全 文 ：食品研究与开发2008年1月第29卷第1期
浊度法既能定性又能定量的连续检测动态聚集过程,
且和聚集物的重量变化具有相关性,结合PMSF的作
用可以对组分稳定的体系的聚集行为进行研究。用此
方法研究温度对聚集过程的影响发现:高温有利于多
肽的聚集,而低温条件下最终稳定时浊度最大,这是由
分子间相互作用力的模式发生变化引起的。
参考文献:
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收稿日期:2007-03-02
冯颖 1,王建国 2,孟宪军 1,张奇 1,王晶晶 1
(1.沈阳农业大学 食品学院,辽宁 沈阳 110161;2.辽宁省质量技术监督局,辽宁 沈阳 110161)
无梗五加果黄酮类化合物生物活性研究
STUDIESONBIOLOGICALACTIVITIESOFFLAVONOIDSFROM
ACANTHOPANAXSESSILIFLORUS(RUPR.ETMAXIM.)SEEMFRUIT
FENGYing1,WANGJian-guo2,MENGXian-jun1,ZHANGQi1,WANGJing-jing1
(1.FoodColege,ShenyangAgriculturalUniversity,Shenyang110161,Liaoning,China;
2.LiaoningBureauofQualityandTechnicalSupervision,Shenyang110161,Liaoning,China)
Abstract:AcanthopanaxSessiliflorus(Rupr.etMaxim.)SeemwhichisboundfulinourLiaoningprovincehas
beenusinginsteadofAcanthopanaxsenticosusinnortheastregionofChina.Theanti-oxidativeactivityonlard
andscavengingactivityonradioandantibacterialactivityofflavonoidsfromfruitofAcanthopanaxsessiliflorus
seemwasstudied,theresultsshowthattheflavonoidsfromfruitofAcanthopanaxsessiliflorusseemhaveobvious
anti-oxidativeactivityonlardandstrongscavengingactivityonradioandcertainantibacterialactivity.
Keywords:AcanthopanaxSessiliflorus(Rupr.etMaxim.)Seem;flavonoids;anti-oxidative;radio;antibacterial
activity
摘 要:采用烘箱高温诱导法、化学发光法和滤纸片法分别测定了无梗五加果大孔吸附树脂纯化后的总黄酮抗油脂
氧化、清除自由基的能力及对供试菌种的抑菌效果。结果表明,无梗五加果树脂纯化后的总黄酮具有抗油脂氧化、清
除羟自由基和超氧自由基的能力,并具有一定的抑菌活性,随总黄酮浓度的增加,其抗油脂氧化、清除自由基的能力
及抑菌活性均随之增强。
关键词:无梗五加;黄酮;抗氧化;自由基;抑菌
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基金项目:沈阳农业大学青年教师科研基金项目200322
作者简介:冯颖(1975-),女(汉),讲师,博士,研究方向:天然产物与功能食品。
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食品研究与开发 2008年1月第29卷第1期
黄酮类化合物广泛存在于植物界,是目前倍受关
注的天然活性产物之一。目前,已证实许多黄酮类化合
物具有很强的抗氧化、清除自由基及抑菌的能力。在我
国东北地区,长期以来都以无梗五加代替刺五加药用,
关于无梗五加果中黄酮类化合物的研究未见报道。本
文对无梗五加果黄酮类化合物抗油脂氧化、清除羟基
自由基(·OH)和超氧自由基的能力及抑菌活性进行了
测定,为该资源在食品领域的开发利用提供理论参考。
1 材料与设备
干燥的无梗五加果实粉末:辽宁省丹东农业科学
院提供;猪油:市售新鲜猪板油,文火熬制,过滤后备
用;Na2CO3、NaHCO3、无水乙醇、邻苯三酚、邻菲啰啉、
CuCl、H2O2、鲁米诺等均为分析纯;BHT:国产食用级;
供试菌种:沈阳农业大学食品学院微生物室提供。
HPD600大孔吸附树脂:河北沧州宝恩化工有限
公司;RE-52型旋转蒸发仪:上海博通经贸有限公司;
SHZ-型循环水真空泵:上海华琦科学仪器有限公司;
SHG-D型生物化学发光仪:上海市检测技术所上立检
测仪器厂。
2 方法
2.1 无梗五加果黄酮类化合物的制备
石油醚脱脂的无梗五加果干粉,用 50%乙醇(料
液比为 1∶80)90℃下回流提取 4h,冷却后过滤,滤液
浓缩,真空干燥得粗黄酮。
粗黄酮加水调整浓度为 0.5mg/mL,上 HPD600
大孔吸附树脂进行吸附[上样量(mL)与树脂用量(g)
之比为 10∶1],以水洗脱至流出液基本无色,然后以
70%乙醇为洗脱剂,洗至流出液无色。收集70%乙醇
洗脱部分,真空干燥,得总黄酮。
2.2 无梗五加果黄酮类化合物抗油脂氧化性能的研
究[1-2]
准确称取一定比例的无梗五加果粗黄酮、总黄酮
及 BHT,分别加入到 50g猪油中,剧烈搅拌均匀。同
时以不加添加物的油脂作空白。将所有样品放置于烘
箱中,用烘箱高温诱导猪油发生过氧化反应,在60℃~
70℃下加速氧化。每隔2d取出,按照GB/T5009.37-
1985碘量法测定过氧化值(POV)。以POV大小表示油
脂的氧化进度,进而衡量抗氧化剂的活性,并比较无梗
五加果粗黄酮与总黄酮抗油脂氧化性能。
2.3 无梗五加果总黄酮清除羟自由基(·OH)活性研究 [3]
参照文献[3]方法,向测量管中依次加入1.5mmol/L
邻菲啰啉(加热溶解)、2.0mmol/LCuCl(用极少量
HCl溶解后再定容)、1%H2O2各 50μL,0.05mol/L
pH9.60Na2CO3-NaHCO3缓冲液0.8mL,50μL测试样品
(·OH抑制试验,空白对照时用二次蒸馏水代替),总
体积为1.0mL,温度30℃。测前快速混匀,立即上机测
定,每个样品平行测 6次,记录发光强度,取峰值平均
值进行定量分析。
2.4 无梗五加果总黄酮清除超氧自由基活性研究[4]
对照文献[4]方法,配制试剂:鲁米诺:用 0.1mol/L
Na2CO3溶解后配制成 1mmol/L水溶液;邻苯三酚:以
1mmol/LHCL配成 0.01mol/L,于冰箱保存,用前用重
蒸馏水稀释 16倍 (即 6.25×10-4mol/L);0.05mol/L
Na2CO3-NaHCO3(pH10.2)缓冲液(含 1mmol/LEDTA),
用前现配。pH用酸度计准确调至10.2,并与鲁米诺以
体积比 2∶1(v/v)混合。测定方法:向测量管中注入 50
μL6.25×10-4mol/L邻苯三酚,940μL鲁米诺和碳酸缓
冲液及10μL测试样品(空白对照以10μL二次蒸馏
水代替),总体积1mL,温度30℃,测前快速混匀后,立
即上机测定。每个样品平行测6次,记录发光强度,取
峰值平均值进行定量分析。
2.5 发光抑制率的计算[5]
生物化学发光法测定自由基清除作用时,一定浓
度范围内发光强度(CL)与自由基数量呈量效关系,故
可用CL表示自由基的产生量。清除自由基的物质可
以降低CL,根据CL下降可判断该物质清除自由基的
能力。
发光抑制率=(CL对照-CL样品)/CL对照×100%
以发光抑制率为纵坐标,样品浓度为横坐标,给出
发光抑制曲线。一般用发光抑制率为 50%时的浓度
IC50来衡量样品对自由基的清除能力。IC50值越小,表
明样品清除自由基的能力越强。
2.6 抑菌活性研究(滤纸片法)[6-7]
采用滤纸片法来测定不同浓度(0.5%、1.0%、1.5%)
的总黄酮对供试菌的抑菌圈大小,了解其抑菌强度,抑
菌圈直径越大,抑菌强度越强。具体做法:用打孔器将
新华1号定性滤纸打成直径6mm的小圆片,分装于
洁净干燥的小培养皿内,50张/皿,干热灭菌(160℃,
2h),分别加入样品溶液0.5mL,让每张滤纸片都浸透
样品,制成样品滤纸片。将灭菌的培养基分别倒入无菌
培养皿中,每皿15mL~20mL。等凝固后,用无菌吸管
吸取 0.1mL被试菌液,加到平板上,用玻璃棒把菌液
涂布均匀,制成含菌双碟平板。最后用无菌镊子夹取样
品滤纸片,放在含菌双碟平板上,每皿 3片,每菌做
3次重复,细菌37℃,24h,霉菌28℃,48h培养后量取
抑菌圈直径。
科学研究
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食品研究与开发2008年1月第29卷第1期
3 结果与分析
3.1无梗五加果黄酮类化合物抗油脂氧化性能研究
黄酮不同添加量对猪油抗氧化作用的影响见图1。
由图1可知,无梗五加果黄酮化合物对油脂有一
定的抗氧化作用。随着黄酮添加量的增加,其对猪油的
抗氧化作用增强。保藏时间越长,效果越显著。原因是
黄酮类化合物作为还原体,失去氢离子,提供给氧化过
程中产生的自由基,使其生成惰性化合物,从而终止油
脂的氧化。但是由于添加量比较低,所以3个浓度的黄
酮添加量均不如0.02%的BHT作用效果好。相同浓度
的粗黄酮和总黄酮对猪油抗氧化效果的比较见图2。
由图2可知,相同浓度的总黄酮与粗黄酮相比较,
总黄酮的抗氧化效果更好。粗黄酮由于黄酮纯度较低,
所以抗氧化效果较差。
3.2无梗五加果总黄酮清除羟自由基活性研究
无梗五加果黄酮对羟基自由基的清除作用见图3。
3.3无梗五加果总黄酮清除超氧自由基活性研究
无梗五加果黄酮对超氧阴离子自由基的清除作用
见图4。
由图 3和图 4可以看出,无梗五加果总黄酮可有
效清除·OH和·O2-其清除自由基的能力均随浓度增
大而增强,IC50分别为 39.19μg/mL和 1.222 mg/mL。
据文献资料,黄酮化合物结构同自由基的清除作用密
切相关。对自由基清除机理可能是作为氢供体以及稳
定基中间体而阻断自由基链式反应。而在清除·OH
和·O2-时的活性部位和作用机制并不完全相同。因
此,对无梗五加果黄酮化合物的组成及结构的研究仍
有待进行。
3.4无梗五加果总黄酮抑菌活性研究(见表1)
图1 不同添加量的总黄酮抗油脂氧化性能
Fig.1 Anti-oxidativeactivityofdifferentaddingamount
flavonoidsonlard
图2 粗黄酮与总黄酮抗氧化效果比较
Fig.2 Anti-oxidativeactivityofcrudeandpurialflavonoids
图3 无梗五加果黄酮对羟基自由基的清除作用
Fig.3 Thescavengingeffectofflavonoidsonhydroxylradical
图4 无梗五加果黄酮对超氧阴离子自由基的清除作用
Fig.4 Thescavengingeffectofflavonoidsonsuperoxideradical
注:表中数据为抑菌圈直径,为3次重复实验平均值。
总黄酮Flavonoids
0.5%
9
10
-
9
-
1.0%
10
12
-
11
-
1.5%
11
14
-
12
-
被试菌
Bacterialstrain
大肠杆菌Escherichiacoli
枯草杆菌Bacillussubtilis
金黄色葡萄球菌Staphylocccusaureus
根霉Rhizopus
黑曲霉Aspergillusniger
表1 无梗五加果总黄酮抑菌试验结果
Table1 Theresultoftheabilitiesofantibacterialofflavonoids
mm
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食品研究与开发 2008年1月第29卷第1期
苦槠(HardleafOatchestnut)别名为苦槠栲、槠栗、槠 树等,属壳斗科,亚热带常绿阔叶林的主要种群之一[1]。
主要分布于江西、广东、福建、四川、湖南、湖北、云南、
浙江、安徽、江苏、陕西等地,各地产量较大。苦槠果实
作者简介:涂宗财(1965-),男(汉),教授,博士生导师,研究方向:天
然产物有效成分提取。
黄酮化合物对自然界的许多病原微生物具有抑制
和杀灭作用。其抑菌机制为破坏微生物细胞壁及细胞
膜的完整性及使微生物细胞蛋白质凝固或变性[8]。
由表1可见,无梗五加果总黄酮对大肠杆菌、枯草
杆菌和根霉均具有有效的抑制作用,随其浓度增加,抑
菌效果增强。对金黄色葡萄球菌和黑曲霉不敏感,未显
示出抑菌效果。
4 结论
烘箱高温诱导法和化学发光法测定表明,无梗五
加果总黄酮具有抗油脂氧化和清除羟自由基及超氧自
由基的能力,其清除自由基的能力随浓度增大而增强。
抑菌实验表明,无梗五加果总黄酮对大肠杆菌、枯草杆
菌、根霉均具有抑菌能力。提示黄酮类化合物为无梗五
加果抗氧化、清除自由基及抑菌的活性成分,为无梗五
加果的进一步开发利用提供了理论参考。
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收稿日期:2007-05-28
涂宗财,刘光宪,豆玉新,刘成梅,林德荣
(南昌大学 食品科学教育部重点实验室,江西 南昌 330047)
苦槠果实总黄酮的提取与纯化
摘 要:研究了超声波提取苦槠黄酮的最佳工艺,并用液相色谱仪检测了经过 D-101型大孔吸附树脂分离纯化苦槠
黄酮的效果。试验表明:苦槠黄酮提取的最佳工艺条件:乙醇浓度为 50%,固液比(g/mL)为 1∶30,超声波提取时间为
1h,提取次数为2次,最高提取含量为0.506g/100g。
关键词:苦槠;黄酮;超声波;提取与分离
STUDYONEXTRACTIONANDPURIFICATIONTOTALFLAVONESFROMTHEFRUITSOF
CASTANOPSISSCLEROPHYLLA
TUZong-cai,LIUGuang-xian,DOUYu-xin,LIUCheng-mei,LINDe-rong
(KeyLaborataryofFoodScienceofMinistryofEducation,NanchangUniversity,Nanchang330047,Jiangxi,China)
Abstract:Optimalconditionsfortheextractionofflavonesfromthefruitsofcastanopsissclerophylaweresys-
temicalyresearchedbyusingultrasonicwave.ThepurifyingeficiencyofD-101macroporousresinisdetected
byliquidchromatogram.Theresultsofthisstudyindicatethat:Theoptimumextractionconditionswereconfirmed
asfolows:ethanolconcentration50%,extractingtime60min,ratioofsolventtomaterial30,extractiontimes2.
Theextractionhighestcontentofflavonoidunderthesaidconditionswas0.506g/100g.
Keywords:castanopsissclerophyla;flavones;ultrasonicwave;extractionandpurification
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
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