全 文 ：食品研究与开发2006.Vol.27.NO.8
基金项目:沈阳农业大学青年教师科研基金项目
作者简介:冯颖(1975-),女,讲师,在读博士,研究方向:食品科学。
无梗五加为五加科五加属植物,长期以来,在东北
地区,将无梗五加当作刺五加药用,未见不良反应报
道。为扩大药用资源,无梗五加已引起国内外学者的浓
厚兴趣。综合中外文献,将无梗五加已知的化学成分可
归纳为以下几类:苷类成分、木脂素、甾体类化合物及
脂肪酸化合物、多糖等[1]。
无梗五加是一种具有药理学功能的植物,但是长
期以来人们对它的研究仅仅局限于根、茎、叶部位,而
对于无梗五加果实中化学成分的研究却很少[1]。本试验
选用粉碎的无梗五加果实为原料,对其粗多糖进行提
取精制,旨在为无梗五加果实资源的开发利用及工业
化生产提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
无梗五加果实;无水乙醇、葡萄糖、乙醚、苯酚、浓
硫酸、三氯甲烷、正丁醇、牛血清白蛋白、丙酮、过氧化
氢、石油醚(均为分析纯)。
1.2 试验仪器
7200型可见分光光度计,尤尼柯(上海)有限公
司;RE-52型旋转蒸发仪,上海博通经贸有限公司;
SHZ—IIB型循环水真空泵,上海华琦科学仪器有限
公司;TDL—5000B型离心机,上海安亭科学仪器厂;圆
筒式压滤器;索氏提取器;小型粉碎机。
1.3 试验方法
无梗五加果粗多糖提取精制工艺流程:
无梗五加果实→自然干燥→60℃烘干→粉碎→
石油醚脱脂→烘干→提取→抽滤→滤液→浓缩→醇
沉→离心→干燥→粗多糖→复溶→脱蛋白→脱色→透
析→透析液→浓缩→醇沉→离心→干燥→精制多糖
1.4 操作要点
1.4.1 提取 采用水浸提法,以浸提温度、浸提时
间、固液比为因素,采用 L9(34)正交试验确定最佳
工艺参数。
1.4.2 醇沉 加入无水乙醇,使多糖沉淀,与其它醇溶
性杂质分离。
1.4.3 离心 5000r/min离心 15min,取出下层多糖
沉淀。
1.4.4 干燥 以无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤多糖,
然后于60℃下真空干燥。
1.4.5 复溶 将粗多糖以水配成1%粗多糖溶液。
1.4.6 脱蛋白 采用 Sevage法对粗多糖溶液脱蛋白。
无梗五加果粗多糖提取精制工艺研究
冯颖,王晶晶,孟宪军,唐明华
(沈阳农业大学食品学院,辽宁 沈阳110161)
摘 要:以无梗五加果实为原料,对其多糖的水提醇沉工艺及Sevage法脱蛋白工艺参数进行了研究。水提醇沉的最
佳工艺参数为:温度 80℃,料液比 1:70,浸提时间 3h,5倍醇沉;Sevage法脱蛋白最佳工艺参数为:粗多糖溶液/sevag
试剂(v/v)为4:1、氯仿:正丁醇(v/v)为3:1。
关键词:无梗五加;多糖;提取;精制
STUDYONEXTRACTIONANDPURIFICATIONOFPOLYSACCHARIDEFROMFRUITOF
ACANTHOPANAXSESSILIFLORUSSEEM
FENGYing,WANGJing-jing,MENGXian-jun,TANGMing-hua
(FoodColege,ShenyangAgriculturalUniversity,Shenyang110161,Liaoning,China)
Abstract:ExtractionandproteinremovalofpolysaccharidefromfruitofAcanthopanaxSessiliflorusSeemwas
studied.Theresultshows:theoptimalextractionconditionwere80℃,3h,material-waterratio1:70,5timesof
ethanolprecipitation;theoptimalproteinremovalconditionwere:material-sevageratio(v/v)4:1,chloroform--n.
Butanolratio(v/v)3:1.
Keywords:AcanthopanaxSessiliflorusSeem;polysaccharide;extraction;purification
科学研究
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食品研究与开发 2006.Vol.27.NO.8
对粗多糖溶液与 Sevage试剂的体积比、Sevage试剂中
氯仿和正丁醇的体积比2个因素进行考察,每个因素
选取3个水平进行试验,确定最佳工艺参数。
1.4.7 脱色 调节脱蛋白后的多糖溶液 pH至 9.0,置
于 50℃水浴中滴加 30%H2O2(期间注意保持 pH在
8~9)至颜色不再发生变化后,继续于水浴中保温2h。
1.4.8 透析 蒸馏水透析48h。
1.5 测定方法
多糖测定:苯酚-硫酸法[2]
蛋白含量测定:Lowry法[3]
2 结果与分析
2.1 提取工艺参数的确定
由表1正交试验结果分析得出,各因素对多糖得
率的影响程度大小为:A>C>B,最优组合为 A2B2C2,即温
度80℃,料液比1:70,浸提时间3h。
2.2 醇沉工艺的确定
由表2可知,随乙醇加入量的增加,沉淀重量增加,
但沉淀中多糖总量却并不呈现相同趋势,当乙醇加入
量大于5倍后,沉淀中多糖含量下降,纯度降低,原因
可能是高浓度的乙醇导致一些杂质亦随多糖沉淀下
来,致使沉淀总量增加。因此,本试验确定醇沉工艺中
乙醇加入量为5倍于粗多糖溶液。
2.3 Sevage法脱蛋白工艺参数的确定
Sevage法是脱除蛋白的传统方法,在粗多糖溶液
中加入氯仿-正丁醇进行混合振摇,将游离蛋白变性
成为不溶性物质,经过离心分离去除,可以达到去除蛋
白的目的。而影响 Sevage法脱蛋白的因素主要有 2
个,一个是粗多糖液与 Sevage试剂的体积比,另一个
是氯仿和正丁醇的体积比,这里就这2个因素进行考
察,以确定最佳工艺参数。
由表3试验结果得出,试验序号为8的组合,脱蛋
白效果最好。即粗多糖溶液/Sevag试剂(v/v)为4:1、氯
仿:正丁醇(v/v)为 3:1条件下对粗多糖溶液脱蛋白效
果最好。
3 结论
3.1 水浸提无梗五加果粗多糖的最佳工艺参数为:温
度80℃,料液比1:70,浸提时间3h。本试验条件下,温
度对多糖提取影响较大。
3.2 醇沉工艺中,乙醇加入量并非越多越好,加入量过
多会导致多糖纯度降低。本试验条件下,选择乙醇加入
量为5倍于粗多糖溶液。
3.3 粗多糖液与Sevage试剂的体积比,以及Sevage试
剂中氯仿和正丁醇的体积比,影响Sevage法脱蛋白效
果,经试验确定,粗多糖溶液 /sevage试剂(v/v)为 4:1、
氯仿:正丁醇(v/v)为 3:1条件下对无梗五加果粗多糖
溶液脱蛋白效果最好。
参考文献:
[1] 郭丽娜.无梗五加化学成分与药理活性的研究进展[J].中国药业,
2002,11(12):73~74.
[2] 李芙蓉,吕博.刺五加多糖的微波萃取及含量测定[J].新疆中医
药,2003,21(1):11.
[3] 王宪泽.生物化学实验技术原理和方法[M].北京:中国农业出
版社,2002.
收稿日期:2006-01-23
表3 Sevage法脱蛋白工艺参数的确定
试验
序号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
A粗多糖溶液
/Sevage试剂(v/v)
1(4:1)
2(3:1)
3(2:1)
2
3
1
3
1
2
B氯仿:正丁
醇(v/v)
1(5:1)
2(3:1)
3(1:1)
1
2
3
1
2
3
脱蛋白
后蛋白含量(mg)
2.03
1.72
1.98
1.63
1.67
1.65
1.83
1.55
2.03
表1 无梗五加多糖水浸提工艺正交试验结果及分析
试验
序号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
K1
K2
K3
R
A温度
(℃)
1(70)
1
1
2(80)
2
2
3(90)
3
3
2.41
2.58
1.91
0.67
B料液比
(g/mL)
1(1:60)
2(1:70)
3(1:80)
1
2
3
1
2
3
2.15
2.51
2.24
0.36
C时间
(h)
1(2)
2(3)
3(4)
2
3
1
3
1
2
2.06
2.45
2.40
0.39
多糖得率
(%)
1.89
2.84
2.50
2.63
2.76
2.36
1.94
1.93
1.87
表2 醇沉工艺中乙醇加入量的确定
试验
序号
1
2
3
4
5
乙醇/粗
多糖溶液(v/v)
3
4
5
6
7
沉淀重量
(g)
1.524
1.759
1.977
2.023
2.103
沉淀中多糖总量
(g)
0.283
0.373
0.468
0.459
0.422
沉淀中多糖纯度
(%)
18.57
21.21
23.67
22.69
20.07
科学研究
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