全 文 ：　第 30 卷第 5 期
2011年 9月 　 　 　　　　 　
食 品 与 生 物 技 术 学 报
Journal of Food Science and Biotechnology
　 　 　　　　　Vol.30　No.5
Sept　2011
　文章编号:1673-1689(2011)05-0679-04
　　收稿日期:2010-10-20
　　基金项目:湖北省自然科学基金创新群体项目(2009CDA155);国家民委科研项目(08HB04)。
＊通信作者:郑小江(1958-), 男 ,山东淄博人 , 教授 ,硕士研究生导师 , 主要从事野生植物保护与可持续利用方
面的研究。 Email:hbzxj123@126.com
藤茶多酚体外抗氧化作用
肖浩1 , 2 , 　郑小江＊1 , 2 , 　朱玉婷2
(1.生物资源保护与利用湖北省重点实验室 ,湖北恩施 445000;2.湖北民族学院 生物科学与技术
学院 ,湖北恩施 445000)
摘　要:以 Vc为对照 ,采用 Fe3+-还原法对藤茶多酚的还原能力进行测定;采用 Fenton 反应法研
究藤茶多酚对羟自由基(·OH)的清除作用;采用邻苯三酚自氧化法研究藤茶多酚对超氧阴离子
自由基(O 2 - ·)的清除作用 。结果表明:在本试验质量浓度范围内 ,藤茶多酚对·OH 和 O2 -·具
有一定的清除能力;在质量浓度相同的情况下 ,藤茶多酚对 ·OH 和 O2 -·的清除能力比 Vc强 ,
其半数抑制率 IC50分别为 159.09 μg/mL和 30.97 μg/mL ,因而藤茶多酚是一种较好的天然抗氧
化剂 。
关键词:藤茶;多酚;还原力;自由基;抗氧化
中图分类号:TS 202.3 文献标识码:A
Antioxidant Effects of Polyphenol from Ampelopsis grossedentata
XIAO Hao
1 , 2 , 　ZHENG Xiao-jiang＊1 , 2 , 　ZHU Yu-ting2
(1.Key Labor atory of Hubei Pro vince about Biolog ical Re sour ces P rotection And U tilization , Enshi 445000 , China;
2.College o f Bio lo gical Science and Technolo gy , Hubei Institute fo r Nationalities , Enshi 445000 , China)
Abstract:In o rder to explain the oxidation resistance ability of polyphenol f rom Ampelopsis
g rossedentata , this manuscript take Vc as the comparison , the reducing pow er , the ·OH and
O 2 -· elim inate abi li ty of polyphenol f rom Ampelopsis g rossedentata w ere investigated.The
results demonst rated that the ampelopsis g rossedentata po lypheno ls could eliminated O H and
O 2 -· .With the same concentration , the ampelopsis g rossedentata polyphenol had stronger
ability than that of Vc for elimination OH and O 2 -· , the half o f suppression rate IC50 is 159.09
μg/mL and 30.97 μg/mL , respectively.The above results strong suggested that the ampelopsis
g rossedentata po lypheno ls is one kind of go od natural o xidation inhibi to r.
Key words:Ampelopsis grossedentata;polypheno l;reducing pow er;radical;Antio xidant
　　藤茶为葡萄科(Vitaceae m ich x)蛇葡萄属
(Ampelopsis)野生木质落叶藤本植物显齿蛇葡萄
[ Ampelopsis grossedentata(Hand-Maz z)W.T .
Wang] [ 1] ,属于典型的类茶植物 ,俗称山甜茶 、白茶 、
甘露茶 、白毛猴 、白茶等 ,主要分布于我国湖南 、湖
北 、云南 、贵州 、广东 、广西 、福建等地[ 2-4] 。藤茶为
药食两用植物 ,最初作为草药应用于民间。在我国
广西 、湖南 、湖北等省区 ,壮族 、瑶族 、土家族 、苗族
人民常用其幼嫩茎叶入茶 ,夏天泡茶 ,数日不馊 ,有
“神茶”之称[ 5] ,已有数百年的历史。据《中草药汇
编》 、《广西药用植物名录》 、《广东药用植物手册》等
文献记载 ,该药性味甘淡 、清热解毒 ,主治黄疸型肝
炎 、感冒风热 、咽喉肿痛等[ 6] 。近年来 ,有关藤茶的
研究主要集中在藤茶栽培 、繁育及黄酮类化合物的
功能活性等方面 , 而对藤茶的多酚类物质研究较
少。作者以湖北民族学院藤茶课题研究组的藤茶
为材料 , 对藤茶的多酚物质抗氧化作用进行了研
究。
1　材料与方法
1.1　材料 、试剂与仪器
藤茶新叶:采自恩施州来凤县大河镇藤茶种植
基地;没食子酸 、酒石酸铁 、铁氰化钾 、三氯乙酸 、三
氯化铁 、三羟甲基氨基甲烷 、盐酸 、邻苯三酚 、VC 、邻
菲罗啉 、硫酸亚铁 、双氧水:均为分析纯 。
202-1A 型电热恒温干燥箱:天津市泰斯特仪器
有限公司;BC-W203 旋转蒸发器:上海贝凯生物化
工设备有限公司;DZF-6090真空干燥箱:上海精宏
实验设备有限公司;UVWIN5型紫外可见分光光度
计:北京普析通用仪器有限责任公司。
1.2　实验方法
1.2.1　材料的预处理　将新采摘的藤茶新叶放入
60 ℃恒温干燥箱中干燥 5 h ,取出后用粉碎机粉碎 ,
过 60目筛 ,装入棕色广口瓶中备用 。
1.2.2　藤茶多酚的提取　称取藤茶粉末 500 g 于
2 000 mL 烧杯中 ,按 1∶3 的比例加入 1 500 mL
水 ,60 ℃下热浸提 3 h ,提取 2次 ,合并提取液 ,置于
冷藏柜中放置一夜 。取上清液用 70%乙醇沉淀多
糖 ,分离上清液 ,减压真空浓缩至 200 mL。然后用
乙酸乙酯萃取 3次 ,合并萃取液 ,减压真空浓缩 ,回
收乙酸乙酯 ,将浓缩液置于真空冷冻干燥箱干燥 ,
得多酚粗品。
1.2.3　多酚粗品中总酚质量浓度测定　采用国标
GB8313.87酒石酸铁法。配制 1 mg/mL 没食子酸
母液 ,分别吸取没食子酸母液 0 、0.2 、0.4 、0.6 、0.8 、
1.0 、1.2 mL 于 25 mL 容量瓶中 ,用蒸馏水补足至 5
mL ,再加 5 mL 酒石酸铁溶液 ,置于一系列 25 mL
的容量瓶中。用配制好的 pH 为 7.5的磷酸缓冲溶
液冲稀至刻度 , 摇匀。用可见分光光度计 ,在 540
nm 处用 1 cm 比色皿以蒸馏水代替没食子酸溶液
作空白 ,测定吸光度 。用所测的吸光度与对应的没
食子酸浓度绘制标准工作曲线 ,得回归方程 y =
0.617 9 x-0.003 7 , R2 =0.999 4。称取一定量的
藤茶多酚样品并配成多酚溶液 ,按以上标曲制作方
法测定 ,计算得样品多酚质量浓度 。
1.2.4　样品还原能力的测定　加 2.5 mL 的样品
溶液 、2.5 mL 0.2 mo l/LPBS(pH 6.6), 2.5 mL
1%K 3 [ Fe(CN)6]于试管中混匀 ,在 50 ℃水浴中反
应20 min ,速冷并加入2.5 mL 10%TCA ,混匀后以
3 000 r/min 离心 10 min ,取 5 mL 上清液加入 1
mL 0.1%FeCl3 混匀 ,再加 4 mL 蒸馏水摇匀后 ,在
700 nm 下测定 A700 [ 7] 。以 Vc为阳性对照 。样品多
酚浓度设计:0 、20 、40 、60 、80 、100 μg/mL(样品质量
浓度指加入反应体系前样品的质量浓度)。
1.2.5　超氧阴离子自由基(O 2 -·)清除率测定　
取 4.5 mL pH 8.2 、50 mmol/ LTris-HCl缓冲液 ,
4.2 mL 蒸馏水 , 混匀后在 25 ℃水浴中保温 20
min ,取出后立即加入在 25 ℃预热过的 3 mmo l/L
邻苯三酚 0.3 mL(以 10 mmol/ LHCl配制 ,空白管
用 10 mmol/ L HCl代替邻苯三酚的 HCl溶液),迅
速摇匀后倒入比色皿 ,325 nm 下每隔 30 s 测定吸
光度 ,计算线性范围内每分钟吸光度的增加[ 8-9] 。
样品浓度设计:取 0.2 mg/mL 样品溶液各 0.3 、
0.6 、0.9 、1.2 、1.5 mL。
抑制百分率(%)=ΔA0 -ΔAΔA0 ×100%
式中:ΔA0为邻苯三酚的自氧化速率;ΔA 为加入多
酚样液后邻苯三酚的自氧化速率 ,单位均为吸光度
每分钟的增值 。
1.2.6　羟基自由基(·OH)清除能力测定
1)损伤吸光度(A 损伤):取 5 mmo l/L 邻二氮
菲溶液 0.6 mL ,加入 0.4 mL 、0.75 mo l/L pH 7.4
磷酸盐缓冲液混匀 ,加入 5 mmol/ L 硫酸亚铁溶液
0.6 mL ,蒸馏水 3.6 mL ,0.03%的双氧水 0.8 mL ,
混匀 ,37 ℃保温 1 h ,于 536 nm 处测定吸光度[ 10] 。
2)空白吸光度(A 空白):取 5 mmo l/L 邻二氮
菲溶液 0.6 mL ,加入 0.4 mL pH 7.4 磷酸盐缓冲
液混匀 ,加 5 mmo l/L 硫酸亚铁溶液 0.6 mL ,蒸馏
水 4.4 mL ,混匀 , 37 ℃保温 1 h ,于 536 nm 处测定
吸光度[ 11] 。
3)样品吸光度(A 样品):取 5 mmo l/L 邻二氮
菲(邻菲啰啉)溶液 0.6 mL ,加入 0.4 mL 、pH 7.4
磷酸盐缓冲液混匀 , 加 5 mmol/L 硫酸亚铁溶液
0.6 mL。样品浓度设计为取 1.5 mg/mL 样品溶液
各 0.4 、0.5 、0.6 、0.7 、0.8 mL , 0.1%的双氧水 0.8
mL ,混匀 , 37 ℃保温 1 h ,于 536 nm 处测定吸光度。
680 食　品　与　生　物　技　术　学　报　　　　　　　　　　　　第 30卷　
IC50值为自由基清除率达到 50%时的样品浓度 。
羟基自由基清除率 =(A样品 -A损伤)/(A空白 -
A损伤)×100%
2　结果与分析
2.1　藤茶多酚还原力的大小
还原力的测定可检验化合物是否为良好的电
子供应体 , 它所提供的电子可以使 Fe3+还原为
Fe2+ ,从而使体系溶液颜色改变 ,即反映出体系中
氧化还原状态的改变。体系溶液吸光值越大 ,则表
示被测物还原力越强 ,抗氧化效果越佳[ 12] 。从图 1
可知 ,在试验浓度范围内 ,各样品的还原力与其质
量浓度成明显的量效关系 , 还原力大小为藤茶
多酚>VC 。
图 1　还原力曲线
Fig.1　Curve of reducing power
2.2　清除超氧自由基(O2 -·)效果
邻苯三酚自氧化过程为链式反应 , 可产生
O 2
- · ,氧化产物的质量浓度可用分光光度仪检测 。
在 pH 值小于 9.0时 ,邻苯三酚自氧化速率与生成
的O 2 - ·的浓度呈正相关 ,可通过紫外可见光分光
光度仪来定量测定抗氧化剂在此体系中对 O 2 - ·
的清除作用 ,间接评价抗氧化剂的抗氧化能力[ 13] 。
由图 2可知 ,藤茶多酚对超氧阴离子自由基清除作
用要高于 VC 的作用。当溶液中多酚质量浓度达到
30.97μg/mL 时 ,清除率达到 50%。另外 ,当加入
样品 0.6 mL ,即溶液中样品质量浓度为 13.33 μg/
mL 时 ,样品才发挥明显作用 。在试验质量浓度范
围内 ,随着多酚质量浓度的增大 ,清除率逐渐增高 。
2.3　清除羟基自由基(·OH)的效果
邻二氮菲 —Fe2 +是一种常用的氧化还原指示
剂 ,其颜色变化可敏锐地反映溶液氧化还原状态的
改变 。H 202与 Fe2+作用可通过 Fenton反应产生羟
自由基 ,邻二氮菲—Fe2+水溶液被羟自由基氧化为
邻二氮菲 —Fe3+后 , 其在 536 nm 处最大吸收峰消
图 2　藤茶多酚对超氧阴离子自由基清除作用
Fig.2　Effect of ampelopsis grossedentata polyphenol on
scavengingO2 -·
失。根据此原理 ,我们可间接评价抗氧化剂的抗氧
化能力 。抗氧化剂提供 50%抑制作用时的质量浓
度 IC50常用来表示抗氧化剂的抗氧化能力 , IC50值
越小 ,清除能力越强 ,反之越弱[ 14] 。由图 3可知 ,藤
茶多酚对羟自由基的清除率要高于 VC 。在试验质
量浓度范围内 ,清除率随溶液中多酚质量浓度的增
高而增大 ,其 IC50为 159.09 μg/mL 。
图 3　藤茶多酚对羟自由基的清除作用
Fig.3 　Effects of ampelopsis grossedentata polyphenol
on scavenging ·OH
3　结　语
藤茶多酚清除超氧自由基和羟基自由基的能
力强于 VC , 其清除 O 2 - · 的 IC50 值为 30.97
μg/mL ,清除 ·OH 的 IC50值为 159.09 μg/mL 。藤
茶多酚有较强的还原能力 ,其还原 Fe3+的能力要强
于 VC 。
藤茶多酚是一种较好的天然抗氧化剂 ,在相同
条件下 ,其抗氧化能力要大于 VC 。藤茶为药食两
用植物 ,有清热解毒解毒之功效 ,对口舌生疮 、中
暑 、风火 、牙痛 、便秘等症有明显的疗效 , 且藤茶中
多酚物质含量较高 ,可达 10%,有望用于与自由基
相关的心血管疾病等的防治方面 ,若以此为基础开
681　第 5期 肖 浩等:藤茶多酚体外抗氧化作用
发新药 ,将具有广阔的应用前景。
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682 食　品　与　生　物　技　术　学　报　　　　　　　　　　　　第 30卷