全 文 ：291※营养卫生 食品科学 2004, Vol. 25, No. 11
藤茶多糖的抗氧化作用研究
罗祖友1，2，严奉伟1，3，薛照辉4，吴谋成1，*
(1.华中农业大学食品科技学院，湖北 武汉 430070；2.湖北民族学院生物科学与技术学院，湖北 恩施
445000 ；3.长江大学生命科学学院，湖北 荆州 434025； .天津大学农业与生物工程学院，天津 300072)
摘 要：目的: 探讨藤茶多糖的体内外抗氧化作用。 方法: (1)测定藤茶多糖(Ampelopsis Grossedentata polysaccharide，
AGP)的还原能力;(2)测定AGP在化学模拟体系、体外血清的抗活性氧能力；(3)测定AGP对小鼠肝匀浆、小鼠肝线
粒体MDA生成的影响；(4)用分光光度法测定H2O2诱导小鼠红细胞溶血和Fe2+-VC诱导的肝线粒体肿胀程度来研究
AGP的抗氧化效果；(5)小鼠随机分成对照与AGP组,腹腔注射AGP 150mg/kg·bw·d 12d后,测定小鼠血清抗活性
氧能力及肝组织MDA含量。 结果: AGP具有一定的还原能力，一定浓度范围内具有显著的体外抗活性氧能力并能
抑制小鼠肝组织及肝线粒体MDA的生成，可减少红细胞诱导溶血和肝线粒体肿胀程度,对小鼠体内肝组织MDA生
成的抑制作用显著。 结论: AGP一定浓度范围内具有抗氧化作用。
关键词：藤茶多糖；抗氧化；活性氧；M D A；体外；体内
The Anti-oxidative Effect of Polysaccharide from Ampelopsis Grossedentata
LUO Zu-you1,2，YAN Feng-wei1,3，XUE Zhao-hui4，WU Mou-cheng1,*
(1.College of Food Science and Technology,Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China；
2. School of Biological Science and Technology,Hubei Institute for Nationalities, Enshi 445000, China；
3.College of Life Science,Yangtze University, Jinzhou 434025, China；4. College of Agriculture and
Bioengineering, Tianjin University， 300072, China)
Abstract ：Objective: To probe into the antioxidation mechanism of Ampelopsis Grossedentata p lysacch ride(AGP)in vitro and
vivo. Methods:(1)The deoxidazation of AGP was measured to analyse the antioxidation activity of it;(2)The scavenging effect of
AGP on active oxygen in modified chemical systems and in mice serum were detected ;(3)The content of MDA in mice liver and
liver mitochondria in vitro were observed; (4)The hemolysis of mice RBC and the swelling of mitochondria induced by Fe2+-VC were
determined by spectrophotometric methods; (5) The mice were randomly divided into control group and AGP group. After ip
150mg/kg·d AGP for 12d,the effect of AGP on active oxygen in mice serum and MDA in mice liver were measured. Results:
In vitro, AGP had deoxidazation effect, could scavenge active oxygen , inhibit the formation of MDA in mice liver and mitochondria,
the hemolysis of mice RBC and the swelling of mice liver mitochondria . In vivo, there was a significant difference between the
control group and the AGP group(ip 150mg/kg·d)in MDA value of ice liver homogenate.Conclusion: AGP has antioxidation
effects within a range of certain concentration.
Key words：Ampelopsis Grossedentata polysaccharide(AGP) ； ntioxidation ；ac ve oxygen ；MDA；in vitro；in vivo
中图分类号：Q539 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2004)11-0291-05
藤茶，学名显齿蛇葡萄Ampelopsis grossedentata
(Hand-Mazz)W.T.Wang，系葡萄科蛇葡萄属植物，多
呈野生状态分布于我国湖南、湖北西部、贵州、广西
等地,部分产地已发展野转家生以扩大资源量[1-2]。藤茶可
全株药用，其味甘淡，性凉，具有清热解毒、抗菌
消炎祛风湿、降血糖等功效，我国民间常采集其嫩茎
叶，经加工揉制、干燥，制成保健茶饮用，至今已
有数百年的历史。近年来，关于藤茶中黄酮类成分特
别是二氢杨梅素的分离鉴定及其生物活性的研究报道较
多[3-4]，而对藤茶多糖的研究尚未见报道。本文报道藤
收稿日期：2004-09-01*通讯联系人
基金项目：湖北省“十五”重点科技攻关项目(2001AA204A03)
作者简介：罗祖友(1963-)，女，副教授，博士研究生，研究方向为天然产物与功能食品化学。
2004, Vol. 25, No. 11 食品科学 ※营养卫生292
茶多糖的抗氧化作用。
1 材料与方法
1.1材料
1.1.1藤茶多糖(Ampelopsis Grossedentata
polysaccharide，缩略AGP)本实验室自制。原料购自鄂西
藤茶公司，经粉碎并过20目筛得藤茶粗粉，按水提醇沉
法提取并经Sevag 法除蛋白，制备得到水溶性藤茶多糖
AGP，经硫酸-苯酚法检测AGP总糖含量43.4%(另文报道)。
1.1.2MDA测定及活性氧测定试剂盒 购自南京建
成生物工程研究所；VE(1028 I.U/g) ：购自Sigma公司；
牛血清白蛋白，BR生物试剂，北京双旋微生物培养基
制品厂；亚油酸：生化试剂，北京石景山化工厂；其
它为国产分析纯试剂。
1.1.3昆明种小白鼠，雄性，体重20±2g，购自湖
北省医学科学院医学实验动物中心。
1.1.4主要仪器 玻璃组织匀浆器；UV-265 Shimadzu
紫外可见分光光度计；低温高速离心机；恒温水浴锅。
1.2方法
1.2.1AGP还原能力的测定 参考Oyaizu的方法[5]并
略作改进。基本操作步骤为：1ml的AGP溶液+0.2ml
0.2mol/LPBSpH6.6+0.5ml1%K3[Fe(CN)6]于试管中混匀，
50℃水浴中反应20min，流水速冷，加入1ml10%三氯
乙酸混匀，以3000r/min离心10min，取1.5ml上清液，
加0.2ml1%FeCl3和3ml蒸馏水摇匀，5min后以蒸馏水调
零，测定A7 0 0。A7 0 0越大，表示还原能力越强。
1.2.2化学模拟体系中AGP抗活性氧能力的测定 参照
活性氧测定试剂盒说明书测定A550并计算抗活性氧单位。
定义：每毫升样品液在37℃下反应1min，使反应体系中
H2O2浓度降低1mmol/L为一个抗活性氧单位(U)。
1.2.3AGP对小鼠血清抗活性氧能力影响的分析 取
0.1ml稀释20倍的小鼠血清+0.1mlAGP溶液混匀于37℃温
育3h后，再按活性氧试剂盒说明书方法测定A550(同上)，
血清对照以0.1ml生理盐水代替AGP溶液。
1.2.4AGP对小鼠肝匀浆MDA生成的影响[6,7] 取新
鲜的小鼠肝组织以冰冷的生理盐水洗净血渍，以滤纸吸
干水分后称重，按1:9取相应体积的冷生理盐水于冰浴
中分步将肝组织剪碎、在玻璃组织匀浆器中匀浆制成匀
浆液，以3500r/min离心20min，上清液即为10%肝组
织匀浆液。取0.2ml10%肝匀浆液+0.1mlAGP溶液于试管
中混匀，37℃温育1h(对照以等体积生理盐水代替AGP
溶液)后，冰浴冷却，再按MDA测定试剂盒方法操作，
测定A532并计算MDA含量，以牛血清白蛋白为标准，
采用考马斯亮蓝法[8]测定肝匀浆蛋白质含量。
相应取另两组试管分别测定AGP对FeSO4与H2O2诱
导小鼠肝匀浆产生MDA的影响。一组试管加0.1ml的
1mmol/L FeSO4，一组加0.1ml的1mmol/L H2O2，然后各
管加0.1ml的10%肝匀浆液及0.1ml的相应样品溶液混匀于
37℃温育1h(对照以等体积生理盐水代替AGP溶液)，其
余步骤同前，测定A532并计算MDA含量。
1.2.5AGP对H2O2诱导小鼠红细胞氧化溶血的影响[9]
以小鼠眼眶取血，加入Alsever抗凝剂后以3000×g离心
10min分离得到红细胞，用生理盐水洗涤三次后，再以
生理盐水制备成0.5%小鼠红细胞悬浮液。AGP样品组取
1ml红细胞悬浮液与0.2ml相应AGP溶液混匀，最后加0.
1ml100mmol/L H2O2溶液混匀，正常组不加AGP样品液和
H2O2溶液而以等体积生理盐水代之，对照组以等体积生
理盐水代替AGP样品液，其余同样品组，于37℃温育
1h后，以生理盐水稀释6倍，1000×g离心10min，取
上清液，以生理盐水调零测定A415。
1.2.6AGP对小鼠肝线粒体脂质过氧化的影响 参照
文献[10,11]的方法。 取新鲜的小鼠肝组织以冷的生理盐
水洗净血渍吸干表面水分后，按1:9的比例加冰冷的
pH7.4等渗PBS(5mmol/L PBS，pH7.4，含0.15mol/L NaCl)
用玻璃匀浆器在冰浴中匀浆制成10%肝组织匀浆液，4
℃下以1000×g离心15min，收集上清液，再以10000
×g离心15min，收集沉淀并以等渗PBS液洗涤沉淀2次，
再以等渗PBS将沉淀分散制成悬液，用考马斯亮蓝法测
定该悬浮液的蛋白质含量，调整成蛋白质含量为0.5mg/
ml的线粒体悬浮液。
小鼠肝线粒体肿胀度的测定 样品反应体系为0.
4ml AGP溶液+3.0ml线粒体悬浮液+0.4ml 0.5mmol/L
FeSO4 +0.4ml 0.5mmol/L VC溶液，迅速混匀后，以PBS
溶液调零，测定0、10、20、30min时的A520，用吸
光度的降低幅度表示线粒体的肿胀度，正常组以等体积
PBS代替AGP及FeSO4和VC液，对照组以等体积PBS
代替A G P溶液，其它同样品体系。
小鼠肝线粒体脂质过氧化生成MDA的测定 样品体
系为1.0ml线粒体悬浮液+0.4ml AGP溶液+0.4ml 0.5mmol/L
FeSO4 + 0.4ml 0.5mmol/L VC溶液，正常组以等体积PBS代
替样品及FeSO4和VC液，对照组以等体积PBS代替AGP
溶液，混匀于37℃温育1h后；对应取0.1ml温育后的各
管溶液，按MDA试剂盒方法测定A532并计算MDA含量。
1.2.7AGP在小鼠体内的抗氧化作用[12] 小鼠随机分成
2组，每组10只。AGP组腹腔注射0.2ml AGP/只.d(ip.
150mg/kg·bw·d)，对照组注射等体积生理盐水。小
鼠喂养按常规条件进行。连续给药12d后，眼眶取血分
离小鼠血清，以生理盐水稀释20倍参照活性氧测定试剂
293※营养卫生 食品科学 2004, Vol. 25, No. 11
盒说明书测血清抗活性氧的能力；取新鲜小鼠肝组织按
1.2.4方法制备成10%肝匀浆液,再按MDA测定试剂盒说明
书测定A532并计算MDA含量。
1.2.8统计学分析：用X±S表示，采用SAS软件进
行t 检验。
2 结果与分析
2.1AGP的还原能力
如图1所示，0.05mg/ml AGP体系的 700与水体系A700
值相当，说明该浓度下AGP没有还原能力(AGP浓度均指
加入反应体系的样品起始浓度，后同)。其后3个浓度，
随着浓度的增大，A700值也增大，AGP的还原能力在
试验浓度范围内有较好的量效关系。以2μl/ml VE和30
μg/ml VC 体系的还原能力作参比，5mg/ml AGP还原能
力强于前两者。以相同起始样品浓度比较A700值，AGP
还原能力明显低于VE和VC的还原能力，但AGP还原能
力的存在说明AGP具有表现抗氧化作用的可能性。
2.2AGP在化学模拟体系中的抗活性氧能力
由表1可看出，低浓度(0.05 mg/ml)AGP抗活性氧单
位为负值，说明它不仅没有抗活性氧能力，甚至还有助
氧化作用。后3个浓度体系则随AGP浓度升高而表现出
较强的抗活性氧能力，并呈量效关系。AGP能抑制活性
氧的结果印证了其还原能力的存在。
2.3 AGP对小鼠血清体外抗活性氧能力的影响
在化学模拟体系测定的基础上，测定3个有效浓度
AGP对小鼠血清抗活性氧能力的影响(表2)。与对照相
比，3个浓度的AGP都能显著提高小鼠血清抗活性氧单
位，量效关系明显。
2.4AGP对H2O2诱导的体外小鼠红细胞(RBC)溶血的抑
制作用
红细胞在体外因自身氧化或诱导氧化而发生溶血[9]。表
3显示,4种浓度的AGP在抑制H2O2诱导的小鼠红细胞溶血
时, 0.05～2.00 mg/ml浓度范围内表现为一定的量效关系,而
AGP 浓度(mg/ml)A550 抗活性氧单位 (U/ml)
0(CK) 0.532±0.010
0.05 0.639±0.04b －21.4
0.50 0.428±0.022b 20.8
2.00 0.177±0.012b 70.9
10.00 0.081±0.013b 90.0
表1 AGP在化学模拟体系中的抗活性氧能力 ( X±S,n=3)
b: 与CK相比p ＜ 0.01。
AGP 浓度(mg/ml)A550 抗活性氧单位 (U/ml)
0(CK) 0.828±0.015 104.4
0.50 0.741±0.011b 255.8
2.00 0.589±0.008b 520.4
10.00 0.123±0.013b 1331.4
表2 AGP对小鼠血清体外抗活性氧能力的影响( X±S,n=3)
b: 与CK相比p＜ 0.01。
组 别 AGP 浓度 A415 溶血率 溶血抑制率
(mg/ml) (%) (%)
正常组(CK) 0 0.303±0.012b 54.6
CK+H2O2 0 0.555±0.020100 —
H2O2+AGP0.050.442±0.024b 79.6 20.4
H2O2+AGP0.500.435±0.017b 8.4 21.6
H2O2+AGP2.000.391±0.019b 70.5 29.5
H2O2+AGP10.00.642±0.022b 115.7—15.7
表3 AGP对H2O2诱导的体外小鼠红细胞(RBC)
溶血的抑制效果( X±S,n=3)
b: 与CK+H2O2组比较p＜ 0.01。
AGP浓度(mg/ml) 无诱导温育组 Fe
2+诱导温育组 H2O2诱导温育组
M D A MDA生成抑制 M D A MDA生成抑制 M D A MDA生成抑制
(nmol/mg·p) 率 (%) (nmol/mg·p) 率 (%) (nmol/mg·p) 率 (%)
0(CK) 2.92±0.16 — 8.94±0.22 — 3.92±0.25 —
0.05 2.62±0.18 10.44 8.78±0.20 1.77 3.80± .13 2.99
0.50 2.36±0.19a 19.05 8.08±0.17b 9.56 3.56±0.14 9.11
2.00 2.08±0.17b 28.82 7.26±0.25b 18.76 2.38±0.21b 39.44
10．00 2.23±0.19b 23.74 7.49±0.24b 16.21 2.62±0.18b 33.29
表4 AGP对体外小鼠肝组织匀浆MDA生成的影响( X±S,n=3)
a: 与CK相比p ＜ 0.05; b: 与CK相比 p＜ 0.01 。
2004, Vol. 25, No. 11 食品科学 ※营养卫生294
10.00 mg/ml浓度却表现了促进溶血的效应，可能是样品
浓度过高使反应体系渗透压超出了红细胞的生理渗透压
所致。
2.5AGP对体外小鼠肝组织匀浆MDA生成的影响
表4说明，AGP在0.05～10.00 mg/ml浓度范围内对
3种温育情况下的小鼠肝组织匀浆MDA的生成均有抑制
作用，前3个浓度呈量效关系，但第4浓度的抑制效果
开始表现了随浓度升高而下降的趋势；AGP对H2O2诱
导组MDA形成的抑制作用强于同浓度下的Fe2+诱导组和
无诱导组。其原因有待进一步分析。
2.6AGP对体外小鼠肝线粒体脂质过氧化的影响
2.6.1AGP对小鼠肝线粒体肿胀度的抑制作用
由图2可见，反应体系A520随时间延长而下降，说
明肝组织线粒体因膜氧化损伤而肿胀。由于各体系因加
样浓度不同而导致起始吸光度值(A520)不同，这一点与文
献[13]等表现不同。比较30min各体系A520下降率，以对
照组最大(8.9%)，正常组(5.1%)，AGP组由低浓度到高
浓度的下降率分别5.8%、3.0%、4.1%和2.9%，均表
现了抑制线粒体肿胀的作用，但量效关系不十分明显。
2.6.2AGP对小鼠肝线粒体MDA产生的影响
表5显示，AGP对Fe2+-VC诱导的小鼠肝线粒体MDA
生成的影响表现为:最低浓度(0.05/ mg/ml)有促进MDA生成
的作用，次低浓度(0.50/ mg/ml)无影响，但与对照相比差
组 别 血清抗活性氧单位 肝匀浆M D A
(U/ml) (nmol/mg·p)
CK(ip.生理盐水) 1278.3±163.91.92±1.21
AGP(ip.AGP 150mg/kg·d)1290.0±43.30.77±0.23b
表6 腹腔注射AGP对小鼠体内血清活性氧及肝
组织MDA生成的影响( X±S,n=10)
b: 与CK相比p＜ 0.01。
异不显著，然后随浓度增大而表现为递增的抑制作用。
2.7腹腔注射AGP对小鼠体内血清活性氧及肝组织
MDA的影响
表6显示，经腹腔注射AGP 12d后，小鼠肝匀浆
的MDA值与对照组比，有明显下降，差异达到极显著
水平,表明AGP有减少小鼠体内脂质过氧化产物生成的作
用。注射AGP后的小鼠血清抗活性氧单位平均值也高于
对照，但差异不显著，可能与机体维持正常的新陈代谢
必须保持适度的自由基水平有关[14]。
3 讨 论
藤茶作为一种民间保健茶，具有良好的药理效果，
无毒副作用[2][15]，以前对其功能成分的研究集中在藤茶黄
酮上[3，4]，而藤茶多糖(AGP)的生物活性尚无报道，本实
验的结果表明：藤茶多糖也是藤茶的功能成分之一，研
究其生物活性有利于全面开发利用藤茶资源的功成因子。
活性氧与自由基对人体健康的影响深刻而广泛，如
肿瘤发生、辐射致癌、心脑血管疾病、器官的缺血再
灌流、药物中毒、人体衰老等过程都涉及到自由基和活
性氧[14]，本实验结果提示，AGP可能有防衰老、抗肿
瘤等生物活性，相关研究正在进行中。
本文通过测定AGP的还原能力、在化学模拟体系中
的抗活性氧能力，从化学本质上证实了AGP具有一定的
抗氧化能力；测定AGP对小鼠血清抗活性氧能力、小鼠
红细胞溶血、小鼠肝组织匀浆及肝线粒体脂质过氧化产物
MDA生成的影响,表明AGP在一定浓度范围内可提高体外
小鼠血清抗活性氧能力，能抑制小鼠红细胞溶血，抑制
小鼠肝组织匀浆及肝线粒体MDA的生成和肝线粒体肿
胀，剂量-效应关系较明显，说明AGP在体外对小鼠细
胞器、细胞及组织具有抗氧化作用；AGP对小鼠体内血
清抗活性氧能力没有显著的提高，可能与机体内需维持一
定的活性氧水平有关，但对小鼠体内肝组织MDA的生成
也有显著的抑制效果,说明AGP具有一定的体内抗氧化作
用。三个层次的研究结果表明：AGP具有抗氧化作用。
AGP抗氧化在各种体系下最佳的浓度范围以及AGP
纯化分离组分的抗氧化作用有待进一步研究。
参考文献：
组 别 AGP 浓度 M D A MDA 生成
(mg/ml)(nmol/mg·p) 抑制率(%)
正常组(CK) 0 7.8±0.7b —
CK+Fe2+-Vc 0 21.1± .4 —
Fe2+-VC+AGP0.05 22.1±2.0 —4.5
Fe2+-VC+AGP0.50 21.1± .9 0
Fe2+-VC+AGP2.00 14.7±1.1b 30.3
Fe2+-VC+AGP10.00 13.7±1.2b 35.0
表5 AGP对小鼠肝线粒体MDA产生的影响( X±S,n=3)
b: 与CK+Fe2+-VC组相比，p ＜ 0.01。
295※营养卫生 食品科学 2004, Vol. 25, No. 11
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藠藠头中抗菌活性成分的抑癌作用及机理研究
孙运军，柏建山，陈 宇，孟 松，谢伟岸，丁学知，莫湘涛，夏立秋*
(湖南师范大学生命科学学院，湖南 长沙 410081)
摘 要：从藠头(Allium chinense G.Don)中提取的活性物质在不同温度处理下具有良好的热稳定性。利用其活性物
质处理肝癌(HepG-2)细胞和海拉(Hela)细胞，发现该物质对两种癌细胞生长都有抑制作用，且呈浓度依赖性。采用
流式细胞仪分析发现，该物质可改变两种癌细胞的细胞周期，但不诱导细胞凋亡。通过体外对木瓜蛋白酶和蛋白
酶K活力的测定，该物质对木瓜蛋白酶活力有较大的影响，对蛋白酶K活力影响不明显，这可能与木瓜蛋白酶的
活性中心含巯基有关。分析认为藠头活性成分的抑癌作用可能是通过影响癌细胞内象木瓜蛋白酶等一些活性中心含
巯基的酶的活力来实现的。
关键词：藠头；抗菌活性成分；抑癌作用；细胞周期；木瓜蛋白酶
Anticancer Effects and Possible Mechanism of Antibacterial
Components from Allium chinense
SUN Yun-jun，BAI Jian-shan，CHEN Yu，MENG Song，XIE Wei-an，
DING Xue-zhi，MO X ang-tao，XIA Li-qiu*
(College of Life Science, Hunan Normal University, Changsha 410081, China)
Abstract：This study showed that the antibacterial components from Allium hinense kept stable u der different temperature.
After treated by the components, the proliferation of HepG-2 and Hela cells were inhibited and their cell cycle distribution were
changed. Analysis revealed that the components didnt induce apoptosis. The components had more inhibitive effect on the enzyme
收稿日期：2004-07-16*通讯联系人
基金项目：湖南省重点攻关项目(03SSY3107)
作者简介：孙运军(1976-)，男，在读博士，主要从事微生物科学研究。