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·中医药实验研究·
藤梨根提取物对小鼠染色体 DNA抗诱变作用的初步研究
崔向清 杨向竹 黄春芳 刘欢 郭雁
崔向清，女，硕士，讲师
(北京中医药大学基础医学院 北京 100029)
摘要:目的 观察藤梨根提取物对小鼠染色体 DNA 抗诱变效应，为藤梨根在化疗期间减毒作用提
供动物实验依据。方法 将昆明种小鼠随机分组，用环磷酰胺(CP)诱变 DNA，低、高剂量藤梨根
提取物灌胃 4 d，通过观察小鼠骨髓细胞嗜多染红细胞(PCE)微核(MN)的发生情况，研究藤梨根
的抗诱变作用。结果 低剂量的藤梨根提取物对环磷酰胺诱发的小鼠骨髓细胞微核发生有明显的
抑制效果，MN 发生率与模型组比较差异显著，P < 0. 05。结论 藤梨根提取物对环磷酰胺诱变导
致的 DNA损伤具有保护作用。
关键词:藤梨根;环磷酰胺;抗诱变;微核;小鼠
中图分类号:R285. 5
Anti-mutagenesis effect of extract of Tengligen (Radix Actinidiae Chinensis)
on chromosome DNA in mice
CUI Xiang-qing，YANG Xiang-zhu，HUANG Chun-fang，LIU Huan，GUO Yan
(School of Preclinical Medicine，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029)
Abstract:Objective To observe the anti-mutagenesis effect of extract of Tengligen (Radix Actinidiae
Chinensis) on chromosome DNA in mice，and provide the experimental base in animals for the
attenuation of Tengligen during chemotherapy.Method All Kunming mice were randomly divided into
groups，and the mutagenesis of DNA was induced with cyclophosphane (CP). The mice were given low-
dose and high-dose Tengligen extract intragastrically for 4 days. The anti-mutagenesis effect of Tengligen
was studied by observing the genesis of micronucleus (MN)of polychromatic erythrocyte (PCE). Result
The extract of Tengligen in low dose had a significant inhibitory effect on the genesis of MN of PCE.
The genesis rate of MN in the low-dose group was significantly different to that in the model group (P <
0. 05). Conclusion The extract of Tengligen has a preventive effect on DNA lesion induced by CP.
Key words:Tengligen (Radix Actinidiae Chinensis);cyclophosphane;anti-mutagenesis;micronucleus;mice
藤梨根是植物猕猴桃科猕猴桃属 Actinidia
Chinensis Planch.的根，又名阳桃根。性平，味咸酸、
涩，性凉，无毒。主要功效为清热解毒、祛风除湿、利
尿止血。现代药理研究表明藤梨根有抗肿瘤作用，常
用于消化道肿瘤，如胃癌、食道癌、肠癌等，亦用于其
他肿瘤的治疗，在很大程度上改善了病人体征。国内
应用藤梨根进行抗癌治疗的临床及基础研究的报道
也日益增多，如邹氏［1］等人采用 MTT 法研究中华猕
猴桃根乙酸乙酯提取物(主要含蒽醌类化合物)的抗
癌活性，发现其对白血病细胞的抑制率为 54. 2%，对
结肠低分化腺癌细胞抑制率为 60. 1%，提示猕猴桃根
提取物对肿瘤细胞有直接杀灭作用。但是藤梨根对
DNA的抗诱变作用及机制尚未见报道。拟从细胞、
染色体角度对藤梨根进行肿瘤预防机制的研究，并借
此探讨其细胞学基础。
1 材料与方法
1. 1 试剂与仪器
1. 1. 1 试剂
环磷酰胺由山西普德药业有限公司提供，批
号 20061102。
·114·
第 33 卷第 6 期 2010 年 6 月
Vol. 33 No. 6 Jun. 2010
北京中医药大学学报
Journal of Beijing University of Traditional Chinese Medicine
1. 1. 2 仪器
Olympus Vanox 万能显微镜，日本 Olympus 公
司;LD4-2 型离心机，北京医用离心机厂。
1. 2 动物与药材
1. 2. 1 动物
昆明种小鼠，雌雄各半，体重(20 ± 2)g，购于中
国人民解放军军事医学科学院实验动物中心，许可
证号 SCXK-(军)-2002-001。
1. 2. 2 药材
藤梨根，购于晨益饮片药材公司，经广安门医院
药检室鉴定为植物猕猴桃科猕猴桃属 Actinidia
Chinensis Planch.的根。
1. 3 方法
1. 3. 1 藤梨根提取物的制备
以煎煮法制备藤梨根提取物。将 300 g 藤梨根
以水浸泡后煎煮 4 ～ 6 h，并浓缩至 100 mL。4 ℃保
存备用。
1. 3. 2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验
将小鼠 40 只按随机对照表分为 6 组，雌雄各
半，每组 6 ～ 7 只，依次为空白对照组、模型(环磷酰
胺)组、低剂量Ⅰ组、低剂量Ⅱ组、高剂量Ⅰ组、高剂
量Ⅱ组。给药周期 4 d，灌胃体积为 0. 4 mL /只，空
白对照组、模型组灌蒸馏水;低剂量Ⅰ组、低剂量Ⅱ
组:每日给药量相当于藤梨根生药 30 g /(kg·周) ;
高剂量Ⅰ组、高剂量Ⅱ组:每日给药量相当于藤梨根
生药 60 g /(kg·周)。于给药第 4 天，即取材前 24
h，模型组、低剂量Ⅰ组、高剂量Ⅰ组均腹腔注射环
磷酰胺 40 mg /(kg·周)。第 5 天处死各组小鼠，迅
速取出双侧股骨，剔净肌肉，于 37 ℃生理盐水中将
股骨剪碎，吸取细胞悬液，1 000 r /min 离心 5 min，
弃上清，轻轻吹打后涂片，待载玻片干燥后，浸于甲
醇中固定 10 min，取出载玻片，扣染法 Giemsa 染色
15 min，PBS 缓冲液洗片。于 100 倍光镜下观察记
录各组小鼠产生微核的嗜多染红细胞数，每只小鼠
记录 1 000 个嗜多染红细胞，并计算各抗诱变组的
微核抑制率。
微核抑制率 =(模型组微核细胞数 －抗诱变组
微核细胞数)/模型组微核细胞数 × 100%
1. 4 统计方法
使用 SPSS 17. 0 统计软件进行数据分析，各组
数据采用 珋x ± s 表示。多组间比较采用秩和转换后
的方差分析，两两比较采用最小显著差法(LSD) ，以
0. 05 作为统计显著性水准。
3 结果
3. 1 藤梨根提取物对环磷酰胺诱导的小鼠嗜多染
红细胞微核的抑制作用
2 种剂量的藤梨根提取物均能拮抗环磷酰胺诱
导的嗜多染红细胞微核的产生，低剂量组抑制率为
51. 56%，其 MN发生率与模型组比较差异显著，P <
0. 05;高剂量组的抑制率为 35. 87%，但 MN 发生率
与模型组比较无统计学意义，结果见表 1。
3. 2 藤梨根提取物对小鼠体内自发微核的影响
低剂量Ⅱ组、高剂量Ⅱ组与模型组比较均有显
著性差异，P < 0. 05。但与空白组比较无差异，表明
藤梨根提取物对小鼠体内自发微核的产生没有影
响，结果见表 1。
表 1 藤梨根提取物对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率的影响(珋x ± s)
Table 1 Influence of Tengligen extract on MN rate of bone marrow PCE in mice(珋x ± s)
组别
Groups n
环磷酰胺 CP
［mg /(kg·
周 week) ］
灌胃剂量
Intragastrical
doses［g /(kg·
周 week) ］
嗜多染红细胞
微核总数
Total MN of PCE
(pieces)
微核率
MN rate
(‰)
微核抑制率
MN inhibition rate
(%)
对照组 Control group 5 22 11. 6 ± 4. 1*
模型组 Model group 6 40 92 34. 1 ± 3. 7
低剂量Ⅰ组 Low-dose group Ⅰ 7 40 30 52 19. 9 ± 9. 1* 51. 56
高剂量Ⅰ组 High-dose group Ⅰ 6 40 60 59 27. 9 ± 5. 2 35. 87
低剂量Ⅱ组 Low-dose group Ⅱ 7 30 40 14. 2 ± 5. 1*
高剂量Ⅱ组 High-dose group Ⅱ 7 60 30 10. 4 ± 5. 6*
F 10. 273
p 0. 000
注:与模型组比较* P < 0. 05。
Note:* P < 0. 05 compared with model group.
(下转第 416 页)
·214· 北京中医药大学学报 第 33 卷
表 3 3 批样品含量测定结果(n = 3)
Table 3 Determination results of 3 batches of samples(n =3)
特征峰
Characteristic peak
样品 1
Sample 1
样品 2
Sample 2
样品 3
Sample 3
2 2. 62 2. 71 2. 61
3 0. 38 0. 34 0. 34
4 0. 42 0. 45 0. 38
10 1. 09 1. 10 0. 83
14 0. 69 0. 75 0. 85
16(S) 2. 06 2. 15 1. 98
19 3. 82 3. 59 3. 45
22 0. 75 0. 75 0. 85
23 0. 28 0. 30 0. 30
26 0. 29 0. 30 0. 26
总量 Total 12. 40 12. 44 11. 85
3 讨论
中药的多指标定量分析是目前中药质量控制和
评价的一个技术难点，其根本原因在于可供定量用的
对照品有限。中药指纹图谱是近年来被国际公认的
控制中药或天然药物质量的有效方法，其优点在于可
全面反映中药复杂的化学成分及其相对比例。利用
中药指纹图谱，在化学成分无法准确确认、对照品无
法得到的情况下，选择指纹图谱中成分明确、对照品
可得的色谱峰为参照峰，以该参照物为对照品，以该
参照峰为基准，对指纹图谱中的其他分离良好且峰形
对称、稳定，但成分不明确的色谱峰进行相对定量，并
以其总量作为质量控制和评价的指标，不失为一种合
理有效和可行的方法。3 批降脂宁有效部位的含量
测定结果表明，本文建立的含量测定方法简便快捷，
结果准确可靠，可作为其质量控制和评价方法之一。
参考文献:
［1］中华人民共和国国家药典委员会.中华人民共和国卫生
部药品标准:中药成方制剂［M］. 北京:人民卫生出版
社，1997:116.
［2］关建红，薛征，任晋斌.降脂宁调脂及抗动脉粥样硬化的
研究［J］.中药药理与临床，2001，17(4) :29.
［3］梁吉春，石任兵，刘斌，等. 银翘散研究方法的新探讨
［J］.北京中医药大学学报，1999，22(1) :37 － 38.
［4］杨英，刘斌，毕力夫，等.降脂宁有效部位及其药效组分
对脐静脉内皮细胞损伤的保护作用［J］.北京中医药大
学学报，2009，32(3) :160 － 163.
［5］杨英，刘斌，毕力夫，等.降脂宁调血脂及抗脂质过氧化
作用的实验研究［J］. 中华中医药杂志，2009，24(5) :
647 － 649.
［6］石任兵，刘斌，石钺，等.中药复方化学与创新药物研究
［J］.世界科学技术———中医药现代化，2003，5(6) :
6 － 12.
(收稿日期:2010-03-12
檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪
)
(上接第 412 页)
4 讨论
微核是染色体的无着丝粒断片，或因纺锤体受损
而丢失的整条染色体，在细胞分裂后期仍然遗留在细
胞质中。末期之后就会形成 1个或几个规则的次核，
因比真正的细胞核小，被称为微核。凡能使染色体发
生断裂或使染色体和纺锤体连结损伤的因素，都可导
致细胞形成微核。因此将待测物质用微核试验进行
分析，并根据微核率发生情况来判断药物的抗癌性，
该方法有望应用于抗癌药物的筛选［2］。
本研究在于探索藤梨根提取物在机体遭受化学
诱变剂打击的情况下，保护染色体 DNA 免受损伤的
作用。实验结果表明，相当于生药 30 g /(kg·周)剂
量时，藤梨根提取物对环磷酰胺诱导的小鼠骨髓嗜多
染红细胞微核率的增高有显著的抑制作用，P <0. 05。
提示藤梨根在提高染色体 DNA稳定性上起到一定的
作用，从而抑制染色体畸变，有可能是防止癌肿发生
的机制之一。而实验结果中相当于生药 60 g /(kg·
周)剂量对环磷酰胺诱导的微核抑制作用与模型组对
比无差异，提示常用剂量的藤梨根可能有较强的
DNA损伤保护作用，亦有可能是样本量小引起的误
差所致，尚需在今后的实验中做进一步验证。同时 2
种剂量的藤梨根提取物均未显示有促进小鼠体内自
发微核产生的作用，但也未提示有抑制自发微核产生
的作用，表明藤梨根本身无致突变作用。近几年来，
在遗传毒理中微核技术也是较多使用的监测生物毒
害的有效方法之一。人们在不断努力去寻找抗有害
物质生物诱变的途径和物质。而藤梨根具有抗肿瘤、
调节免疫功能等作用，可用于治疗消化系统癌症、黄
疸、消化不良、呕吐、腹泻等症。因此应对藤梨根在细
胞学层面上的作用机理进行更深一步的研究，以期为
临床用药提供更为科学的实验依据。
参考文献:
［1］邹益友，谭桂山. 猕猴桃根抑制肿瘤细胞的实验研究
［J］.湖南中医药导报，1999，5(4) :37.
［2］李宏.微核试验的研究进展［J］.安徽农业科学，2009，37
(7) :2864 － 2866.
(收稿日期:2010-01-10)
·614· 北京中医药大学学报 第 33 卷