼酸
的峰面积分别为 2401.3、2395.7、2400.7、2402.4、
2399.9和 2401.8，其平均值为 2400.3，RSD为0.10 %，
表明供试品溶液在常温下 15 h内保持稳定。
2. 9 回收率实验
称取已知测定成分含量的同一批旋覆花药材
粉末 6份，每份 100mg，精密称定，分别按各测定成
分含量约 80%、100%、120% 3种浓度加入适量对
照品（3种不同水平各 2份），按供试品溶液制备方
法操作进行含量测定， 计算平均回收率为 100.9%，
RSD为 1.13%，表明该方法准确度良好（表 1）。
2. 10 含量测定
分别称取不同产地和来源的旋覆花药材粉
末 200 mg，精密称定（每组平行称 3 份），按 2. 3
项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进
样，记录峰面积，外标法计算 1, 5-二-O-咖啡酰奎
尼酸的含量，各批样品中 1, 5-二-O-咖啡酰奎尼酸
的平均含量为 1.53 %，具体结果见表 2。
图 2 旋覆花提取物的 HPLC/(-)ESI-MS分析总离子流图谱（D）、选择离子流图谱（质量数 516.0~517.0）（E）、色谱峰（tR20.84 min）
质谱图（F）及对照品 1, 5-二-O-咖啡酰奎尼酸的质谱图（G）
Fig. 2 Total ionic chromatogram ( D ), selective ionic chromatogram ( 516.0 to 517.0 amu ) ( E ), mass spectrum of the peak at tR
20.84 min( F ) fromHPLC/(-)ESI-MS analysis of the sample of Inula japonica Thunb. extract and the mass spectrum of reference
compound 1, 5-di-O-caffeoylquinic acid ( G )
表 1 方法加样回收率测定结果
Tab. 1 The determined recovery of the method
实验编号
1
2
3
4
5
6
药材量（mg）
105.2
102.1
104.6
102.2
106.3
105.1
样品中含量（mg）
1.62
1.57
1.61
1.57
1.63
1.61
加入量（mg）
1.16
1.15
1.54
1.54
1.95
2.02
测得量（mg）
2.77
2.73
3.17
3.15
3.60
3.64
回收率（%）
99.1
100.9
101.3
102.6
101.0
100.5
时间（min）
m/z（amu）
时间（min）
m/z（amu）
D E
F G
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3 讨论
本研究对供试品溶液的制备条件进行了考
察，结果发现回流提取时间过长会导致 1, 5-二-O-
咖啡酰奎尼酸得率下降，表明 1, 5-二-O-咖啡酰奎
尼酸的热稳定性较差，因而本文采用了超声提取
方法。超声提取时间考察中提取时间在 30 min内
随时间的增加 1, 5-二-O-咖啡酰奎尼酸得率增加，
而 30~60 min内提取得率基本相同， 因而确定超
声提取时间为 30 min。提取溶剂考察中 50%甲醇
和 70%甲醇的提取得率基本相同，但明显高于甲
醇的提取得率，70 %甲醇提取物中的杂质含量可
能比 50%甲醇提取物稍低一些，因而采用了 70%
甲醇作为提取溶剂。
HPLC/DAD/ESI-MS 在线分析发现，旋覆花中
除高含量的 1, 5-二-O-咖啡酰奎尼酸外，还含有至
少 3 个含量相对较低的异构体， 其相对分子质
量、 紫外吸收光谱和 ESI-MS 裂解特征均与 1, 5-
二-O-咖啡酰奎尼酸一致，推测可能为两个咖啡酰
基连接在奎尼酸上不同位置的异构体。 因而，以
1, 5-二-O-咖啡酰奎尼酸为指标进行质量控制可
有效代表旋覆花中的咖啡酰奎尼酸类化合物。 咖
啡酰奎尼酸类化合物具有抗氧化、 治疗炎症、抑
制微生物和病毒活性、酶抑制作用、保肝、抗凝血
等多种生物活性［13］。因而本研究建立的 1, 5-二-O-
咖啡酰奎尼酸含量测定方法可作为旋覆花质量
控制的一个重要手段。
【 参 考 文 献 】
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［3］ Yu NJ, Zhao YM, Zhang YZ, et al. Japonicins A and B from the
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（收稿日期：2011-12-28 修回日期：2012-02-10）
表 2 10 批旋覆花样品中 1,5-二-O-咖啡酰奎尼酸的含量测定结果（n=3）
Tab. 2 The determined contents of 1, 5-di-O-caffeoylquinic acid in 10 samples of I. japonica Thunb ( n=3 )
编号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
产地
河北
河南
河南
河北
河北
江苏
河北
河南
河北
-
来 源
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北京四方中药饮片有限公司
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北京琪景饮片厂
北京市白塔寺药品经营分公司
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北京燕北饮片厂
北京市白塔寺药品经营分公司
河北安国药市
北京同仁堂药店
1, 5-二-O-咖啡酰奎尼酸含量（%）
1.32
1.77
1.04
1.54
1.03
1.44
2.09
1.85
1.63
1.54
48· ·