全 文 ：中国药房 2008年第 19卷第 30期 China Pharm acy 2008 Vol.19 No.30 · 2373·
欧亚旋覆花黄酮类化学成分研究
耿红梅 1* ,张嫡群 2 ,吴一兵 2 ,祁金龙 2 ,杨双革 2 (1.衡水学院应用化学系 ,衡水市 053000;2.河北医科大学
新药开发研究室 ,石家庄市 050017)
中图分类号 R284.1;R282.7 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2008)30-2373-03
摘 要 目的:研究欧亚旋覆花的黄酮类化学成分 。方法:用 95%乙醇提取欧亚旋覆花 ,并用各种柱色谱分离纯化 ,通过测定理化
常数和光谱分析鉴定其结构 。结果:分离得到 10个黄酮类化合物 ,经鉴定为菠叶素(1)、6-甲氧基-木犀草素(2)、木犀草素(3)、槲
皮素(4)、异鼠李素(5)、山柰酚(6)、芦丁(7)、万寿菊苷(8)、异槲皮苷(9)和槲皮苷(10)。其中 ,化合物 5、7、10为首次从欧亚旋覆花
植物中得到 。结论:本试验可为欧亚旋覆花的进一步研究提供科学依据 。
关键词 欧亚旋覆花;黄酮;化学成分
Identi fication of Flavonoids in Inula britannica
G ENG Hong -mei(Dept.of Applied Chem ist ry of Heng shui Colleg e , Hengshui 053000 , China)
ZHANG Di-qun ,WU Yi-bing , QI Jin-long , YANG Shuang-ge(Resea rch Room o f New Drugs Devel-
opment , Hebei Medical U niversi ty ,Shijiazhuang 050017 ,China)
ABSTRACT OBJECTIVE:To study t he flavonoids in Inula b ri tan nica.M ETHODS:The Inula bri tan nica w as ex trac ted
with 95%ethano l and iso la ted and purified by dif ferent co lumn chromatog raphy , the structures o f the constituents w ere derived
by measuring the physicochemical constants and spect ral analysis.RESULTS:A to tal o f 10 flavono ids w ere isolated from Inu la
britannica w hich w ere stated as follows:S pinacetin(1), 6-methoxy -luteo lin(2), Iu teolin(3),Querce tin(4),I so rhamnetin(5),
Kaempferol(6), Rutin(7), Patulit rin(8), Isoquercitrin(9)and Quercit rin(10).Of w hich , com pounds 5 , 7 and 10 were iso la ted
from Inula britannica fo r the first tim e.CONCLUSION :This result serves as a scientific basis fo r the fur the r study of Inu la
britannica.
KEY WORDS Inula brit an nica ;Flavono ids;Chemical constituents
0 、2 、4 、6 、8 、10 h测定。结果 ,淫羊藿苷的平均峰面积为 655.14 ,
RSD =1.09%(n =6),表明供试品溶液在 10 h内较稳定。
3.8 重现性试验
按拟定的含量测定方法 , 称取同一批样品 (批号 :
20070526)6份 , 按 “3.3” 项下方法制备供试品溶液 , 计算含
量 。结果 , 淫羊藿苷的平均含量为每粒 0.316 mg , RSD =
1.22%(n =6),表明方法重现性较好 。
3.9 加样回收率试验
称取已知含量的同一批样品(批号:20070526)约 1.5 g ,精
密称定 , 精密加入淫羊藿苷对照品溶液 (0.205 mg ·mL -1)2
mL , 照“3.3”项下方法制备供试品溶液 , 按上述色谱条件测定
含量 ,计算加样回收率 ,结果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果(n=6)
Tab 1 Results of recovery test(n=6)
样品含量/mg 加入量/mg 测得量/mg 回收率/% x/% RSD /%
0.424 0.41 0.818 97.78
99.26 1.36
0.415 0.41 0.819 98.33
0.416 0.41 0.823 98.75
0.431 0.41 0.851 101.25
0.420 0.41 0.822 98.89
0.407 0.41 0.822 100.56
3.10 样品含量测定
取 3批样品 ,研细 ,取约 1.0 g ,精密称定 ,按上述方法操作 。
精密吸取供试品溶液 10μL ,按上述色谱条件测定 ,结果见表 2。
表 2 样品含量测定结果(x ±s , n=3)
Tab Result s of content determination(x ±s , n=3)
批次 淫羊藿苷含量/mg· g -1 淫羊藿苷含量/(mg·粒-1)
20070526 0.315±0.006 0.164
20070527 0.322±0.006 0.167
20070528 0.318±0.009 0.165
4 讨论
本品处方由多味中药组成 , 组分复杂 , 影响鉴别的干扰因
素较多 。本文针对被检药材主要成分的特性 , 样品处理分为脂
溶性部分与非脂溶性部分 ,进行 TLC层析 。结果显示 ,重现性
好 ,阴性对照无干扰 。文献报道 HPLC法测淫羊藿苷含量有多
种流动相 , 如甲醇-水 、乙腈-水-醋酸 、乙腈-0.1%冰醋酸 [3 ]
等 ,本试验显示乙腈-水洗脱对该复方分离效果较好 。
综上所述 ,本文所建标准可用于本品的质量控制 。
参考文献
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苷 、补骨脂及异补骨脂的含量 [ J] .中国药房 , 2008 , 19
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(收稿日期:2008-06-16 修回日期:2008-08-20)
*副主任药师 , 博士。 研究方向:新药开发 。电话:0318-
6908577。 E-mail:hsghm@126.com
· 2374· China Pharmacy 2008 Vol.19 No.30 中国药房 2008年第 19卷第 30期
欧亚旋覆花是一种分布广泛的传统中草药 , 主要分布于我
国 、韩国和日本等 。《中国药典》收载的旋覆花为菊科植物旋覆
花或欧亚旋覆花的干燥头状花序 ,性苦辛寒 , 微温。具有降气 、
消痰、行水 、止呕等功效 , 临床主要用于风寒咳嗽 、痰饮蓄结等
证 。目前 ,欧亚旋覆花的化学成分约有 40种 ,主要含有甾醇 、倍
半萜、香豆素及黄酮类化合物 。黄酮类化合物作为其中主要的
活性成分 , 具有抗氧化活性 [ 1 ～3 ] , 笔者对欧亚旋覆花中黄酮类
化合物进行了系统研究 , 从欧亚旋覆花 95%乙醇提取液的醋
酸乙酯和正丁醇部分分离得到 10个黄酮类化合物 。其中异鼠
李素、槲皮苷 、芦丁 3种为首次从该植物中分得 。
1 材料
1.1 仪器
X -4 型显微熔点测定仪 (天津市分析仪器厂);E-
QUINO55型红外光谱仪、GCT 型质谱仪 、AM -500核磁共振
仪(德国 Bruker公司);1100型液相色谱-质谱联用仪(德国Ag-
ilent公司);柱色谱用硅胶、薄层用硅胶 G 、薄层用硅胶GF 254(青
岛海洋化工厂)。
1.2 试药
欧亚旋覆花采自山西运城地区 , 经河北医科大学药学院生
药教研室聂凤礻是教授鉴定为真品 。聚酰胺 、聚酰胺薄膜(浙江省
台州市路桥四甲生化塑料厂);葡聚糖凝胶 LH -20(瑞典 Phar-
macia公司);其它试剂均为分析纯 。
2 方法与结果
2.1 提取与分离
取 10 kg 欧亚旋覆花 , 粉碎后用 95%乙醇室温提取 3次 ,
提取液减压浓缩至膏状物 762 g , 将膏状物分次以 1 g ∶2 mL
的比例悬浮于水中 ,依次用石油醚 、氯仿 、醋酸乙酯和正丁醇萃
取 ,萃取液减压浓缩得干膏 。经过预试 ,发现黄酮类化合物主要
分布在醋酸乙酯和正丁醇部位 。因此 , 对这两部分进行了详细
分离。取醋酸乙酯萃取物 45 g ,经硅胶色谱柱色谱分离 ,聚酰胺
柱层析 , 氯仿-甲醇系统梯度洗脱得到化合物 1(25 mg)、2(55
mg)、3(128 mg)、4(1 g)、5(14 mg )、6(7 mg)。取正丁醇萃取
物 100 g , 经 AB-8大孔吸附树脂富集 , 聚酰胺柱、硅胶柱层
析 ,氯仿-甲醇系统梯度洗脱 ,葡聚糖凝胶 LH-20(甲醇)纯化
得到化合物 7(8 mg)、8(12 mg)、9(30 mg)和 10(7 mg)。
2.2 结构鉴定
2.2.1 化合物 1:黄色针状结晶(甲醇), mp 122 ～ 124 ℃, 盐
酸-镁粉反应阳性 , 莫里氏 (Molish)反应阴性 。电喷雾质谱
((+)ESI -MS)m/z:347.1[M +H] +;(-)ESI -MS m/z:
345.1[M -H] -。红外吸收光谱(IR)(KBr)cm -1:3 409(OH),
1 666(C=0), 1 221(as-OCH 3)。核磁共振氢谱(1H-NM R)
(DM SO -d6 , 400 MHz)δ:12.36(1 H , s ,H-5), 3.79(3 H , s ,
OCH 3-6), 3.90(3 H , s , OCH3 -3′), 6.83(1 H , s , H-8),
6.90(1 H , d , J=8.6H z , H-5′), 7.46(1H , d , J=8.6 Hz ,
H -6′), 7.58(1H ,s ,H-2′)。经与文献 [2 ]对照 ,化合物 1与菠
叶素的波谱数据一致 , 确认为菠叶素(Spinacetin)。
2.2.2 化合物 2:黄色针状结晶(甲醇), mp 260 ～ 270 ℃, 盐
酸-镁粉反应阳性 , Molish 反应阴性 。(+)ESI -M S m/z:
317.1[ M +H] +;(-)ESI-MS m/z:315.1[M -H] -。IR(KBr)
cm -1:3 371(OH), 1 657(C=0), 1 279(as-OCH 3)。1H -
NMR(DM SO -d6 , TM S , 400 MH z)δ:6.56(1 H , s , H-8),
6.67(1 H ,s ,H -3), 6.89(1H , d ,J=8.24 ,H-5′),7.40(1H ,
s , H -2), 7.43(1 H , s , H -6′), 3.76(3H , s , OCH 3-6),
13.09(1H , s , H-5)。核磁共振碳谱(13C-NM R)(DM SO -
d6 , 100 MHz)δ:164.06(C-2), 102.52(C-3), 182.12(C -
4), 152.89(C-5), 131.46(C-6), 157.31(C-7), 94.20(C-
8), 152.45(C-9), 104.18(C -10), 119.06(C-1′), 113.47
(C-2′), 145.83(C-3′), 149.78(C-4′), 116.12(C-5′),
121.67(C-6′), 60.03(6-OCH 3)。经光谱解析和与文献 [2 ]对
照 , 确证化合物 2结构为 6-甲氧基-木犀草素(6-methoxy-
luteolin)。
2.2.3 化合物 3:黄色粉末(甲醇), mp 346 ～ 350 ℃, 盐酸-
镁粉反应阳性 , Molish 反应阴性 。液-质联用一级质谱(LC/
ES I-MS)m/z:285.1 [ M -H] -,二级质谱:151.0[ A 1-H] -。
用薄层色谱 (TLC)(3种不同的展开系统)和高效液相色谱
(HPLC)检测 ,与木犀草素对照品的比移值(Rf值)和保留时间
(t R值)相同 。且与木犀草素对照品的混合熔点不下降 ,确认化
合物 3为木犀草素(Luteo lin)。
2.2.4 化合物 4:黄色粉末(甲醇), mp 312 ～ 316 ℃, 盐酸-
镁粉反应阳性 , M olish 反应阴性 。 LC/ES I-MS m/z:301.2
[ M -H] -,二级质谱 m/z:151.0[A 1-1] 。用 TLC(3种不同的
展开系统)和 HPLC 检测 , 与槲皮素对照品的 Rf值和 t R值相
同 , 且与槲皮素对照品的混合熔点不下降 , 确认化合物 4为槲
皮素(Querce tin)。
2.2.5 化合物 5:黄色粉末(甲醇), mp 303 ～ 305 ℃, 盐酸-
镁粉反应阳性 , Molish 反应阴性 。LC/ES I-M S m/z:315.1
[ M -H] -。用 T LC(3种不同的展开系统)和 HPLC检测 ,与异
鼠李素对照品的 Rf值和 tR值相同 , 且与异鼠李素对照品的混
合熔点不下降 ,确认化合物 5为异鼠李素(I sorhamnetin)。
2.2.6 化合物 6:黄色粉末(甲醇), mp 276 ～ 278 ℃, 盐酸-
镁粉反应阳性 ,M olish 反应阴性。 LC/ESI -MS m/z:284.9[
M -H] - 。用 TLC(3种不同的展开系统)和HPLC检测 ,与山柰
酚对照品的 Rf 值和 tR 值相同 , 确认化合物 6为山柰酚
(Kaempferol)。
2.2.7 化合物 7:黄绿色粉末 , mp 173 ～ 174 ℃,盐酸-镁粉反
应阳性 , Molish 反应阳性 。用 TLC(3种不同的展开系统)和
HPLC检测 , 与芦丁对照品的 Rf值和 tR值相同 , 且与芦丁对照
品的混合熔点不下降 ,确认化合物 7为芦丁(Rutin)
2.2.8 化合物 8:黄色粉末 (甲醇), 盐酸-镁粉反应阳性 ,
M olish 反应阳性。酸水解后薄层层析 , 与糖的对照品对照 , 表
明糖为葡萄糖 。LC/ESI -MS m/z:493.3[M -H] -,二级质谱
m/z:331.3[M -H -162] - 。1H-NM R(DMSO -d6 , TMS ,
400 MHz)δ:7.72(1 H , s ,H-2′), 7.55(1H , d , J=8.48 , H-
6′), 6.94(1 H ,s ,H-8), 6.90(1 H , d , J=8.38 ,H-5′), 5.13(1
H , d , J=6.38)。经与文献 [4 , 5 ]对照 , 确认化合物 8为万寿菊苷
(Patulitrin)。
2.2.9 化合物 9:黄色粉末(甲醇),mp 234 ～ 236 ℃。盐酸-
镁粉反应阳性 ,M olish 反应阳性。经过酸水解后与糖的对照品
进行 TLC试验 , 表明为葡萄糖 。 LC/ESI -MS m/z:463.2
[ M -H] -。 1H-NM R(DM SO-d6 , TMS , 400MH z)δ:6.18(1
H , s ,H-6),6.38(1H , s ,H-8), 6.82(1 H ,d ,J=8.96H z ,H-
5′), 7.57(1H ,s ,H-2′),7.55(1H , s ,H-6′), 5.44(1H , d ,J=
6.96 ,H -1″)。13C-NMR(DMSO -d6 , 100 MHz)δ:155.6(C-
2), 132.8(C-3), 176.9(C-4), 160.7(C-5), 98.1(C-6),
163.6(C-7), 92.9(C-8), 155.8(C-9), 103.4(C-10), 120.6
(C -1′), 114.7(C -2′), 144.3(C -3′), 147.9(C -4′),
中国药房 2008年第 19卷第 30期 China Pharm acy 2008 Vol.19 No.30 · 2375·
*副主任药师。研究方向:临床药学。电话:024-24045259。E-
mail:wangyu463463@y ahoo.com.cn
双波长薄层扫描法测定虫草类制剂中核苷类化合物的含量
马 艳 1* ,汪 宇 1 , 杨光照 2 , 于荣敏 3(1.解放军第 463医院 ,沈阳市 110042;2.沈阳军区总医院 , 沈阳市
110015;3.暨南大学药学院 ,广州市 510632)
中图分类号 R283;R927.2 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2008)30-2375-03
摘 要 目的:建立以双波长薄层扫描法测定虫草类制剂中核苷类化合物含量的方法。方法:采用以 0.4%羧甲基纤维素钠为黏合
剂的硅胶 GF 254薄层板 ,以氯仿-乙酸乙酯-异丙醇-水-氨水(8∶2∶6∶0.5∶0.12)为展开剂 ,双波长反射法锯齿扫描 ,测定波
长为 254 nm ,参比波长为 300 nm 。结果:腺苷 、尿嘧啶 、尿苷的点样量分别在 11.16 ～ 58.03 μg(r =0.998 5)、1.04 ～ 6.24μg(r =
0.991 5)、 0.8 ～ 4.8μg(r =0.991 2)范围内与各自斑点面积积分值呈良好线性关系;三者的平均回收率分别为 95.559%、
96.366%、95.270%, RSD 分别为 0.74%(n=6)、0.73%(n =6)、0.98%(n =6)。结论:本方法简便 、准确 、重现性好 ,可用于虫草
类制剂的质量控制 。
关键词 冬虫夏草;金水宝胶囊;至灵胶囊;宁心宝胶囊;双波长薄层扫描法;核苷类化合物;含量测定
Determination of Nucleosides in Cordyceps sinensis Preparation by Dual-wavelength TLC-scanning
MA Yan ,WANG Yu(No.463 Hospi tal of PLA , Shenyang 110042 ,China)
YANG Guang-zhao(S henyang M ilitary Command Gene ral Hospital ,Shenyang 110015 ,China)
YU Rong -min(Co llege of Pharmacy , Jinan U nive rsi ty , Guangzhou 510632 ,China)
ABSTRACT OBJECTIVE:T o establish a dualw ave leng th T LC-scanning method fo r the dete rmination of nucleosides in the
preparation o f Cordyceps sinensis.METHODS:The sample w as analyzed on silica GF 254 thin laye r plate using 1%CMC-Na as
adhesive and chlo rofo rm -ethy lace tate-isopropano l-w ate r-ammonia(8∶2∶6∶0.5∶0.12)as developing agent and de tected
by dualw aveleng th reflection saw tooth scanning (λs=254 nm andλR =300 nm).RESULTS:Adenosine ,Uracil and Uridnine had
good linearity in the ranges o f 11.16 ～ 58.03μg(r = 0.998 5), 1.04 ～ 6.24μg(r =0.991 5)and 0.8 ～ 4.8μg(r =0.991 2)
respectively , and their ave rage recovery rates were 95.559%, 96.366% and 95.270% and RSD w ere 0.74%, 0.73% and
0.98% respectively(n=6).CONCLUS ION :The method is simple , accura te , reproducible , and can be used as the quality co_
ntro l o f Cordyceps sinensis preparation.
KEY WORDS Cordyceps sinensis;Jinshuibao capsule;Zhiling capsule ;Ningxinbao capsule ;Dualw aveleng th T LC -scan-
ning method;Nucleosides;Conten t de termina tion
115.6(C-5′), 121.1(C-6′), 100.3(C -1″), 73.5(C-2″),
75.9(C-3″), 69.4(C-4″), 77.1(C-5″), 60.4(C-6″)。以上数
据与文献[5 ～7 ]对照 ,确认化合物 9为异槲皮苷(I soquercitrin)。
2.2.10 化合物 10:黄色粉末 ,mp 183 ～ 185 ℃, 盐酸-镁粉反
应阳性 ,Molish反应阳性 。LC/ES I-MS m/z:447.1 [M -H] -,
二级质谱m/z:301.2 [苷元-H] -。用 T LC(3种不同展开系统)
和HPLC检测 , 与槲皮苷对照品的 Rf值和 tR值相同 , 且与槲皮
苷对照品的混合熔点不下降 , 确认化合物 10 为槲皮苷
(Quercitrin)。
3 讨论
笔者在后续试验中研究了它们的抗氧化活性 , 结果表明 , 黄
酮苷元的活性强于黄酮苷 ,这可为后续开发提供基础 。
欧亚旋覆花醋酸乙酯萃取物中所含的化合物主要是黄酮苷
元 , 单纯的硅胶柱层析法不易分离。应用聚酰胺柱层析法分离效
果很好 , 可能是由于大部分黄酮苷元具有酚羟基的缘故 。欧亚旋
覆花正丁醇萃取物中所含的化合物主要是黄酮苷 , 极性较大 , 分
离时先用大孔吸附树脂富集去掉一部分水溶性杂质效果较好。在
分离过程中发现黄酮类化合物较难纯化 , 尤其是黄酮苷 , 笔者采
用葡聚糖凝胶柱进行纯化 ,分离得到 3种黄酮苷 。在分离过程中
发现黄酮类化合物对光 、热和氧不稳定 ,影响产品的纯度。分离正
丁醇极性大的部分提取物时 , 水溶性浓缩物采用冷冻干燥 , 效果
较好 。由于某些化合物性质不稳定 ,分离时应尽量避免放置时间
太久 。
参考文献
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(收稿日期:2007-12-25 修回日期:2008-02-20)