全 文 ：华西药学杂志W CJ· PS 2008, 23(5)：610 ～ 612
基金项目:广西自然科学基金项目(桂科自 0542055);广西大型仪器协作共用网资助项目(327-2006-016)
作者简介:周芳礼(1982-),男 ,湖南 ,正攻读天然有机化学专业的硕士学位。
＊通讯作者(Correspondentauthor), E-mail:hrs.3130064@163.com
薄层扫描法测定不同产地喜树果中的喜树碱
周芳礼 1 ,黄瑞松 1, 2＊ ,苏 青 2 ,吴 毅 3 ,陆 珍4 ,林翠梧 1
(1.广西大学化学化工学院 ,广西 南宁 530004;2.广西民族医药研究所 ,广西 南宁 530001;3.广西南宁食品药品检验所 ,广
西 南宁 530001;4.广西中医学院 , 广西 南宁 530001)
摘要:目的 采用薄层扫描法测定喜树果中的喜树碱 , 评价不同产地喜树果药材的质量。方法 采用羧甲基纤维素钠作为
黏合剂;展开剂为氯仿 -丙酮(7：3);单波长线性扫描法测定 , λS=360 nm。结果 喜树碱 0.0542 ～ 0.3252 μg与峰面积线的
性关系良好 , 回归方程为:Y=97.19X-55.07(r=0.9928), 平均回收率为 97.13%, RSD=1.76%(n=6)。结论 所建方法准
确可靠 , 不同产地喜树果药材中喜树碱含量有一定差异。
关键词:喜树果;喜树碱;TLCS;含量测定
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:1006-0103(2008)05-0610-03
DeterminationofcamptothecininCamptothecaacuminatafruitfrom differenthabitatsby
TLCS
ZHOUFang-li1 , HUANGRui-song1, 2＊ , SUQing2 , WUYi3 , LUZhen4 , LINCui-wu1
(1.ColegeofChemistryandChemicalEngineering, GuangxiUniversity, Nanning530004, China;2.GuangxiInstituteofMinorityNa-
tionalityMedicineandPharmacology, Nanning530001, China;3.FoodandDrugControlInstituteofNanningCity, Nanning530001,
China;4.GuangxiCollegeofTraditionalChineseMedicine, Nanning530001, China)
Abstract:OBJECTIVE ToestablishaTLCSmethodfordeterminationofcamptothecininCamptothecaacuminatafruit, andapply
themethodtoinvestigatethequalityofCamptothecaacuminatafruitfromdiferentproducingareas.METHODS SilicagelH-CMC-
Nathinlayerplatewasadoptedinthedeterminationwithchloroform-acetone(7：3)usedasdeveloper, Single-wavelengthandline-
arscanningofTLCwasused, andthedetectionwavelengthwasat360 nm.RESULTS Therewasagoodlinearrelationshipfor
Camptothecinwithintherangeof0.0542-0.3252 μg.TheregressionequationwasY= 97.19X-55.07(r=0.9928).Theaverage
recoverywas97.13% withRSDof1.76%(n=6).CONCLUSION Themethodisaccurateandreliable, andthecontentsofcamp-
tothecininCamptothecaacuminatafruitvarybydiferenthabitats.
Keywords:Camptothecaacuminatafruit;Camptothecin;TLCS;Contentdetermination
CLCnumber:R917 Documentcode:A ArticleID:1006-0103(2008)05-0610-03
喜树果是中国特有药用植物珙桐科喜树 Camp-
tothecaacuminataDecaisne的果实 ,主要分布于中国
西南各省区 ,尤以广西境内资源丰富 。广西壮 、瑶等
民族多用其治疗各种肿瘤[ 1] 。喜树果主要含生物
碱类成分 ,其中喜树碱(camptothecin)为主要活性成
分 ,同时也是有毒成分[ 2, 3] 。广西中药材标准收载
的喜树果药材标准尚无含量测定项 [ 1] ,而文献 [ 4, 5]
均采用 HPLC法测定喜树果中的喜树碱含量 ,未见
采用薄层扫描法(TLCS)测定的报道。为此 ,采用
TLCS测定喜树果药材中喜树碱的含量 ,并对不同产
地喜树果药材进行含量和质量比较分析。喜树果提
取液的薄层层析分离效果好 ,喜树碱荧光斑点集中 、
清晰 、稳定。
1 实验部分
1.1 仪器与试药
CS-9301PC薄层扫描仪(日本岛津);939型全
自动薄层制板仪(重庆南岸贝尔德仪器技术厂)。
喜树碱对照品 (广西河田药业有限公司 ,含量 >
98%);所用试剂为分析纯;40批不同产地喜树果样
品 ,由作者采集 ,并鉴定为珙桐科植物喜树 Campto-
thecaacuminataDecaisne的干燥果实。样品来源及
编号见表 1。
同一县(市)的 ,不同地方(或区域)采集 ,视为
不同的批次 ,以①、②…等表示。
DOI :10.13375/j.cnki.wcjps.2008.05.029
表 1 喜树果产地及采集时间
Table1 HabitatsandcolectionperiodofCamptothecaacuminatafruit
No. 产地 采集时间 No. 产地 采集时间
1 广西南宁市(广西药用植物园)① 2004.08 21 广西靖西县 2003.09
2 广西南宁市(广西药用植物园)② 2004.09 22 广西蒙山县 2005.09
3 广西南宁市(广西药用植物园)③ 2005.08 23 广西金秀县① 2004.09
4 广西南宁市(广西中医学院) 2005.08 24 ② 2005.09
5 广西桂林市(广西植物研究所) 2005.08 25 广西龙州县 2006.08
6 广西兴安县① 2004.09 26 贵州省① 2002.12
7 ② 2005.09 27 ② 2004.10
8 广西永福县① 2005.09 28 贵州黎平县① 2005.10
9 ② 2005.09 29 ② 2005.10
10 广西柳江县 2005.09 30 贵州从江县① 2005.11
11 广西河池市 2002.09 31 ② 2005.11
12 广西巴马县 2004.09 32 贵州瓮安县 2005.11
13 广西东兰县① 2002.08 33 云南文山州 2004.10
14 ② 2006.08 34 云南马关县 2004.11
15 广西百色市① 2003.09 35 云南昆明市 2005.09
16 ② 2004.08 36 云南西畴县 2005.10
17 ③ 2004.09 37 重庆万州区① 2004.12
18 广西乐业县 2002.08 38 ② 2006.10
19 广西田林县 2004.09 39 四川都江堰 2006.10
20 广西那坡县 2005.09 40 上海杨浦区 2005.09
1.2 方法与结果
1.2.1 溶液的制备 取 10mg喜树碱对照品 ,精密
称定 ,置 200ml量瓶中 ,加 180ml甲醇 ,超声处理 3
min, 再加甲醇至刻度 ,摇匀 ,即得对照品溶液 。取
喜树果药材粉末 0.2 g(过 60目筛),精密称定 ,置
25 ml具塞锥形瓶中 ,精密加入 15 ml甲醇 ,称定重
量 ,于 60℃水浴中温浸 1 h(不时轻轻振摇),冷却至
室温 ,再称定重量 ,用甲醇补足减失的重量 ,摇匀 ,过
滤 ,取续滤液 ,即得供试品溶液 。
1.2.2 色谱与扫描条件 薄层板为硅胶 H-0.5%
CMCNa板(110℃活化 30 min);展开剂为氯仿 -丙
酮(7：3);上行展开 ,展距 15cm。取 1、3μl对照品
溶液 ,样品溶液 5 ～ 10 μl,交叉点于同一薄层板上 。
以紫外光灯(360 nm)定位 ,单波长线性扫描 , λS=
360nm,狭缝 0.4×10.0 nm, SX=3。外标两点法计
算 。
1.2.3 线性关系 吸取 1、2、3、4、5、6μl54.2 μg·
ml-1的对照品溶液 , 分别点于同一硅胶 H薄层板
上 ,按 “ 1.2.2”项条件展开 、测定。以对照品量(μg)
为横坐标 、斑点峰面积积分值为纵坐标 ,绘制标准曲
线 ,回归方程为:Y=97.19X-55.07(r=0.9928)。
结果表明 ,喜树碱 0.0542 ～ 0.3252 μg与峰面积的
线性关系良好。
1.2.4 精密度试验 精密吸取 5 μl同一供试品(7
号)溶液 ,分别于同一块薄层板上点样 5个 ,按 “ 1.
2.2”项下条件展开 、扫描测定 。求得其峰面积积分
值的 RSD=1.46%;另精密吸取 5 μl同一供试品溶
液 ,分别于 5块不同薄层板上点样 ,按 “1.2.2”项条
件展开 、扫描测定 , 求得喜树碱含量的 RSD=
3.01%;对同一斑点连续扫描测定 5次 ,其峰面积积
分值的 RSD=1.67%。说明仪器的精密度较高。
1.2.5 重复性试验 分别精密吸取 5 μl同一批号
药材(7号)制备的 6份供试品平行溶液 ,于同一薄
层板上点样 ,按 “1.2.2”条件展开 、扫描测定。计算
喜树碱的含量 ,求得 RSD=3.08%,说明方法重复性
好。
1.2.6 稳定性试验 取同一供试品(7号)溶液 ,分
别于 0、2、4、6、8、24 h各点样 5 μl,按 “1.2.2”项条
件展开 、扫描测定 。计算喜树碱含量的 RSD=
1.57%。说明供试品溶液 24h内稳定性良好。
1.2.7 加样回收率试验 取 0.1 g喜树果样品粉
末(过 60目筛)各 6份 ,精密称定 ,精密加入 15 ml
喜树碱对照品甲醇溶液 8.52 μg·ml-1。按 “ 1.2.1”
项下方法制备供试品溶液 ,并按 “1.2.2”项下条件
展开 、扫描测定(表 2)。
表 2 加样回收率试验结果(mg, n=6)
Table2 Resultsofrecoverytests(mg, n=6)
Orignal Added Detected Recovery/% X/% RSD/%
0.1285 0.1278 0.2517 96.40 97.13 1.76
0.1272 0.1278 0.2541 99.30
0.1270 0.1278 0.2504 96.56
0.1292 0.1278 0.2499 94.44
0.1270 0.1278 0.2520 97.81
0.1284 0.1278 0.2540 98.28
1.2.8 样品的测定 分取表 1的 40批样品各 0.2 g,
611第 5期 周芳礼 ,等。薄层扫描法测定不同产地喜树果中的喜树碱
精密称定 ,按 “1.2.1”项下方法制备供试品溶液 ,按
“1.2.2”项下方法测定 ,结果见表 3和图 1。
表 3 不同产地喜树果药材喜树碱的测定结果(以药材干燥品计)
Table3 Resultsofcontentassayofsamplesfromdiferenthabitats
No. 含量 /% No.含量 /% No. 含量 /% No.含量 /%
1 0.169 11 0.110 21 0.094 31 0.171
2 0.088 12 0.100 22 0.152 32 0.157
3 0.085 13 0.132 23 0.127 33 0.130
4 0.137 14 0.213 24 0.204 34 0.128
5 0.172 15 0.092 25 0.162 35 0.038
6 0.230 16 0.156 26 0.129 36 0.110
7 0.142 17 0.101 27 0.130 37 0.109
8 0.124 18 0.108 28 0.131 38 0.126
9 0.157 19 0.103 29 0.151 39 0.235
10 0.250 20 0.094 30 0.237 40 0.194
图 1 不同产地喜树果药材中喜树碱含量的柱型图
Fig1 Barchartofcontentassayofsamplesfromdifferenthibitats
2 讨论
喜树碱在 360 nm有强吸收峰 ,由于选择的检测
波长(360nm)与背景波长(370 nm)较接近 ,采用双
波长测定时效果不佳 ,故选用单波长检测 。线性扫
描图较锯齿扫描图圆滑 ,且噪音较小 ,故采用线性扫
描方式 。实验考察了氯仿 -丙酮(7：3)、氯仿 -丙
酮 -甲醇(8：2：1)、苯 -丙酮 -甲醇(9：2：0.5)
等 3种展开剂。前两种层析效果较好 ,斑点集中 、主
斑点的 Rf值适中 ,故采用氯仿 -丙酮(7：3)作为
展开剂 。还比较了硅胶 G板 、硅胶 G-CMCNa板 、
硅胶 H板 、硅胶H-CMCNa板的展效果 ,结果显示 ,
硅胶 G-CMCNa板展开的斑点扫描时有背景干扰 ,
硅胶 H-CMCNa板干扰较小 ,斑点圆亮 ,扫描数据
稳定 ,硅胶 H板和硅胶 G板硬度不够 ,难以点样 ,故
选择硅胶 H-CMCNa薄层板。
根据喜树碱在 70%乙醇 、乙醇 、甲醇 、氯仿 -乙
醇(1：1)中均有一定溶解度的特性 ,参照文献 [ 4] ,
曾用上述溶剂分别采用水浴温浸 、超声方法提取 。
两种方法的 TLC色谱图均可检出喜树碱斑点 ,层析
效果良好 ,但水浴温浸提取喜树碱的含量高于超声
提取。溶剂方面 ,上述各种溶剂提取液均可不同程
度地检出喜树碱 ,但含量有差异 ,其中甲醇 >70%乙
醇 >乙醇 >氯仿 -乙醇(1：1)。故选择以甲醇作
为溶剂水浴温浸提取。曾采用 HPLC法对温浸提取
的药材破碎度 、提取溶剂 、水浴温度和提取时间等 4
个因素进行正交试验 ,筛选出最佳提取条件为:药材
破碎度为过 60目筛的粉末 ,以甲醇作为提取溶剂 ,
于 60℃水浴温浸提取 60 min。所用提取方法在溶
剂 、药材破碎度 、水浴温度 3个方面与文献 [ 4] 有差
异。经方法学考察 ,文中 TLCS法可作为喜树果中
喜树碱含量测定的方法之一 。
40批药材样品采自不同的产区(包括部分同一
产地不同区域采集的样品),样品涉及 6个省(区或
市),批次多 、涉及面广 ,具有一定的代表性 。试验
结果表明 , 40批药材中喜树碱的含量为 0.038% ～
0.250%,不同产地含量有较大差异 。其中 ,广西柳
江县产喜树果中喜树碱的含量最高 (0.250%),云
南昆明市昆明植物研究所最低(0.038%), 前者是
后者的 6.6倍 。同一省区各地药材含量的比较:广
西含量最高的为广西柳江县(0.250%),最低的为
广西南宁广西药用植物园③(0.085%);贵州最高
的为贵州从江县①(0.237%),最低的为贵州省①
(0.129%);云南最高的为云南文山州(0.130%),
最低为云南昆明市昆明植物研究所(0.038%);其
中广西南宁市内广西药用植物园①、②、③和广西中
医学院(1 ～ 4号)、广西东兰县①和②(13、14号)、
贵州从江县①和②(30、31号)等虽然为同一地区 ,
但区域不同 ,样品含量亦有差异 。甚至在同一地点
不同植株的差异也较大 , 如广西药用植物园 ①
0.169%、②0.088%、③0.085%。这可能与喜树的
生长环境和树龄有关。
致谢:试验所用部分样品分别由中国科学院昆明植物研究所
杨世雄研究员 、四川中药研究院舒光明研究员 、中国科
学院广西植物研究所梁小燕副研究员 、广西药用植物
园药用植物保育中心等采集提供。
参考文献:
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[ 5] 黄瑞松 ,叶云峰 ,苏青 ,等.复生康胶囊质量标准的研究 [ J].
中草药 , 2003, 34(8):698-701.
收稿日期:2007-11
612 华 西 药 学 杂 志 第 23卷