全 文 ：中国药房 2012年第23卷第3期 China Pharmacy 2012 Vol. 23 No. 3
关苍术为多年生菊科植物关苍术 Atractylodes japonica
Koidz.ez Kitam的干燥根茎，又名东苍术、枪头菜。性温，味辛、
苦，具有健脾燥湿、发汗解表等功效，用于治疗食欲不振、脘腹
胀满、水肿、小便不利等证 [1]。日本《药局方》和韩国《大韩药
典》中均将关苍术作为白术使用。我国朝鲜族民间经常将关
苍术作为治疗胃溃疡、慢性胃炎和消化系统疾病的药物，疗效
甚佳。前期研究表明，关苍术提取物可抑制酒精所致大鼠和小鼠
胃黏膜损伤[2]。本研究通过复制大鼠乙醇急性胃黏膜损伤模型，
探讨关苍术超临界提取物（GCT）保护胃黏膜的作用机制。
1 仪器与材料
1.1 仪器
TC-SFH-50-120S型超临界萃取仪（沈阳天诚超临界萃取
有限公司）；D-1900型紫外-可见分光光度计（日本Hitachi公
司）；MDF-U4186S型超低温冰箱（日本Sanyo公司）。
1.2 试药
关苍术采集于吉林省汪清县，经延边大学药学院生药学
教研室鉴定为真品；铝碳酸镁片（达喜，德国拜耳医药保健有
限公司，批号：20090713）；丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）、超
氧化物歧化酶（SOD）、髓过氧化物酶（MPO）和一氧化氮合成
酶（NOS）试剂盒购自南京建成生物工程研究所；BeyoECL plus
试剂盒和羊抗鼠二抗购自碧云天生物技术研究所；环氧化物
酶 2（COX-2）抗体（1 ∶ 1 000，美国 Santa Cruz公司）；其余试剂
均为分析纯。
1.3 动物
清洁级Wistar大鼠 72只，♂，体重（200±20）g，由吉林大
学动物实验中心提供（动物生产许可证号：SCXK（吉）
2007-0003）。
2 方法
2.1 GCT的制备
将干燥的关苍术根茎粉末装入萃取釜，在萃取压力为 25
MPa、温度为45℃、CO2流量为145 kg·L-1的条件下萃取4 h，得
棕色油状的物质；药渣继续以 1.8 mL·kg-1的比例加入无水乙
＊硕士研究生。研究方向：中药药理与质量标准。电话：
0433-2435063。
#通讯作者：研究员。研究方向：中药药理与质量标准。电话：
0433-2435063。E-mail：syzhang@ybu.edu.cn
关苍术超临界提取物对乙醇致大鼠胃黏膜损伤保护作用的研究
刘 男＊，廉丽花，张颖丽，张善玉#（长白山生物资源与功能分子教育部重点实验室，吉林延吉 133002）
中图分类号 R285；R97 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2012）03-0215-03
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2012.03.08
摘 要 目的：研究关苍术超临界提取物（GCT）对乙醇致大鼠胃黏膜损伤的保护作用。方法：40只Wistar大鼠均分成5组，即空
白对照（等容蒸馏水）、模型（等容蒸馏水）、铝碳酸镁（0.37 g·kg-1）和GCT高、低剂量（0.70、0.35 g·kg-1）组。ig给药，每天1次，连续
5 d，末次给药 30 min后 ig无水乙醇（0.5 mL·100 g-1）复制急性胃黏膜损伤模型，观察胃黏膜损伤面积，测定胃组织中丙二醛
（MDA）、一氧化氮（NO）含量和超氧化物歧化酶（SOD）、髓过氧化物酶（MPO）、一氧化氮合成酶（NOS）活性及环氧化物酶 2
（COX-2）蛋白表达水平。结果：高、低剂量GCT能显著抑制乙醇引起的大鼠胃黏膜损伤及胃组织中MDA含量的增加和MPO活
性的升高，抑制SOD活性的减弱、NO含量和NOS活性的降低，并抑制COX-2蛋白的表达。结论：GCT能拮抗乙醇引起的胃黏膜
损伤，其机制可能与通过抑制氧自由基产生、维持胃黏膜中NO正常水平、下调COX-2表达有关。
关键词 关苍术；乙醇；胃黏膜损伤；环氧化物酶2
Protective Effects of Supercritical CO2 Extract from Atractylodes japonica on Ethanol-induced Gastric Mu-
cosal Injury in Rats
LIU Nan，LIAN Li-hua，ZHANG Ying-li，ZHANG Shan-yu（Key Laboratory for Natural Resource of Changbai
Mountain & Functional Molecules，Ministry of Education，Jilin Yanji 133002，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the protective effects of supercritical CO2 extract from Atractylodes japonica（GCT）against
ethanol-induced gastric mucosal injury in rats. METHODS：40 Wistar rats were divided into 5 groups，i.e. normal control group
（constant volume distilled water），model group（constant volume distilled water），hydrotalcite group（0.37 g·kg-1），GCT
high-dose and low-dose groups（0.70，0.35 g·kg-1）.The rat model of acute gastric damage was induced by absolute ethanol（0.5 mL·
100 g-1）intragastrically. Those groups were given relevant medicine intragastrically once a day for 5 days. Model was induced 30
min after the last medication. The gastric mucosal injury area was observed. The contents of MDA and NO，the activity of SOD，
MPO and NOS，and the expression of COX-2 in gastric mucous were determined. RESULTS：High-dose and low-dose of GCT sup-
pressed the elevation of MDA and MPO，and enhanced the SOD activity，the decrease of NO content and NOS activity. Moreover，
GCT significantly reduced COX-2 expression. CONCLUSION：GCT can prevent ethanol-induced gastric mucosal injury，partly
through scavenging free radical，maintaining NO level and down-regulating COX-2.
KEY WORDS Atractylodes japonica；Ethanol；Gastric mucosal injury；COX-2
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China Pharmacy 2012 Vol. 23 No. 3 中国药房 2012年第23卷第3期
醇作夹带剂，与前者相同工艺萃取5 h，萃取得物回收乙醇并浓
缩至浸膏，即为GCT，得率为1.1％（W/W），贮藏，备用。
2.2 胃损伤形态学观察
2.2.1 复制模型 取Wistar大鼠 40只，随机均分成 5组，即空
白对照（等体积蒸馏水）、模型（等体积蒸馏水）、铝碳酸镁
（0.37 g·kg-1，用 0.5％羧甲基纤维素钠（CMC-Na）和吐温 80溶
解成相应浓度的混悬液）和GCT高、低剂量（0.70、0.35 g·kg-1，
用 0.5％CMC-Na和吐温 80溶解成相应浓度的混悬液）组。ig
给药，每天 1次，连续 5 d。末次给药 30 min后，除空白对照组
外所有大鼠均 ig无水乙醇（0.5 mL·100 g-1），空白对照组 ig等
体积蒸馏水，1 h后乙醚麻醉，解剖取胃。
2.2.2 胃溃疡面积观测 结扎胃的贲门部和幽门部并经胃壁
向胃腔内注入 5％甲醛 10 mL，将胃取出浸入 5％甲醛溶液中
固定，沿胃大弯剪开，于4℃生理盐水中冲洗，展开平铺于显微
镜下，用直尺测量溃疡面积，按下列公式计算溃疡抑制率：溃
疡抑制率＝（模型组平均溃疡面积－给药组平均溃疡面积）/模
型组平均溃疡面积×100％。
2.3 胃黏膜损伤保护生化指标检测
2.3.1 胃组织 MDA、NO含量和 MPO、SOD、NOS活性测
定 取另一批Wistar大鼠32只，随机分成4组，分别为空白对
照（等体积蒸馏水）、模型（等体积蒸馏水）和GCT高、低剂量
（0.70 、0.35 g·kg-1，用 0.5％CMC-Na和吐温 80溶解成相应浓
度的混悬液）组。照“2.2.1”项下方法复制模型，乙醚麻醉处死后
解剖取胃，沿胃大弯剪开，生理盐水冲洗，剪取溃疡组织处，用滤
纸吸干水分，分成2等份，其中1份－80℃冻存，另1份称重，制备
胃组织匀浆液，严格按照试剂盒说明书测定胃组织中MDA、NO
含量和MPO、SOD、NOS活性，用考马斯亮蓝法测定蛋白含量。
2.3.2 Western Blot法检测 将冻存大鼠胃黏膜组织于液氮中
研磨成粉，称取 100 mg，加含 1 mmol·L-1苯甲基磺酰氨
（PMSF）的 1 mL裂解液（150 mmol·L-1 NaCl、1.0％ NP-40、
0.5％ NaVO4、0.1％ SDS、50 mmol·L-1 Tris，pH 7.5）提取蛋白。
蛋白样品在 100 ℃中煮沸 5 min变性；取等量蛋白上样配制
10％SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。将蛋白转移至 PVDF膜后，
5％脱脂奶粉于室温封闭 1 h，滴加COX-2抗体，4℃缓慢振荡
孵育过夜；PBST（PBS、0.05％吐温 20，pH 7.4）室温摇洗 3次；
滴加HRP标记的羊抗鼠二抗（1 ∶ 2 000），于室温孵育1 h，PBST
摇洗3次，用BeyoECL plus试剂盒检测杂交信号。
2.4 统计学方法
统计学分析应用SPSS11.0统计软件，实验数据以x±s表
示，组间比较采用 t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。
3 结果
3.1 GCT对模型大鼠胃黏膜损伤面积的影响
与模型组比较，GCT高、低剂量组大鼠溃疡面积显著减
小。GCT对模型大鼠胃黏膜损伤面积的影响见表1；大鼠胃组
织展开平面示意图见图1。
从图 1和表 1可知，GCT高、低剂量组与模型组比较均一
定程度地降低了胃黏膜损伤，减少了胃黏膜损伤面积，GCT组
效果与铝碳酸镁组相似。
3.2 GCT对模型大鼠胃组织MDA含量和MPO、SOD活性的
影响
与空白对照组比较，模型组MDA含量显著升高（P＜
0.01），MPO活性显著增强（P＜0.05），同时SOD活性显著减弱
（P＜0.05）；与模型组比较，GCT高、低剂量组MDA含量显著
减少（P＜0.01），MPO活性显著降低（P＜0.05），SOD活性显著
增强（P＜0.05）。GCT对模型大鼠胃组织MDA含量和MPO、
SOD活性的影响见表2。
表 2 GCT对模型大鼠胃组织MDA含量和MPO、SOD活性
的影响（x±s，n＝8）
Tab 2 Effects of GCT on the content of MDA，activity of
MPO and SOD in gastric tissue of rats（x±s，n＝8）
组别
空白对照组
模型组
GCT高剂量组
GCT低剂量组
剂量/g·kg-1
-
-
0.70
0.35
SOD/U·mg-1
6.37±2.29
4.02±0.98＊
6.41±2.84#
6.29±2.52#
MDA/nmoL·mg-1
0.163±0.093
0.312±0.047＊＊
0.181±0.098##
0.176±0.102##
MPO/U·g-1
0.404±0.172
0.687±0.283＊
0.421±0.106#
0.408±0.102#
与空白对照组比较：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；与模型组比较：#P＜
0.05，##P＜0.01
vs.blank control group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.model group：#P＜
0.05，##P＜0.01
3.3 GCT对模型大鼠胃组织NO含量和NOS活性的影响
与空白对照组比较，模型组NO含量显著减少（P＜0.01），
NOS活性显著减弱（P＜0.05）；与模型组比较，GCT高、低剂量
组NO含量显著增加，NOS活性显著增强（P＜0.05）。GCT对
模型大鼠胃组织NO含量和NOS活性的影响见表3。
表 3 GCT对模型大鼠胃组织NO含量和NOS活性的影响
（x±s，n＝8）
Tab 3 Effects of GCT on the content of NO and activity of
NOS in gastric tissue of rats（x±s，n＝8）
组别
空白对照组
模型组
GCT高剂量组
GCT低剂量组
剂量/g·kg-1
-
-
0.70
0.35
NO/μmoL·g-1
1.405±0.701
0.401±0.130＊＊
0.693±0.345#
0.703±0.294#
NOS/U·mg-1
1.736±0.345
1.329±0.354＊
1.741±0.401#
1.735±0.327#
与空白对照组比较：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；与模型组比较：#P＜
0.05
vs.blank control group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.model group：#P＜
0.05
图1 大鼠胃组织展开平面示意图
A.空白对照组；B.模型组；C.铝碳酸镁组；D.GCT高剂量组；E.GCT低
剂量组
Fig 1 Plane schematic diagram of gastric tissue in rats
A.blank control group；B. model group；C. hydrotalcite group；D. GCT
high-dose group；E. GCT low-dose group
表1 GCT对模型大鼠胃黏膜损伤面积的影响（x±s，n＝8）
Tab 1 Effects of GCT on the area of gastric mucosal injury
in model rats（x±s，n＝8）
组别
空白对照组
模型组
铝碳酸镁组
GCT高剂量组
GCT低剂量组
剂量/g·kg-1
-
-
0.37
0.70
0.35
溃疡面积/mm2
0
95.13±45.42＊
38.24±20.12#
34.62±16.48#
31.75±26.08#
溃疡抑制率/％
-
-
59.80
63.60
66.75
与空白对照组比较：＊P＜0.01；与模型组比较：#P＜0.01
vs.blank control group：＊P＜0.01；vs.model group：#P＜0.01
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中国药房 2012年第23卷第3期 China Pharmacy 2012 Vol. 23 No. 3
3.4 GCT对模型大鼠胃黏膜中COX-2表达的影响
高、低剂量GCT可下调模型大鼠胃组织中 COX-2的表
达。GCT对模型大鼠胃黏膜中COX-2表达的影响见图2。
4 讨论
在胃黏膜损伤中，炎性细胞尤其是活化的中性粒细胞极
为重要。乙醇使白细胞浸润于胃黏膜，并通过释放MPO、氧自
由基、活性氧化代谢产物等方式导致黏膜损伤。近年来的研
究也证实氧自由基在应激性胃黏膜损伤中起着重要作用[3]。
NO是一种具有广泛生物效应的小分子化合物，既是一种
内源性活性物质，有广泛的生理作用，同时又是一种重要的炎
症介质。NO的生物合成主要受NOS调节，NOS在胃黏膜损伤
中起重要作用，其变化直接影响NO的浓度。COX-2在没有受
到刺激的正常组织或细胞中表达极少甚至不能测出，而胃溃疡组
织中的巨噬细胞、成纤维细胞中可见COX-2表达。罗玉琴等[4]发
现，COX-2在胃炎、胃黏膜不典型增生和胃癌中的表达呈平行
性递增。本研究表明，GCT能显著提高胃组织中SOD活性和
降低MDA含量及MPO活性，表明其可降低MPO和自由基对
生物膜的损害；GCT可提高乙醇致胃黏膜损伤大鼠胃组织中
NO和NOS水平；乙醇致胃黏膜损伤中COX-2基因表达具有
增高的趋势，这与胃溃疡中COX-2上调结果一致[4]，而GCT可
下调乙醇处理胃黏膜中上升的COX-2基因表达。提示关苍术
对大鼠胃黏膜损伤具有保护作用，而抑制氧自由基产生、维持
胃黏膜中NO正常水平、下调COX-2表达可能是关苍术降低胃
黏膜损伤的重要机制之一。
参考文献
[ 1 ] 吉林省中医中药研究所.长白山植物药志[M].长春：吉林
人民出版社，1982：1 140.
[ 2 ] 刘 男，张颖丽，张善玉.朝药关苍术提取物对无水乙醇
致小鼠胃黏膜损伤的影响[J].中国民族医药杂志，2010，
3（3）：41.
[ 3 ] 李 铁，张席锦.氧自由基在应激性胃溃疡中的发病学
意义[J].生理学报，1993，45（3）：286.
[ 4 ] 罗玉琴，吴开春，孙安华，等.浅表性胃炎，胃黏膜不典型
增生及胃癌组织中 COX-1、COX-2、iNOS表达的意义
[J].中华消化杂志，2000，20（4）：223.
（收稿日期：2011-02-05 修回日期：2011-06-14）
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GCT
EtOH
COX-2
α-tubulin
79 kDa
50 kDa
图2 GCT对模型大鼠胃黏膜中COX-2表达的影响
Fig 2 Effects of GCT on the expression of COX-2 in gastric
tissue of rats
·中药工艺与制剂·
炮制方法对巴戟天糖类成分影响的研究Δ
陈地灵＊，帅 欧，林 励 #，汪金玉，庄满贤，陈 康，胡云龙（广州中医药大学中药学院，广州 510006）
中图分类号 R283.3；R284.1 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2012）03-0217-04
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2012.03.09
摘 要 目的：比较不同炮制方法对巴戟天各糖类成分的含量及指纹图谱的影响。方法：采用紫外-可见分光光度法测定巴戟天
各炮制品中醇溶性糖和水溶性糖的含量；采用高效液相色谱-蒸发光散射检测（HPLC-ELSD）法建立巴戟天糖类成分指纹图谱。
结果：巴戟天不同炮制品中糖类成分含量与生品比较有差异；HPLC-ELSD法共确定14个主要共有峰，不同炮制品糖类组分相同，
但相对含量有差异。结论：炮制方法对巴戟天糖类成分的溶出有影响。
关键词 巴戟天；炮制；糖类成分
Effects of Processing Ways on Carbohydrate Constituents of Morinda officinalis
CHEN Di-ling，SHUAI Ou，LIN Li，WANG Jin-yu，ZHUANG Man-xian，CHEN Kang，HU Yun-long（Colle-
ge of Chinese Materia Medica，Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine，Guangzhou 510006，
China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To compare the carbohydrate constituents and fingerprints of Morinda officinalis processed by differ-
ent processed ways. METHODS：Ultraviolet-visible absorption spectroscopy was used to determine the contents of alcohol and hy-
drophillic carbohydrate in M. officinalis. HPLC-ELSD was employed to establish HPLC-ELSD fingerprints of the different pro-
cessed samples.RESULTS：The contents of carbohydrate in processed samples were different from crude substance. There were 14
common characteristic peaks demonstrated by HPLC-ELSD，and it showed that the carbohydrate constituents of different processed
products were similar but their relative rations were significantly different. CONCLUSION：Processing ways influence the dissolu-
tion of carbohydrate constituents of M. officinalis.
KEY WORDS Morinda officinalis；Processed；Carbohydrate constituents
Δ海南省重点科技计划项目（090603）
＊博士研究生。研究方向：中药资源开发利用与新药研发。电
话：020-39358270。E-mail：diling1983@163.com
#通讯作者：研究员，博士研究生导师。研究方向：中药资源开发
利用与新药研发。电话：020-39358270。E-mail：lwyll@gzhtcm.edu.cn
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