全 文 ：［收稿日期］ 20130416(013)
［基金项目］ 中药复方药物动力学研究团队项目(2011-CXTD-
12)
［第一作者］ 贺锐锐，研究实习员，Tel:010-82802542，E-mail:
yananheruirui@ sina． com
［通讯作者］ * 赵保胜，博士，副研究员，从事中药药效与物质
基础研究，Tel:010-64286291，E-mail:zhaobs1973
@ 163. com
大孔树脂吸附纯化维药天山堇菜总黄酮
贺锐锐1，詹雪艳2，谭鹏2，林宏英2，陈鑫3，赵保胜2*
( 1. 北京大学第一医院临床药理所，北京 100191; 2. 北京中医药大学，北京 100029;
3. 北京大学医学部分析教研室，北京 100191)
［摘要］ 目的:研究大孔树脂吸附纯化天山堇菜总黄酮的条件及参数，为黄酮类化合物的富集提供参考。方法:比较了 3
种大孔树脂对天山堇菜总黄酮的吸附性能;以天山堇菜总黄酮的得率和纯度为考察指标，对大孔树脂吸附纯化天山堇菜总
黄酮的工艺进行筛选。结果:AB-8 大孔树脂对天山堇菜总黄酮的吸附性能最好，达 48. 0 mg·g －1湿树脂，AB-8 大孔树脂对天
山堇菜总黄酮最佳洗脱浓度为 35%乙醇，洗脱液为 4 BV。天山堇菜总黄酮的得率达 2. 08%，纯度达 71. 1%。结论:大孔树脂
富集黄酮类化合物工艺简便，树脂再生容易，可用于工业化生产。
［关键词］ 天山堇菜;黄酮化合物;大孔树脂;纯化;维吾尔药
［中图分类号］ Ｒ283． 6 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)19-0093-03
［doi］ 10． 11653 /syfj2013190093
Purification of Flavonoids from Viola tianshanica
by Macroporous Ｒesin
HE Ｒui-rui1，ZHAN Xue-yan2，TAN Peng2，LIN Hong-ying2，CHEN Xin3，ZHAO Bao-sheng2*
(1. Institute of Clinical Pharmacology，Peking University，Beijing 100191，China;
2. Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China;3. Department of Pharmaceutical
Analysis，School of Pharmaceutical Sciences，Peking University，Beijing 100191，China)
［Abstract］ Objective:To investigate the condition and parameters of adsorption and purification of total
flavones contained in Viola tianshanica by macroporous resin so as to provide methods for the enrichment of
flavonoids． Method:The adsorption properties of 3 kinds of macroporous resins for total flavonoids of V．
tianshanica were compared;the yield and purity of total flavonoids from V． tianshanica were considered as
standards，the purification process of total flavonoids in V． tianshanica by macroporous resin was selected． Ｒesult:
It was found that theadsorption properties of AB-8 macroporous resins for total flavonoids of V． tianshanica were the
best，up to 48 mg·g －1 wet resin，the best conditions to elute the total flavonoids adsorbed by AB-8 macroporous
resin was 35% ethanol，resin vs． crude drug was 2. 5∶1，ratio of diameter to height was 1∶ 8. Using this process，
the yield of the total flavones of V． tianshanica was up to 2. 08%，the purity was 71. 1% ． Conclusion:This
process is simple and practicable，it can be used to purify the total flavones contained in V． tianshanica．
［Key words］ Viola tianshanica;flavonoids;macroporous resin;purification;Uighur medicine
天山堇菜 Viola tianshanica Maxim 为堇菜科堇
菜属植物，以全草入药［1-2］，主要用于各种发热、受
寒、感冒、胸膜炎、肺炎、咽炎、疔疮肿痈。天山堇菜
经预试验检出含有挥发油、黄酮类、生物碱、氨基酸、
黏液质皂苷、鞣质等物质［3-7］。黄酮类有效成分对
治疗冠心病、老年痴呆、脑血栓和消除自由基、抑菌、
抗癌等方面有显著效果，无副作用，可以开发出多种
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 19
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药品和保健食品。大孔树脂吸附分离技术应用广
泛［8-10］，在医药上具有吸附、富集、分离、纯化不同母
核结构药物的功能，可用于单一或复方中药的分离
与纯化［11-12］。故本课题尝试采用大孔树脂的方法
富集天山堇菜中黄酮类成分，为天山堇菜的开发提
供参考。
1 材料
SpectramaxM2 型 分 光 光 度 计 (Molecular
Devices) ，AY 型电子天平(日本岛津) ，ＲE-52 型旋
转蒸发仪(上海医械专机厂) ，SHZ-Ⅲ型循环水真空
泵(上海锦华层析设备厂) ，101A-1 型干燥箱(上海
实验仪器总厂) ，DＲ-HW-2 恒温水浴锅(北京市医
疗设备总厂)。
天山堇菜由本实验室采集，芦丁对照品(批号
F990707) ，D4020，AB8，S-8 大孔树脂(南开大学化
工厂)。
2 方法与结果
2. 1 天山堇菜中总黄酮的含量测定
2. 1. 1 标准曲线的确定 精密称取芦丁对照品
25 mg，置 50 mL 量瓶中，加 80%乙醇溶解，定容，精
密吸取 0. 0，0. 2，0. 4，0. 6，0. 8，1. 0 mL，分置于
10 mL量瓶中，加 5%亚硝酸钠 0. 3 mL，放置 6 min，
再加 10%硝酸铝 0. 3 mL，放置 6 min，加 4%氢氧化
钠 4 mL，加水至刻度，摇匀，进行全波长扫描，在 510
nm 均有最大吸收。以 510 nm 处测得的吸光度(A)
对质量浓度(C)回归，得回归方程 A = 10. 86C －
0. 001 2(r = 0. 998) ，在 10 ～ 50 mg·L －1，质量浓度与
吸光度有良好的线性关系。
2. 1. 2 天山堇菜样品液制备及其总黄酮含量测定
将天山堇菜粉粹，过 20 目筛，用 6 倍药材体积石
油醚(60 ～ 90 ℃)回流去脂 2 次，每次 4 h，再用 6
倍药材体积 70%乙醇回流提取 4 次，每次 2 h，温度
80 ℃，抽滤，合并滤液，减压回收乙醇适量，水浴蒸
发成膏状，再加适量热水溶解，抽滤，即得样品液。
2. 2 大孔吸附树脂的预处理 大孔吸附树脂的预
处理及装柱 在提取器中加 95%乙醇加热回流洗脱
树脂，至洗脱液蒸干后无残留物。洗净的树脂挥去
溶剂后保存备用。以乙醇湿法装柱，用乙醇洗脱，不
时检测流出的乙醇，直流出的乙醇液用水稀释不混
浊为止(取 1 mL乙醇加 5 mL水) ，用纯化水洗至无
醇味［8］，备用。
2. 3 工艺条件及参数的优化
2. 3. 1 不同大孔树脂对天山堇菜总黄酮的吸附性
能比较 分别称取各预处理好的湿树脂 15. 0 g，乙
醇湿法装柱(直径 1. 5 cm × 20 cm)。吸取天山堇
菜样品液 20 mL (1. 0 kg·L －1)上柱，预吸附 8 h，过
柱流出液重吸附 1 次，收集 20 mL 1 份，流速 2 mL·
min －1，平行 3 份。按 2. 1. 2 测定样品液和过柱液总
黄酮浓度，计算不同树脂的吸附容量，结果见表 1。
通过表 1 结果可知，在 3 种树脂中 AB-8 型大孔树脂
对天山堇菜总黄酮的吸附性能最好，每克湿树脂可
吸附 48. 00 mg。
吸附容量 =(上柱液浓度 －过柱液浓度)/树脂质量 ×
溶液体积
表 1 不同大孔树脂对天山堇黄酮吸附性能的影响
树脂名称 湿树脂 /mg·g － 1
D4020 40. 25
AB-8 48. 00
S-8 43. 17
2. 3. 2 乙醇体积分数考察 取 AB-8 20 g (干重) ，
经处理后，湿法装柱(2 cm × 20 cm) ，树脂床体积约
为 15 mL。再取天山堇水溶液(总黄酮 24. 75 g·
L －1)5 mL上树脂柱，以 1 BV·h －1的流速进行吸附，
再以 5 BV 的水洗脱后，分别用 10%，30%，50%，
75%，90%乙醇洗脱，各收集 4 倍猪蹄积洗脱液，于
500 nm处测定 A，计算总黄酮含量，结果见表 2。从
表 2 可以看出，最佳洗脱的乙醇体积分数为 35%。
表 2 天山堇菜总黄酮的测定
体积分数 10% 35% 50% 65% 80%
含量 1. 5% 78. 3% 18% 6% 0
2. 3. 3 洗脱曲线的绘制 将吸附饱和的树脂用
35%乙醇，以 2 BV·h －1的速度洗脱，按树脂床体积
收集洗脱液，于 500 nm处测定 A，计算含量，天山堇
菜总黄酮的解吸附曲线见图 1。
图 1 天山堇黄酮解吸附曲线
实验过程中，35%解吸液中天山堇含量最高，表
现出最大的富集纯化效果，故解吸天山堇菜黄酮的
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最适乙醇体积分数为 35%，绘制上述解吸附曲线，
可以看出 AB-8 型大孔吸附树脂吸附黄酮类的泄露
点和饱和点分别为 4. 0 倍上样液体积、6. 5 倍上样
液体积。
2. 3. 4 分离的天山堇菜总黄酮纯度考查 取 20 g
AB-8(干重) ，经处理后，湿法装柱(2 cm × 20 cm) ，
树脂床体积约为 15 mL。再取天山堇菜水溶液(总
黄酮 185. 75 g·L －1)5 mL上树脂柱，收集洗脱液，定
溶至 100 mL，测定总黄酮的含量，取 50 mL，水浴蒸
干，于 105 ℃干燥 3 h，测定干膏收率，计算总黄酮的
纯度，结果见表 3。
表 3 天山堇菜总黄酮的测定
试验次数 总浸膏量 / g 总黄酮 /%
1 2. 5 71. 3
2 2. 5 71. 9
3 2. 5 70. 2
从表 3 可以看出，经 AB-8 大孔树脂处理后的总
黄酮可达 70%以上，且具有良好的重复性。
3 讨论
天山堇菜在维药中应用广泛，但由于其特殊的
地理位置，对它的研究较少，尤其是其总黄酮的含量
不高、富集、分离、纯化存在一定的困难。根据本文
研究获得的参数利用 AB-8 大孔树脂吸附，提取分
离天山堇菜总黄酮的得率为 2. 08%，纯度为
71. 11%，表明大孔树脂吸附纯化法用于天山堇菜总
黄酮提取分离，具有吸附快、解吸率高、吸附容量大、
洗脱率高、树脂再生简便等特点，而且产品的得率
和纯度稳定。
传统药材的提取方法，如水提和醇提等方法，得
到的提取物杂质与大孔树脂富集法相比偏高，如经
大孔树脂吸附技术处理后得到的精制物可使药效成
分高度富集，提取得率仅为原生药的 2% ～ 5%，而
一般水煮法为 20%，醇沉法为 10% ～15%。大孔树
脂能缩短生产周期，免去了静置沉淀浓缩等耗时和
耗电等工序，属于节省能源的提取方法。
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［责任编辑 邹晓翠］
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贺锐锐，等:大孔树脂吸附纯化维药天山堇菜总黄酮