全 文 ：褐环粘盖牛肝菌液体发酵研究＊
薛振文1 , 2　应国华1 , 2　吕明亮1 ,2　李伶俐1 , 2　何小菲3
(1.浙江省丽水市林业科学研究院 , 丽水　323000;2.丽水市大山菇业研究开发有限公司 , 丽水　323000;
3.丽水市林业局 , 丽水　323000)
　　关键词　褐环粘盖牛肝菌;液体发酵;菌丝体;生物量
　　＊项目来源:浙江省科技项目 “菌根技术培育牛肝菌” 2007C22087、 省院合作项目 “牛肝菌菌根林营造技术研究与示范” 2006SY03、 丽
水市科技项目 “褐环粘盖牛肝菌人工栽培技术中试示范” LKjZB200702。
作者:薛振文 (1980—), 男 , 硕士研究生 , 主要从事菌根食用菌研究。E-mai l:xzw102@163.com。
丽水市白云山生态林场王益 , 缙云县括苍山林场田苏奎 , 缙云县大洋山林场郑泽仁 , 丽水学院高凤娟 , 参与了本项试验。
　　褐环粘盖牛肝菌 (Suillus luteus)是一种优良
的菌根食用菌 , 对油松具有很好的促生长作用[ 1] ,
在国内广泛分布 , 是我国出口创汇的野生食用菌之
一。丽水市林业科学研究院食用菌研究所从 2001
年开始承担市 、 省级多个牛肝菌科技研究项目 , 包
括褐环粘盖牛肝菌菌种分离[ 2] 、 液体培养 、 生态
学[ 3] 、野生促繁[ 4] 、 人工栽培技术[ 5] 等 。褐环粘盖
牛肝菌液体培养及菌剂制作是实现其人工栽培产业
化的基础 。现将液体培养研究报告如下 。
1　材料与方法
1.1　供试菌株　丽水市林业科学研究院食用菌研
究所保藏 。
1.2　培养基　配方:①ME培养基 , ②ME+辅料
100 g , ③ME+辅料 50 g , ④ME+辅料25 g , ⑤ME
+悬浮剂 1 , ⑥ME+悬浮剂 2。
1.3　液体培养条件试验设置　母种设平板培养 6
天 、 10天 、 14天 、 18天 4个菌龄梯度。装液量设
150 mL 、 250 mL 、 350 mL、 450 mL 4个梯度。接种
量设 2 cm2 瓶 、 4 cm2 瓶 、 6 cm2 瓶 、 8 cm2 瓶 4 个
梯度 。接种块形态设整块与碎块 2个 。培养方法采
用静置培养 2天后摇床培养和直接摇床培养 2种 。
除试验特指外 , 培养条件均为 500 mL 三角瓶中分
装320 mL液体培养基 , 接种量为 2 cm2 瓶 , 25 ℃、
150 r min振荡培养 14天后处理 。
1.4　菌丝体生物量测定　用湿重法测定:取发酵液
过滤至不再有液体滴出 ,在分析天平上精确称重。
2　结果与分析
2.1　菌株液体培养的生长规律　以时间为横坐标 ,
菌丝湿重为纵坐标作液体培养曲线图 (图 1)。
图 1　菌株生长曲线
　　将图 1分为 3个生长期:①缓慢生长期 (6 ～
10天), 接种后 , 平板中的菌丝体对新的液体环境
需要逐渐适应 , 生长缓慢。缓慢生长期的长短与菌
种的菌龄 、 长势 、 培养基的理化性质和培养条件有
关 。②快速生长期 (10 ～ 14天)。缓慢生长期后菌
丝体已适应了新的培养环境 , 进入快速生长期 。液
体培养过程中菌株的生长包括菌球体积的增大和数
量的增多2个方面 。过大的菌球里面的菌丝活力减
弱 , 因而要适当控制摇床的转速 , 促使菌球的数量
增多。 ③停滞生长期 (14 ～ 22 天)。快速生长期
后 , 培养基中养分耗尽 、 氧气缺乏和代谢产物积
累 , 使菌丝细胞不能再进行正常的生长而进入停滞
阶段。这一时期 , 菌丝量基本不增加 , 颜色逐渐变
黄 , 菌球开始老化 。
　　Zhejiang Shiyongjun 2010 , 18(3):25 ～ 27
2.2　不同试验处理对菌丝生长的影响　菌丝量是
衡量试验结果好坏的主要指标之一 , 对不同试验结
果采用DPS统计软件进行数据处理 , 结果见表 1。
　表 1　不同培养条件下褐环粘盖牛肝菌菌丝生长量
编号 与处 理 菌丝湿重/(g 瓶)
差异显著性
5% 1%
培养基不同配方
1 ME 13.5900 d CD
2 ME+辅料 100 g 16.6333 b B
3 ME+辅料 50 g 15.4233 bc BC
4 ME+辅料 25 g 14.6367 cd BCD
5 ME+悬浮剂 1 36.3700 a A
6 ME+悬浮剂 2 13.2567 d D
母种不同菌龄
7 6天 14.0933 b B
8 10天 17.4133 a A
9 14天 15.0333 b B
10 18天 11.6333 c C
接种量
11 2 cm2 瓶 18.1567 c B
12 4 cm2 瓶 21.4767 b A
13 6 cm2 瓶 22.0567 ab A
14 8 cm2 瓶 22.9533 a A
接种块形态
15 碎块 16.0300 a A
16 整块 17.4100 a A
培养方法
17 静置培养 2天后摇床培养 19.7067 a A
18 直接摇床培养 13.6867 b B
装液量
19 150 mL 瓶 6.6233 c C
20 250 mL 瓶 11.8700 b B
21 350 mL 瓶 16.7600 a A
22 450 mL 瓶 7.5600 c C
　　(1)不同培养基对菌丝生长的影响。由表 1
可知 , 不同培养基的菌丝生长量差异达到极显著水
平 , 说明选择适宜的培养基对菌丝生长至关重要 。
处理 5与其他处理间的差异都达显著水平 , 按菌丝
体湿重由高到低排序为:处理 5>处理2>处理 3>
处理 4>处理1>处理 6。可见配方 5是褐环粘盖牛
肝菌的适宜培养基。
(2)母种菌龄对菌丝生长的影响 。从表 1看 ,
不同菌龄的母种的菌丝生长量有明显差异 , 其中处
理8与处理 9 、处理 7和处理 10间存在显著差异 。
按菌丝体湿重由高到低排序为:处理 8>处理 9>
处理 7>处理 10。表明选择 10天菌龄的母种进行
接种培养是较适宜的 。
(3)不同接种量对菌丝生长的影响。从表 1可
以看出 , 不同接种量的菌丝生长量按菌丝体湿重由
高到低排序为:处理 14>处理 13>处理 12>处理
11。处理14与处理 13 、 处理 13 与处理 12之间无
显著差异 , 处理 11与其他处理间的差异均达极显
著水平 。随着接种量的增加 , 菌丝量增大 , 但菌球
有衰老现象 。因此接种量宜选择 4 cm2 瓶。
(4)不同形态接种块对菌丝生长的影响 。不同
形态接种块对菌丝生长量的影响不大 (表 1)。但
接种整块省时省力 、效果较好 , 可供选用 。
(5)不同培养方法对菌丝生长的影响。试验结
果表明 , 两种不同培养方法对菌丝生长的影响较
大 , 差异达到极显著水平。菌丝体湿重:处理 17
>处理 18 (表 1), 表明采用先静置培养 2天后再
摇床培养的方法是可取的。
(6)不同装液量对菌丝生长的影响 。不同装液
量对菌丝量的影响较大 。按菌丝体湿重由高到低排
序为:处理 21>处理 20>处理 22>处理 19 , 其中
处理19与处理 22间无显著差异 , 其余各处理间差
异均为极显著 , 并以装液量 350 mL/瓶的菌丝产量
最高 (表1)。
3　结　论
褐环粘盖牛肝菌液体培养可分为 3个阶段:缓
慢生长期 (0 ～ 10 天)、 快速生长期 (10 ～ 14天)
和停滞生长期 (14 ～ 22天)。褐环粘盖牛肝菌液体
培养 14天后菌丝湿重达到 18.71 g , 菌球的活力较
强 , 而后进入停滞生长期 , 虽然菌丝量有所增加 ,
但菌球和沉积在壁上的菌丝体颜色逐渐变黄 , 说明
菌球开始老化 , 菌丝活力减弱。因此在液体培养
14 ～ 18天内收获 , 不仅菌球活性好 , 而且菌丝量
也较大 , 是最理想的收获阶段。
以配方ME+悬浮剂 1培养菌丝 , 菌丝量较大 ,
达 36.37 g 。母种菌龄为 10天的菌丝量大 。接种量
与菌丝生长量呈正相关;由于液体中营养成分是有
限的 , 不能容纳过多的菌丝体繁殖 , 所以接种量以
4 cm
2 瓶的培养效果最好 , 表现为菌球白色 , 活力
强 , 菌丝生长量较大。不同形态接种块对菌丝量的
影响不显著 。采用静置培养 2天后摇床培养的方法
培养效果较好 , 菌丝生长量大。褐环粘盖牛肝菌装
液量为 350 mL 瓶的培养效果较好 , 菌丝生长量较
大 。
·26· 　　2010年 第 18卷 第 3期
参考文献
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技术研究 [ J] .中国食用菌 , 2006 , 25 (4):18～ 21.
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究 [ J] .中国食用菌 , 2009 , 28 (5):14～ 15.
2009年我国食用菌产品出口全球的数量统计
商品名称 2008年出口 2009年出口 同比±%数量 kg 金额 美元 　单价 数量 kg 金额 美元 　单价 数量 金额 价格
蘑菇菌丝 9 890 583 4 299 758 0.435 11 752 221 6 742 852 0.574 19 57 32
伞菌属蘑菇 166 931 397 694 2.382 317 400 495 678 1.562 90 25 -34
鲜或冷藏的松茸 716 595 44 044 633 61.464 1 014 602 48 758 827 48.057 42 11 -22
鲜或冷藏的香菇 10 675 208 30 435 936 2.851 14 175 881 41 596 890 2.934 33 37 3
鲜或冷藏的金针菇 992 872 1 045 926 1.053 893 612 1 427 665 1.598 -10 36 52
鲜或冷藏的草菇 4 302 240 546 548 0.127 470 455 49 395 0.105 -89 -91 -17
鲜或冷藏的口蘑 104 530 43 858 0.420 247 024 107 867 0.437 136 146 4
鲜或冷藏的块菌 144 183 1 869 188 12.964 86 723 1 929 494 22.249 -40 3 72
鲜或冷藏的其他蘑菇 3 370 353 6 773 347 2.010 4 271 522 8 358 913 1.957 27 23 -3
冷冻松茸 565 238 8 201 377 14.510 693 740 9 204 985 13.269 23 12 -9
盐水小白蘑菇 14 744 343 22 019 473 1.493 8 013 207 10 628 598 1.326 -46 -52 -11
盐水的其他伞菌属蘑菇 17 102 580 29 411 505 1.720 9 571 275 13 750 471 1.437 -44 -53 -16
其他暂时保藏的伞菌属蘑菇 1 915 695 2 867 362 1.497 170 371 237 811 1.396 -91 -92 -7
盐水松茸 150 627 1 913 494 12.704 137 469 1 704 920 12.402 -9 -11 -2
盐水其他磨菇及块菌 13 047 516 25 503 521 1.955 6 772 889 17 500 799 2.584 -48 -31 32
其他暂时保藏的蘑菇及块菌 15 349 073 25 361 124 1.652 5 909 476 9 249 947 1.565 -61 -64 -5
干伞菌属蘑菇 321 606 8 372 708 26.034 338 086 5 436 966 16.082 5 -35 -38
干木耳 8 325 445 76 660 486 9.208 7 622 761 83 134 072 10.906 -8 8 18
干银耳 1 801 216 15 425 696 8.564 2 856 435 36 476 226 12.770 59 136 49
干香菇 14 271 771 131 127 026 9.188 21 805 804 277 000 838 12.703 53 111 38
干金针菇 13 418 68 521 5.107 6 620 46 640 7.045 -51 -32 38
干草菇 632 5 228 8.272 1 062 14 357 13.519 68 175 63
干口蘑 … … … 9 435 118 828 12.594 0 0 …
干牛肝菌 1 577 205 41 375 110 26.233 1 083 365 28 234 198 26.062 -31 -32 -1
未列名干蘑菇及块菌 2 303 158 45 895 623 19.927 1 630 969 27 823 823 17.060 -29 -39 -14
冬虫夏草 1 634 21 098 599 12 912.239 2 695 19 119 837 7 094.559 65 -9 -45
天麻 62 245 670 395 10.770 58 483 686 606 11.740 -6 2 9
茯苓 8 716 492 8 855 364 1.016 11 837 645 13 601 146 1.149 36 54 13
未列名主要用作药料的植物及其某部分 125 675 205 232 388 522 1.849 125 481 723 249 785 298 1.991 0 7 8
小白蘑菇 (洋蘑菇)罐头 336 332 414 422 239 312 1.255 229 314 596 246 313 549 1.074 -32 -42 -14
其他伞菌属蘑菇罐头 60 306 443 161 363 697 2.676 38 960 259 54 312 119 1.394 -35 -66 -48
其他非醋方法制作或保藏的伞菌属蘑菇 3 088 109 7 979 262 2.584 2 612 010 7 155 404 2.739 -15 -10 6
非醋方法制作或保藏的块菌 309 785 2 266 992 7.318 136 737 753 862 5.513 -56 -67 -25
其他蘑菇罐头 25 674 688 68 424 710 2.665 17 726 265 60 501 108 3.413 -31 -12 28
其他非醋方法制作或保藏的蘑菇 769 081 4 200 064 5.461 2 568 678 24 404 068 9.501 234 481 74
总计 682 789 114 1 453 152 059 2.128 528 551 495 1 306 664 057 2.472 -23 -10 16
　　注:资料来源于中国海关 , 由中国食品土畜进出口商会食用菌分会制作 , 版权所有 , 未经允许 , 不得转载。All Rights Reserved.
·27·薛振文等:褐环粘盖牛肝菌液体发酵研究