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五指毛桃水提液保护胃黏膜及改善微循环的实验研究



全 文 :收稿日期:2010-05-10; 修订日期:2010-11-10
基金项目:广东省中医药局资助项目(No. 2008351)
作者简介:王 艳(1981-) ,女(汉族) ,山西临汾人,现任山西中医学院助
教,硕士学位,主要从事中药药理与毒理的研究工作.
* 通讯作者简介:周添浓(1955-) ,女(汉族) ,广东河源人,现任广州中医
药大学研究员,主要从事中药化学研究工作.
五指毛桃水提液保护胃黏膜及改善微循环的实验研究
王 艳1,叶木荣2,唐立海3,周添浓2*
(1.山西中医学院中药系,山西 太原 030024; 2.广州中医药大学中药学院,广东 广州 510405;
3.广州中医药大学脾胃研究所,广东 广州 510405)
摘要:目的 观察五指毛桃保护胃黏膜及其改善微循环的作用,探索其治疗胃痛的机理,为临床运用提供实验依据。方法
采用幽门结扎法,观察其对幽门结扎大鼠胃酸分泌及胃蛋白酶活性的影响及对胃黏膜的保护作用;选用激光多普勒仪观
察其对小鼠耳廓微循环的改善作用。结果 五指毛桃水提液对幽门结扎大鼠胃酸分泌和胃蛋白酶活性无显著影响,但具
有一定降低的趋势,病理结果显示对胃黏膜具有保护作用;对小鼠耳廓微循环具有显著改善作用。结论 五指毛桃具有
保护胃黏膜的作用,其作用机理可能与其改善微循环有关。
关键词:五指毛桃; 胃黏膜; 微循环
DOI标识:doi:10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2011. 05. 066
中图分类号:R285. 5 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2011)05-1181-01
五指毛桃(Radix Fici Hirtae)为桑科植物粗叶榕 Ficus hirta
Vah1.的干燥根,为华南地区习用的中药材,味辛、甘,性平,有健
脾补肺、利湿舒筋功能。其性缓,补而不助火不伤阴,而且具有利
湿的功效,适用于岭南多湿多虚的体质。该药又称为南芪、土北
芪、五爪龙、五指牛奶等,民间运用较为广泛且认为具有和北芪相
同的补气扶正作用。本品是一种食药两用的植物,其根煲汤香味
浓郁,在民间被广泛应用,临床可用于治疗胃脘痛等病症。本文
就其对实验性胃溃疡胃黏膜的保护作用及其对微循环的改善作
用进行研究,阐明其治疗胃痛的机理,为其临床运用提供实验依
据。
1 材料与仪器
1. 1 动物 SD大鼠,清洁级,雌雄各半,购于山西医科大学实验
动物中心。KM小鼠,SPF级,雌雄各半,购于山西医科大学实验
动物中心,动物合格证号:SCXK(晋)2009 - 0001。
1. 2 药物与试剂 药物制备:取五指毛桃的干燥药材,用 10 倍体
积的水浸泡 1 h,加热煮沸 1 h,趁热滤取药液;再加 8 倍量水,煮
沸 30 min,合并两次滤液,浓缩至 2 g /ml 浓度备用,用时加蒸馏
水稀释至所需浓度。乌来糖,国药集团化学试剂有限公司生产,
批号 120060323。
1. 3 仪器 隔水式电热恒温培养箱,上海跃进医疗器械厂生
产。高速离心机,上海安亭科学仪器厂生产。PeriFlux 5000 激光
多普勒血流监测仪,瑞典 Perimed公司生产。
2 方法
2. 1 对胃酸和胃蛋白酶分泌的影响[1] 将 48 只大鼠随机分成模
型对照组、五指毛桃高、中、低剂量组,雌雄各半,每组 12 只。模
型对照组给予等体积蒸馏水,其余各组给予相应药物,1 ml /100 g
连续 7 d。末次灌胃给药后,所有动物禁食 12 h 后,将大鼠用乌
来糖麻醉,剪去腹部的毛,常规消毒,于剑突下沿腹白线开一长
约 2. 5 cm 的切口,小心提起胃,在幽门与十二指肠结合部结扎,
制成胃黏膜损伤模型,然后立即从十二指肠注入各药,缝合创口
后消毒,送回笼中,术后禁食禁水,15 h 后脱颈椎处死。取出胃
收集胃液,于 3 000 r /min离心 15 min,吸取上清,为总胃液量。
将胃浸入 10%的甲醛固定,作组织切片,进行组织学观察。胃酸
测定:各取清晰胃液 1 ml置于小烧杯中,加入酚酞指示剂两滴,
用 20 mmol /L NaOH 滴定,同时不断摇动,至红色消失,继续滴
定直至微红色不退为止,记录所消耗的 NaOH 总毫升数,算出总
酸度及总酸排出量。总酸度 = NaOH 毫升数 × 20,总酸排出量 =
总酸度 ×胃液量。胃蛋白酶的测定:取内径 1 ~ 2 mm、粗细匀称
的毛细玻管,将蛋清打匀,过滤后灌满毛细玻管,放在 85 ℃热水
中,凝固后贮于冰箱备用。胃液 0. 3 ml 放入的封口试管中,加
0. 05 mol /L 盐酸 5 ml,摇匀,放入上述蛋白管两根,塞好瓶口,
37 ℃恒温箱中孵育 24 h,取出蛋白管,用尺测量蛋白管两端透明
部分的长度,以四端之值求平均值,胃蛋白酶活性单位 =平均
值2 × 16
2. 2 对微循环的影响 将 60 只小鼠,雌雄各半,随机分成 5 组,
即空白组,川芎嗪组,五指毛桃水提液高剂量组,五指毛桃水提液
中剂量组,五指毛桃水提液低剂量组,连续给药 6 d(空白组灌服
蒸馏水) ,末次给药后 30 min,将小鼠用 20%的乌拉坦 0. 2 ml /10
g腹腔注射麻醉。将激光多普勒探头固定于麻醉好的小鼠耳廓,
每只小鼠探头位置均距耳廓边缘 0. 3 cm,用激光多普勒记录微
循环灌注量(PU) ,连续记录 1 ~ 5 min 的 PU 值,取 1 ~ 5 min 的
PU值作为该小鼠的微循环灌注量。
2. 3 统计处理 用 SPSS11. 5 进行 t 检验分析,分析结果用 珋x ± s
表示。
3 结果
3. 1 对胃酸和胃蛋白酶分泌的影响 与模型对照组相比五指毛
桃对胃液总酸度、总酸排出量及胃蛋白酶活性均无明显影响(P
> 0. 05) ,但有一定的降低趋势。见表 1。病理切片结果表明,模
型对照组标本局部黏膜缺损达 2 /3 以上,五指毛桃水提液高剂量
组标本未见局部黏膜缺损,五指毛桃水提液中剂量组标本局部黏
膜缺损小于 1 /3,五指毛桃水提液低剂量组标本局部黏膜缺损小
于 1 /3。实验结果表明,五指毛桃对胃黏膜具有保护作用,可减
轻幽门结扎引起的胃黏膜损伤。
表 1 对大鼠胃酸、胃蛋白酶分泌的影响(珋x ± s)
组别
剂 量
/g生药·kg - 1
总酸度
/mmol·L -1
总酸排出量
/mmol
胃蛋白酶活性
/mm2
模型对照 - 90. 44 ± 15. 54 210. 75 ± 74. 71 99. 72 ± 9. 8
五指毛桃水
提液高剂量
10 85. 14 ± 11. 57 169. 15 ± 76. 38 97. 61 ± 16. 15
五指毛桃水
提液中剂量
5 86. 5 ± 10. 23 181. 14 ± 63. 51 97. 85 ± 11. 85
五指毛桃水
提液低剂量
2. 5 86. 85 ± 14. 25 197. 24 ± 63. 02 98. 63 ± 16. 48
n =12
3. 2 对微循环的影响 结果见表 2。结果表明,川芎嗪及五指毛
桃均具有具有显著的改善微循环的作用(P < 0. 05) ,五指毛桃组
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL . 22 NO. 5 时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 5 期
作用效果显著(P < 0. 01)。
表 2 对小鼠耳廓微循环灌注量的影响(珋x ± s)
组别 剂 量 微循环灌注量 /PU
空白对照 - 17. 98 ± 7. 86
川芎嗪 25 mg·kg - 1 27. 28 ± 9. 03﹡
五指毛桃水提液高剂量 20 g生药·kg - 1 35. 35 ± 20. 59﹡﹡
五指毛桃水提液中剂量 10 g生药·kg - 1 35. 22 ± 17. 25﹡﹡
五指毛桃水提液低剂量 5 g生药·kg - 1 34. 76 ± 10. 12﹡﹡
与模型对照组相比较,﹡ P <0. 05,﹡﹡P <0. 01;n =12
4 讨论
溃疡病是一种以疼痛为主要临床表现的病症,其病因病机至
今尚未完全阐明,但普遍认为其形成主要是攻击因子与防御因子
之间失衡所致。攻击因子主要指胃酸、胃蛋白酶、幽门螺杆菌、药
物损害及氧自由基等[2];防御因子通常有胃黏液 -碳酸氢盐屏
障、胃黏膜屏障、黏膜血流、细胞更新、前列腺素及表皮生长因子
等。胃酸和胃蛋白酶是主要的攻击因子,可直接对胃黏膜产生损
害[3],同时胃酸能激活已分泌的胃蛋白酶,两者协同作用,对胃
黏膜进行侵蚀和破坏。而胃黏膜血流量(GMBF)改变在溃疡发
生机制中的作用,近十多年来日益得到重视。大多数学者认为,
GMBF的减少是导致胃黏膜糜烂出血和溃疡形成的主要原
因[4,5]。另一方面,胃蛋白酶是胃液中最重要的消化酶和仅有的
蛋白水解酶,胃酸的助消化作用也不容忽视 。本实验结果表明
与模型对照组相比,五指毛桃对胃酸及胃蛋白酶分泌有一定的降
低趋势,但无显著影响,说明对食物的正常消化不会产生影响,但
对胃溃疡患者的胃痛有一定的缓解作用;对胃黏膜损伤具有较好
的保护作用,其作用机理可能与其改善胃黏膜微循环有关。
参考文献:
[1] 张国民,莫新民,刘慧萍,等.疏肝和胃丸抑制胃溃疡大鼠胃酸和胃
蛋白酶分泌作用的实验研究[J].山西中医学院学报,2007,8(1) :
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[2] Synnerstad I,Iohansson M,Nylander O,et al. Intraluminal acid and gas-
tric mucosal integritv:the importan ce of blood - borne bicarbonate[J].
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[3] Kawano S. Tsuji S. Role of mucosal blood flow:aconceptional review in
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15 Suppl:D1. D6.
[4] 罗燕军,于皆平.胃黏膜血流变化的影响因素[J].世界华人消化杂
志,2001,9:671.
[5] 汤 净.消化性溃疡患者血中 LPO 含量、SOD 及 GSH - Px 活性观
察[J].世界华人消化杂志,2000,8:487.
收稿日期:2010-06-5; 修订日期:2010-11-10
基金项目:江苏省海洋生物技术重点实验室开发课题(No. 2008HS012)
作者简介:李盈蕾(1973-) ,女(汉族) ,吉林长春人,现任淮海工学院化学工
程学院讲师,硕士学位,主要从事天然产物活性物质提取与活性研究工作.
大孔吸附树脂纯化大米草总黄酮的研究
李盈蕾1,陈建华2,陈丽娟1,陶 欣1,朱佑民1
(1.淮海工学院化学工程学院,江苏 连云港 222005;
2.江苏省海洋生物技术重点实验室,江苏 连云港 222005)
摘要:目的 研究大孔树脂纯化大米草总黄酮的工艺条件及参数。方法 采用静态吸附 -解吸方法,以吸附量和解吸率为
指标,筛选最佳树脂;又以总黄酮质量浓度为指标,考察了最佳树脂纯化大米草总黄酮的工艺参数。结果 5 种树脂中,Hz
- 816 树脂对大米草总黄酮纯化效果较好,其总黄酮的静态吸附量达 26. 79mg /g,解吸率为 90. 10%;用 4 倍柱体积蒸馏
水、2 倍柱体积 10%乙醇洗脱除去杂质后,换用 50%乙醇 4 倍柱体积洗脱得纯化后的大米草总黄酮溶液,总黄酮质量分
数为 25. 36%。结论 Hz - 816 型大孔树脂在所确定的工艺条件下,可较好地纯化大米草总黄酮。
关键词:大米草; 总黄酮; 大孔吸附树脂
DOI标识:doi:10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2011. 05. 067
中图分类号:R284. 2 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2011)05-1182-03
大米草 Spartina anglica是多年生耐盐草本植物,由于它具有
良好的促淤造陆、保滩护岸、防治污染等生态功能,我国于 1963
年首次从英国引进。但由于其繁殖力强,疯长蔓延而难以控制。
目前大米草对我国沿海生态环境和海水养殖已经造成了极大的
破坏,全世界都在寻找大米草防除的良方,但目前还没有公认有
效的办法。对其生物资源的综合利用被认为是一条最好的途
径[1 ~ 3]。本课题组前期研究表明,大米草总黄酮具有良好的抗氧
化活性,有很好的开发前景。故本实验以大米草总黄酮含量为评
价指标,对 5 种不同类型的大孔吸附树脂进行了筛选,并着重考
察了大孔吸附树脂分离纯化大米草总黄酮的工艺条件与参数,旨
在寻找选择性强、吸附容量大且易于解吸的树脂,为大规模提取
纯化大米草总黄酮提供技术支持。
1 材料与仪器
1. 1 仪器 XH -100B电脑微波催化合成 /萃取仪(北京祥鹄科
技发展有限公司) ;UV - 160A 紫外 -可见分光光度仪(日本岛
津) ;HZQ - F160 全温振荡培养箱(舟山定海区海源仪器厂) ;JB /
T 5374 - - 1991 电子天平[梅特勒 -托利多仪器(上海)有限公
司]。RE52CS旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂) ;真空冷冻干
燥机 Genesis2000 QS (美国 VIRTIS)。
1. 2 材料与试剂 大米草(2009 - 05 采于连云港燕尾镇沿海滩
涂) ;芦丁标准品(批号:10080 - 200806,中国药品生物研究所) ;
大孔吸附树脂(Hz801,Hz802,Hz803,Hz816,上海华震科技有限
公司) ;乙醇,硝酸钠,亚硝酸钠,氢氧化钠等(AB - 8 天津南开大
学化工厂) ;其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 标准曲线的测定 精密称取干燥至恒重的芦丁标准品 10
mg,用无水乙醇溶解并定容于 50 ml 容量瓶中,得 0. 2 mg·ml -1
芦丁标准液。分别精密吸取 0. 0,0. 4,0. 8 ,1. 2,1. 6,2. 0 ml芦丁
标准液于 10ml比色管中,加无水乙醇至 5 ml,加入 5%NaNO2 0. 3
ml,摇匀放置 6 min,再加入 10%Al(NO3)3 溶液 0. 3 ml,摇匀放置
6 min,最后加 1 mol·L -1 NaOH 4 ml,用无水乙醇溶液补至刻度,
摇匀放置 10 min 后,以无水乙醇为空白对比,在 510 nm 处测定
其吸光值,吸光值(A)与为溶液浓度(C)进行线性回归,得回归方
程为 A = 10. 993C + 0. 001 1,r = 0. 999 3。结果表明,芦丁在 8 ~
40 μg·ml -1与吸光度线性关系良好。同样方法测定大米草总黄
酮含量、吸附液及解析液的总黄酮含量。
2. 2 大米草总黄酮粗提液的制备 大米草干品→粉碎→过 20
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时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 5 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL. 22 NO. 5