免费文献传递   相关文献

超声辅助提取藤梨根总黄酮工艺研究



全 文 :第 14 期
收稿日期:2015 - 04 - 23
基金项目:绵阳师范学院启动项目(项目编号:QD 2012A10)以及四川省教育厅项目(项目编号:
13ZB0275)
作者简介:通讯联系人:赵洪(1974—),博士,讲师,主要从事生物技术的教学和研究工作。
超声辅助提取藤梨根总黄酮工艺研究
赵 洪* ,尚雪梅
(绵阳师范学院,四川 绵阳 62100)
摘要:本实验通过超声辅助乙醇的方法提取藤梨根中的总黄酮,先用分光光度计测定提取液中总黄酮的吸光度,然后计算出其提
取率,以总黄酮提取率为指标,采用单因素实验确定实验各因素水平,设计正交实验,最后将正交实验结果进行极差分析和方差分
析。得出结果:各因素对提取率的影响顺序为:料液比﹥乙醇浓度﹥超声功率﹥温度,在乙醇浓度为 60%、温度为 60℃、功率为
140W、料液比为 1:25 的条件下提取率最高为 9%。
关键词:藤梨根;超声;黄酮
中图分类号:TQ461;TQ914. 1 文献标识码:A 文章编号:1008 - 021X(2015)14 - 0013 - 02
Ultrasound - assisted Extraction of Radix Actinidiae Total Flavonoids
Zhao Hong ,Shang Xuemei
(Mianyang Normal University,Mianyang 62100,China )
Abstract:In this experiment,we extract total flavonoid in Radix Actinidiae by ethanol with ultrasound wave. Measure total
flavonoids's absorbancy by spectrophotometer,Then,calculate it's extract efficiency,Taking the total flavonoids's extract
efficiency as evaluation criteria,single factor test are used to determine the each factor level. Then,Design a orthogonal
test,Finally,Results analysis of variance and range to arrive at such conclusion:The order of extract efficiency influence
with factors is:ratio of material > ethanol concentration > ultrasonic power > temperature. And under the condition of ethanol
concentration 60%、temperature 60℃、power 140W and the ratio of material to solvent 1:25,the extract efficiency is
supreme and extraction rate will be 9 % .
Key words:Radix Actinidiae;ultrasound;flavone
藤梨根别名圆枣子、杨桃藤,具有健胃、清热、利湿等多
种功效,主要用于食管癌[1]等消化道癌肿;并擅长祛风除湿、
活血利尿、消肿,可治疗风湿性关节痛、消化不良、呕吐、淋巴
结核、黄疸、痢疾、疮疖和水肿等症[2 - 3]。现代药理研究表
明:藤梨根对鼠胃癌细胞具有抑制作用[4 - 5],预示藤梨根在
治疗胃癌方面有广阔的开发前景,但其具体的抗癌物质尚未
明确,曾有研究人员对藤梨根的化学成分进行研究,发现藤
梨根中含有黄酮类化合物,并对几种不同品种藤梨的不同部
位总黄酮含量进行比较发现,家种藤梨根总黄酮含量高于野
生品,且根部的含量高于地上茎[6],家种藤梨根中总黄酮的
含量高达 10%以上,预示总黄酮可能是藤梨根抗癌的主要物
质基础之一[7]。因此开发藤梨根总黄酮的提取工艺可以推
动其抗癌药理作用的进一步研究。
目前藤梨根黄酮的提取方法有:微波 - 超声协同提
取[8]、乙醇提取[9]、甲醇 -超声协同提取、甲醇索氏回流提
取[10]。甲醇法是目前提取藤梨根黄酮用的比较多的方法,
考虑到甲醇的毒性以及工艺的安全,我们尝用乙醇替代甲醇
并超声辅助提取藤梨根黄酮。
1 材料和仪器
1. 1 材料
藤梨根:购自绵阳中药材市场,60℃干燥至恒重,超微粉
碎,过 100 目药筛,得到藤梨根粉末,置于冰箱 - 20℃冷冻保
藏。芦丁标准品:中国药品生物制品检定所,分析纯。
1. 2 仪器
1997SM - DTD 功率可调超声波清洗机(南京舜玛仪器
设备有限公司),WFZ UV -2000 型紫外分光光度计 (上海合
利仪器有限公司)
2 方法
2. 1 黄酮的提取
参照前期的单因素实验的结果,以乙醇浓度(A)、温度
(B)、超声功率(C)、料液比(D)为因素进行表 1 的 L9(3
4)正
交实验。
称取 9 份藤梨根粉末,每份 5 g,置于 250 mL锥形瓶中,
编号为 1 - 9 号。按照相应的实验条件放入超声仪里提取,
过滤,蒸馏用旋转蒸发器浓缩后,用蒸发皿挥干得粗藤梨根
黄酮。
·31·赵 洪,等:超声辅助提取藤梨根总黄酮工艺研究
山 东 化 工
表 1 正交实验水平
水平
A(乙醇浓度)
/%
B(温度)
/℃
C(超声
功率)/ W
D(料液比)
1 60 50 120 1:20
2 70 60 140 1:25
3 80 70 160 1:30
2. 2 标准曲线的绘制
准确称取干燥至恒重的芦丁标准品 10mg,用 30%乙醇
溶解,定容至 50mL,制的浓度为 0. 20mg /mL 的芦丁标准液。
准确吸取芦丁标准液 0,0. 5,1. 0,1. 5,2. 0,2. 5 分别置于
10mL容量瓶中,标号 1 - 6,加入 0. 3mL 5%亚硝酸钠溶液,
摇匀,放置 6min,加入 0. 5mL10%硝酸铝溶液,摇匀,6min 后
加入 4. 0mL 4%氢氧化钠溶液,再用 30%乙醇定容并摇匀,
放置 10min,置比色皿中在波长 400 ~ 600nm之间测定吸光光
谱,确定最大吸收波长为 510nm,在 510nm 条件下测定吸光
度,试剂为空白参比。
2. 3 提取物中黄酮含量的测定
准确称取提取一定质量粗黄酮,用 30% 乙醇溶解,定
容至 100mL;取 3 mL 放入 3 支 25 mL 容量瓶中,用 30% 乙
醇补至 10 mL,加入 0. 7 mL 的 5% 亚硝酸钠溶液摇匀,放
置 5 min,加 0. 7 mL 10%的硝酸铝溶液溶液摇匀,放置 5
min;再加入 5 mL 10% NaOH 溶液摇匀,用 30% 乙醇溶液定
容 10 min 后,在波长 510 nm 处测定,将测定的吸光值 A 带
入芦丁标准曲线中,计算出总黄酮量和黄酮提取率。
3 结果分析
3. 1 正交实验结果
表 2 正交实验结果
实验号 A B C D 提取率 /%
1 1 1 1 1 8. 06
2 1 2 2 2 9. 03
3 1 3 3 3 7. 53
4 2 1 2 3 7. 92
5 2 2 3 1 7. 74
6 2 3 1 2 8. 87
7 3 1 3 2 7. 83
8 3 2 1 3 7. 47
9 3 3 2 1 7. 56
K1 24. 590 23. 805 24. 400 23. 355
K2 24. 530 24. 210 24. 480 25. 700
K3 22. 860 23. 960 23. 100 22. 920
k1 8. 197 7. 935 8. 133 7. 785
k2 8. 177 8. 070 8. 160 8. 567
k3 7. 620 7. 986 7. 700 7. 640
R 0. 577 0. 135 0. 460 0. 927
通过对正交结果进行 K 值和 R 值分析,得出,四因素对
实验结果的影响大小为:料液比﹥乙醇浓度﹥超声功率﹥温
度。。从 k值大小可知,最优工艺组合是 A1B2C2D2,即:乙醇
浓度 60%、温度 60℃、超声功率 420W、料液比 1:25,也就是
即正交实验的第 2 组实验,其次提取率为 9. 03%。
将正交实验结果进行方差分析,以影响最小的温度作为
空白(误差),得出的结果如表 3。
表 3 正交实验方差分析结果
方差来源 偏差平方和 自由度 F值 P值
A(乙醇浓度) 0. 643 2 23. 614 0. 041(< 0. 05)
C(超声功率) 0. 400 2 14. 697 0. 064(< 0. 05)
D(料液比) 0. 489 2 54. 684 0. 018(< 0. 05)
B(温度)误差 0. 027 2 1. 000
通过表 3 中方差分析可知,因素 A、D 具有显著性,因素
B、C无显著性影响。
3. 2 验证实验
通过结果分析,确定最优提取水平为:乙醇浓度 60%、温
度 60℃、超声功率 140W、料液比 1:25。重复实验 3 次,提取
率分别为 9. 02%、9. 09%、9. 05%,提取率平均值为 9. 05%,
RSD为 0. 039%。这表明工艺稳定,提取率较高。
4 结论
采用超声辅助提藤梨根总黄酮最佳工艺条件为:乙醇浓
度 60%、温度 60℃、超声功率 70%、料液比 1:25。在此条件
下其次提取率为 9. 03%。本文中所用的超声仪的功率非常
低,对能耗要求也比较低,具有一定的产业化应用前景,也为
藤梨根的综合开发提供了一个新的思路。
参考文献
[1]杭州肿瘤医院.草药藤梨根治疗癌症的情况研究[J].中
草药讯,1970,1(1):18 - 20.
[2]陈贯诚.猕猴桃[J].中药材科技,1981,4(1):30 - 31.
[3]陈德轩,潘立群. 抗肿瘤植物药藤梨根[J]. 中药材,
2004,27(2):86 - 87.
[4]卫培峰,焦晨莉,张三印.藤梨根提取物诱导胃癌细胞凋
亡的实验研究[J]. 陕西中医学院学报,2005(3):52 -
54.
[5]李 昊,杨慧萍,杨 凡,等. 藤梨根对为癌细胞抑制作
用的实验研究[J].河北中医 2004,26(4):314 - 315.
[6]宣新中,蔡中齐,姚 晓.不同来源藤梨根中总黄酮含量
的比较[J].中国药业药物研究,2012,21(22):38 - 39.
[7]王小平,白吉庆,成奉珍.不同来源藤梨根中总黄酮含量
比较研究[J].商洛学院学报,2007,6(2):51 - 52.
[8]滕 坤,阮洪生,武子敬,等. 星点设计 -响应面法优选
藤梨根总黄酮的提取工艺研究[J].中国现代应用药学,
2012,29(7):610 - 613.
[9]白 瑶,陈佳庆,申 野,等. 软枣猕猴桃根黄酮类化合
物提取工艺条件优化研究[J]. 中国民族民间医药,
2009,18(21):2 - 4.
[10]WANG X P,BAI J Q. The extracting method and content
assay of total flavones in Radix Actinidine Argutae[J].
Shanxi Coll Tradit Chin Med,2008,31(5):65 - 66.
(本文文献格式:赵 洪 ,尚雪梅.超声辅助提取藤梨根总黄
酮工艺研究[J].山东化工,2015,44(14):13 - 14.)
·41· SHANDONG CHEMICAL INDUSTRY 2015 年第 44 卷