全 文 ：中国药房 2008年第 19卷第 15期 Ch ina Pharmacy 2008 V ol.19 No.15 · 1169·
RP -HPLC 法测定贵州 、湖南卷柏中穗花杉双黄酮的含量
吴彩霞 1 ,2 * ,郅妙利 1 ,贺光东 1 ,雷豪志 1 ,康文艺 1 , 2#(1.河南大学天然药物研究所 ,开封市 475004;2.河南省
疾病预防控制中心 ,郑州市 450003)
中图分类号 R284.1;R927.2 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2008)15-1169-02
摘 要 目的:建立以反相高效液相色谱法测定贵州 、湖南卷柏中穗花杉双黄酮含量的方法 。方法:色谱柱为 Purospher st ar RP-
C 18(250 mm ×4.6 mm , 5μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(65∶35),流速为 0.8 mL ·min -1 ,检测波长为 337 nm ,柱温为 25
℃。结果:贵州 、湖南卷柏药材中的穗花杉双黄酮的含量分别为 0.19%、0.51%。结论:本方法灵敏 、准确 ,可为选择卷柏道地药材提
供依据 。
关键词 卷柏;穗花杉双黄酮;反相高效液相色谱法;含量测定
Determination of Amentoflavone in Selaginella Tamariscina from Guizhou and Hunan by RP-HPLC
WU Cai-xia ,ZHI M iao -li ,HE Guang -dong ,LEI Hao-zhi ,KANG Wen-yi(Inst itute o f Natural Drug s ,
Henan University , Kaifeng 475004 ,China)
WU Cai-xia ,KANG Wen-yi(Henan Center fo r Disease Cont rol and P revention , Zhengzhou 450003 , China)
ABSTRACT OBJECT IVE:To de te rmine the content of the Amentoflavone in Selaginella tamarisci na f rom Guizhou and
Hunan by RP -HPLC.M ETHODS:The ch rom atog raphic column w as Purospher star RP -C 18(250 mm×4.6 mm , 5μm)at a
co lum n tempera ture o f 25 ℃.The mobile phase consisted of m ethanol-0.1%phosphoric acid solution(65∶35)at a flow rate
o f 0.8 mL ·min -1.T he detection w aveleng th w as set at 337 nm.RESULTS:The content of Amentoflavone in Se laginella
tamariscina fr om Guizhou w as 0.19%versus 0.51% from Hunan province.CONCLUS ION :The method is sensitive and ac-
curate , and serves a basis fo r t he cho ice o f genuine Selagi nel la Tam ariscina.
KEY WORDS S elaginel la tamarisci na ;Amen toflavone;RP-HPLC;Content dete rmination
*主管药师 。研究方向:中药活性成分及新药研究。E-mail:
dxdbz@163.com
#通讯作者:副教授 , 硕士研究生导师。研究方向:中药活性成分
及新药研究。电话:0378-3880680。E-mail:kangweny@ho tm ail.com
分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各 10 μL , 按
“3.1”项下色谱条件测定 ,计算样品含量 ,结果见表 2。
表 2 样品中含量测定结果(n=3)
Tab 2 Results of content determination of samples(n=3)
批号 补骨脂素含量/mg· g -1 异补骨脂素含量/mg· g -1
0709021 0.018 0.011
0709022 0.020 0.013
0709023 0.019 0.012
4 讨论
在进行红花的 T LC 鉴别研究时 , 曾采用 2005年版 《中国
药典》(一部)“红花”项下的方法进行鉴别 , 结果色谱斑点不清
晰 ,分离效果欠佳 。经不断摸索试验 ,改用聚酰胺薄膜 ,以乙酸
乙酯-甲醇-3.6%盐酸 (1∶3∶6)作为展开剂 , 色谱斑点清
晰 ,分离较好 ,可作为含红花制剂的 TLC鉴别方法 。
本研究中的含量测定参考了《中国药典》 “成方制剂”中补
骨脂素和异补骨脂素的含量测定方法 , 流动相采用乙腈-水
(30∶70)。但因本制剂成分较复杂 ,用此流动相时 ,所测成分未
能与杂质得到很好的分离。经过不断摸索 ,后加大水的比例 ,将
乙腈与水的比例调整为 25∶75 , 虽然出峰时间延长 , 但分离效
果显著提高 , 补骨脂素和异补骨脂素均能达到基线分离 , 且阴
性对照无干扰 ,重现性良好 。
综上所述 ,本文所建标准可用于白斑膏的质量控制 。
参考文献
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(收稿日期:2007-12-25 修回日期:2008-03-02)
卷柏是卷柏科卷柏 Se laginella tam ar iscina(Beauv.)Spr_
ing 的干燥全草 ,又名九死还魂草 ,生于干旱岩石上 ,广布全国各
地 , 有收敛、止血 、活血 、破血之效 ,可治经闭血淤、内痔出血 、脱
肛等证[1 ] 。穗花杉双黄酮(Amento flavone)是卷柏属植物中的一
种特征化学成分。笔者采用反相高效液相色谱(RP -HPLC)法
测定贵州和湖南卷柏药材中穗花杉双黄酮的含量 ,方法灵敏 、准
· 1170· China Pharm acy 2008 Vol.19 No.15 中国药房 2008年第 19卷第 15期
确 ,可为选择卷柏道地药材提供依据 。
1 材料
1.1 仪器
LC-2010A 型高效液相色谱仪 ,包括CLASS-VP 色谱工
作站 、UV -2010A 型检测器 、自动进样器 、柱温箱 、四元低压梯
度泵(日本岛津公司);KQ 3200型超声波清洗器(昆山市超声仪
器有限公司);A L104型电子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)。
1.2 试药
穗花杉双黄酮对照品 (河南大学天然药物研究所自制 , 纯
度:98%);甲醇为色谱纯 , 水为高纯水 , 其余试剂均为分析纯;
卷柏药材于 2007年 7月分别采于贵州都匀和湖南 , 由河南大学
天然药物研究所袁王俊副教授鉴定为卷柏科卷柏 S elaginella
tamariscina(Beauv.)S pring 的干燥全草 。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适应性试验
色谱柱:Purospher star RP -C 18(250 mm ×4.6 mm , 5
μm);流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液 (65∶35);流速:0.8
mL ·min -1;柱温:25 ℃;检测波长:337 nm 。理论塔板数按穗花
杉双黄酮峰计算应>6 000;穗花杉双黄酮峰与周围峰的最小分
离度R>1.5;保留时间为 22.232 min。色谱见图 1。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取穗花杉双黄酮对照品 1.00 mg , 加甲醇定容至 25
mL ,配制成浓度为 0.04 mg ·mL -1的对照品溶液 。
2.3 供试品溶液的制备
取贵州和湖南 2个产地的药材各适量 ,干燥后粉碎 ,过 60目
筛 ,分别精密称取 0.030 g , 置于 10 mL容量瓶中 ,加甲醇适量 ,
冷浸过夜。超声 40 min ,放冷 ,用甲醇定容至 10 mL ,摇匀 ,分别
用 0.45 μm 微孔滤膜滤过 ,即得供试品溶液 。
2.4 线性关系考察
分别精密吸取对照品溶液 3 、5 、7 、9 、12 、15 μL ,注入液相
色谱仪 , 保留时间为 19.82 min 。以穗花杉双黄酮进样量(X ,
μg)为横坐标 ,峰面积积分值(Y )为纵坐标进行线性回归 ,得回
归方程为 Y =6×106X —6 312.7(r =0.999 9)。结果表明 ,穗
花杉双黄酮进样量在 0.04 ～ 0.60μg 范围内与峰面积积分值
呈良好的线性关系 。
2.5 精密度试验
精密吸取同一对照品溶液 10μL ,重复进样 5次 ,分别测定
峰面积 。结果 ,峰面积的 RSD =1.9%,表明仪器精密度良好 。
2.6 重现性试验
精密称取贵州产卷柏 0.030 g , 共 6份 , 按“2.3”项下方法
制备供试品溶液 , 各进样 10μL , 测定峰面积 , 计算 。结果 ,
R SD =0.50%,表明方法重现性良好 。
2.7 稳定性试验
取贵州产卷柏同一供试品溶液 , 每隔 2 h进样 1次 , 测定
并记录峰面积 。结果 , RSD =0.20%,表明供试品溶液在 10 h
内稳定性较好 。
2.8 加样回收率试验
精密称取已知穗花杉双黄酮含量的贵州产卷柏样品 9份 ,
分别加入一定量的对照品 ,按“2.3”项下方法制备供试品溶液 ,
每次进样 10μL ,测定并计算加样回收率 ,结果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果(n=9)
Tab 1 Results of recovery test(n=9)
取样量/ g 样品含量/mg 加入量/mg 测得量/mg 回收率/ % x/ % RSD/ %
0.020 9 0.038 0 0.016 0.054 1 100.62
0.020 3 0.036 9 0.016 0.052 7 98.75
0.020 4 0.037 1 0.016 0.052 7 97.50
0.019 5 0.035 5 0.032 0.068 1 101.88
0.020 1 0.036 6 0.032 0.068 6 100.00 100.50 2.0
0.019 2 0.034 9 0.032 0.066 6 99.06
0.020 7 0.037 7 0.048 0.085 7 100.00
0.020 1 0.036 6 0.048 0.086 3 103.54
0.019 9 0.036 2 0.048 0.085 7 103.12
2.9 样品含量测定
取贵州和湖南 2个产地的药材各适量 , 干燥后粉碎 , 过 60
目筛 , 分别精密称取 0.030 g ,按“ 2.3”项下方法制备供试品溶
液 , 按上述色谱条件进样 10 μL , 按外标法以峰面积计算样品
含量 ,结果见表 2。
表 2 样品含量测定结果(n=3)
Tab 2 Results of content determination of samples(n=3)
批号 贵州产卷柏 湖南产卷柏含量/ g· g -1 RSD /% 含量/ g· g -1 RSD /%
20070726 0.19 1.04 0.50 0.98
20070727 0.20 0.81 0.51 0.89
20070728 0.18 0.64 0.52 1.10
3 讨论
双黄酮广泛存在于植物中 , 具有清除自由基 、保护脂质过
氧化 、降低微血管通透性等作用 [2 ] 。双黄酮作为卷柏类药材的
特征性成分 ,测定其含量具有特别的意义 。有报道 ,双黄酮的含
量测定采用 RP-C 18柱 , 经梯度洗脱后峰形拖尾严重 , 并且有
2个双黄酮完全没有分开;换用其它洗脱条件和反相柱 , 分离
均未获成功 [3 ] 。故大多数研究习惯采用正相柱测定双黄酮 ,但
其梯度洗脱的程序繁琐 , 且耗时长 。笔者通过反复摸索 , 选择
RP -C 18柱作为固定相 , 以甲醇-0.1%磷酸溶液作为流动相 ,
达到了较满意的分离效果。
本试验测得贵州和湖南卷柏中穗花杉双黄酮的含量分别
为 0.19%和 0.51%, 前有试验测得西藏产垫状卷柏所含穗花
杉双黄酮的含量为 0.36%[4 ] ,可见同种卷柏不同产地之间的穗
花杉双黄酮的含量相差较大 ,其规律有待进一步研究探讨 。
参考文献
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(收稿日期:2007-11-05 修回日期:2008-04-15)