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红葱对急性胃黏膜损伤的保护作用及抗氧化作用



全 文 :Dracocephalum moldavica L. different extracts of 100 mg /kg and 400 mg /kg can extension arterial thrombosis induced by FeCl3 and signifi-
cantly decease wet weight of thrombus(P < 0. 05 or P < 0. 01);markedly increase the survival rate of the mouse suffering from Pulmonary
thrombosis induced by the mixture of collagen and epinephrine(P < 0. 05 or P < 0. 01)and significantly decreased the weight of thrombus liga-
tion of inferior venacava(P < 0. 05 or P < 0. 01) ;the dose were 400 mg / kg alcohol extracts effect is most significant(P < 0. 01). Conclu-
sion:Dracocephalum moldavica L. alcohol extracts and n-butanol fraction showed better anti-platelet aggregation ;alcohol extracts have strong
anti-thrombotic activity.
Key words Dracocephalum moldavica L(香青兰);thrombin;anti-platelet aggregation;anti-thrombotic;
红葱对急性胃黏膜损伤的保护作用及抗氧化作用
戴娇娇1,闵庆喜1,钟彩红1,朱全红1* ,王红星2
(1南方医科大学中医药学院,广州 510515;2广州白云华南生物科技有限公司,广州 510545)
摘 要 目的:研究红葱乙醇提取物对实验性急性胃黏膜损伤的保护作用及其抗氧化作用,并研究了红葱的急性毒性。方
法:采用无水乙醇诱导大鼠胃溃疡损伤模型,通过测定胃黏膜溃疡指数观察红葱乙醇提取物不同剂量组对大鼠胃黏膜损伤的保护
作用;采用老龄小鼠模型,测定小鼠血液和肝组织中 SOD、GSH-Px 活性与 MDA的含量;采用小鼠最大耐受量( MTD) 灌胃法,间隔 6
小时连续 3 次给药后,常规饲养小鼠 14 天,记录小鼠毒性反应情况,死亡数目及体重变化。结果:与模型组比较,红葱乙醇提取物中
剂量组( 18. 75g /kg) 能显著减小溃疡大鼠的溃疡面积,降低血液中 MDA含量,增强 SOD活性及 GSH-Px活性;红葱乙醇提取物能显
著增强血液中 SOD活性及 GSH-Px活性;红葱乙醇提取物高剂量组、中剂量组能明显降低肝组织中 MDA含量,增强 SOD活性; 低剂
量组能明显降低肝组织中 MDA含量,增强 GSH-Px活性。小鼠 1 天内的最大给药量为 112. 5g /kg,14 天内未见小鼠出现毒副反应。
结论:红葱乙醇提取物具有保护胃黏膜作用和抗氧化作用,初步评价无明显毒性作用。
关键词 红葱;胃黏膜损伤保护;抗氧化作用;急性毒性
红葱为鸢尾科(Iridaceae)植物红葱(Eleutherine plicata)的
鳞茎,红葱主治吐血,咯血,痢疾,闭经腹痛,风湿痹痛,跌打损
伤,疮疖肿毒的功效。从红葱中分离得到的红葱甲、乙、丙素的
混合结晶制成的片剂用于冠心病有较好疗效且未见明显副作
用[1]。另有文献报道同属植物红葱(Eleutherine americana)的
主要活性成分为萘醌衍生物及其葡萄糖苷,具有扩张冠状动
脉[2]、体外抗菌[3]、抗人体肿瘤细胞活性[4]、降低血糖[5]、促进
细胞生长[6]、作为天然抗氧剂抑制脂质过氧[5]等药理作用,由
此推断红葱具有胃黏膜保护作用和抗氧化作用。目前对红葱
(Eleutherine plicata)的药理作用研究仍然比较少,为进一步的
开发和临床用药提供药理基础,本文探讨了红葱在保护胃黏膜
方面的作用及抗氧化作用,并探究其急性毒性。
1 材料与方法
1. 1 试验药物 红葱乙醇提取物:红葱采集于广州华南生物科
技有限公司药材基地,经马骥教授鉴定为鸢尾科红葱 Eleuther-
ine plicata鳞茎;制备方法[4,7]为红葱药材加入 10 倍(V/W)
95%乙醇,浸渍 30min 后,87℃水浴加热回流 2h,过滤,滤液
40℃、30rpm减压回旋蒸发,回收乙醇,浓缩液蒸发至无醇味,加
蒸馏水配成不同浓度的受试物溶液。西咪替丁片,广东恒健制
药有限公司,国药准字 H44020624,产品批号 110403;维生素 E
软胶囊 (天然型),青岛双鲸药业有限公司,国药准字
H20043134,产品批号 110708。
1. 2 动物 Wistar大鼠 72 只,雄性,体重(200 ± 20)g,由广东
省医学实验动物中心提供,生产许可证号:SCXK(粤)2008-
0002。9 月龄 CD-1 小鼠 50 只,雄性,体重(40 ± 5)g,4 周龄 CD-
1 小鼠 10 只,雄性,体重(20 ± 2)g,均由北京维通利华实验动物
技术有限公司提供,动物合格证号:SCXK(京)2007-0001。SPF
级昆明小鼠 40 只,雌雄各半,体重(20 ± 2)g,由南方医科大学
实验动物中心提供,生产许可证号:SCXK(粤)2011-0015。
1. 3 试剂 丙二醛(MDA)试剂盒、超氧化物歧化酶(T-SOD)
试剂盒、谷胱甘肽氧化物酶(GSH-Px)试剂盒(均由南京建成生
物工程研究所提供,生产批号分别为 20111213、20111222、
20111219)。
1. 4 仪器 GG17R 系列旋转蒸发器(上海申生科技有限公
司);Agilent8453 紫外分光光度计(美国惠普公司);KDC-12 低
速离心机(安徽中科中佳科学仪器有限公司)。
1. 5 方法
1. 5. 1 胃溃疡损伤实验 以体重为 60kg 的人的日用量为 45g
换算,大鼠的等效剂量为 7. 5g /kg,设定此为低剂量,2. 5 倍等效
剂量为中剂量,5 倍等效剂量为高剂量。具体如下:红葱乙醇提
取物高剂量(37. 5g /kg)、中剂量(18. 75g /kg)、低剂量(7. 5g /
kg)、西咪替丁(150mg /kg,蒸馏水配液)、模型组(2ml 蒸馏水)、
空白组(2ml蒸馏水)。
将大鼠随机分为 6 组,每组 12 只:空白组、模型组、西咪替
丁组、红葱乙醇提取物高、中、低剂量组。大鼠适应性饲养 3 天
后,空白组和模型组给予 2ml蒸馏水灌胃,阳性对照组给予西咪
98中药药理与临床 2013;29(6)
DOI:10.13412/j.cnki.zyyl.2013.06.029
替丁溶液灌胃,其他组分别给予各不同浓度受试物溶液,每天 1
次,连续 14 天,常规饲养。急性胃黏膜损伤造模[8 ~ 10]前禁食不
禁水 24h,末次给药 1h后,空白组以蒸馏水灌胃(2ml /只),其余
5 组以无水乙醇灌胃(1ml /只),禁水。1h 后颈部脱臼处死动
物,开腹,取胃部,分别结扎胃幽门及贲门并向胃内注入
6ml10%甲醛溶液,置于 10%甲醛溶液中固定 20min,沿胃大弯
剪开胃,用游标卡尺测定溃疡面直径。按以下标准转化,据此确
定胃粘膜损伤的程度。
全胃各溃疡面直径之和为溃疡指数。抑制率 =(模型组溃
疡指数-给药组溃疡指数)/模型组溃疡指数 × 100%。
评分标准:
4 个以下的小溃疡或溃疡面直径小于 0. 5mm 1 分
4 ~ 8 个以下的小溃疡或溃疡面直径为 0,5mm ~1. 0mm 2 分
9 ~ 16 个以下的小溃疡或溃疡面直径为 1. 0 ~ 2. 0mm 3 分
16 个以上的小溃疡或溃疡面直径为 2. 0 ~ 4. 0mm 4 分
溃疡面直径大于 4mm 5 分
溃疡面直径大于 10mm 10 分
溃疡面直径大于 20mm 15 分
1. 5. 2 过氧化损伤模型的建立[11 ~ 13] 将老龄小鼠随机分为 5
组,每组 10 只:红葱乙醇提取物高剂量组(37. 5g /kg)、中剂量组
(18. 75g /kg)、低剂量组(7. 5g /kg)、维生素 E组(100mg /kg)、模
型组(1ml蒸馏水)。小鼠适应性饲养 10 天后,模型组给予 1ml
蒸馏水灌胃,阳性对照组给予维生素 E 乳化液(用 1%吐温-80
配成 100mg /kg乳化液[14])灌胃,其他组分别给予对应各不同浓
度受试物溶液,每天 1 次,连续 42 天,常规饲养。另取 4 周龄小
鼠 10 只作为空白组(1ml蒸馏水)。
小鼠第 42 天给药后开始禁食不禁水 24h,第 43 天给予对
应供试品 1h后,采用眼眶取血的方式,取血约 1ml,分别制备一
定浓度的血浆与红细胞抽提物。按试剂盒方法分别测定血浆
中 MDA(硫代巴比妥酸法)含量、GSH-Px 的活性以及红细胞抽
提物中的 T-SOD(羟胺比色法)活性。
1. 5. 3 急性毒性试验方法[15,16] 选用 SPF 级昆明小鼠随机
分为雄性对照组、雄性给药组、雌性对照组、雌性给药组,每组
10 只。实验采用最大耐受剂量法:设定剂量为 37. 5g /kg,灌胃
量为 0. 5ml /20g,累计剂量为 112. 5g /kg。给药组首次灌胃前禁
食 16h,自由饮水,24h内间隔 6h连续 3 次灌胃。对照组灌胃给
予同量蒸馏水。记录动物中毒症状及死亡情况。连续观察 14
天,①观察给药后小鼠的毛皮光滑感,饮食,大小便,眼、鼻分泌
物,黏膜,呼吸等;②观察小鼠的活动情况及自主神经反应,如发
声、举尾、震颤、抽搐、觅食等;③给药前和给药后的第 1、3、5、7、
9、11、13、15 天,测量小鼠体重;④实验动物 14 天后,观察主要
脏器。
2 结果
2. 1 溃疡指数的测定 与空白组相比,模型组溃疡指数明显高
于空白组,红葱对无水乙醇致胃黏膜损伤的保护作用大小顺序
为红葱乙醇提取物中剂量组 >高剂量组 >阳性对照组 >低剂
量组 >模型组 >空白组。与模型组相比,红葱乙醇提取物高、中
剂量组对无水乙醇所致的大鼠胃黏膜损伤有明显的抑制作用,
其中中剂量组相对模型组作用显著,结果见表 1。
2. 2 溃疡面形态学描述 解剖大鼠胃部,发现大鼠胃内部有白
色附着物,除去白色附着物发现红葱乙醇提取物组胃黏膜内部
呈红色(红色深浅为红葱乙醇提取物高剂量组 >中剂量组 >低
剂量组),且红色物可用 10%甲醛溶液洗去,洗去后可发现溃疡
面(条索状和片状糜烂及出血)。阳性对照组、模型组、空白组
大鼠胃内均未发现红色物质。
表 1 红葱对无水乙醇致大鼠胃黏膜损伤的保护作用(珋x ± s,n = 12 )
分组
剂量
(g /kg)
溃疡指数
抑制率
(%)
平均秩次
空白对照 0. 00 ± 0. 00 5. 50**
模型对照 69. 00 ± 47. 38 62. 45
西咪替丁 0. 15 31. 00 ± 18. 14 49. 50*
红葱乙醇提取物 37. 5 17. 75 ± 8. 09 74. 28 36. 33*
红葱乙醇提取物 18. 75 10. 50 ± 4. 48 84. 78 24. 00**
红葱乙醇提取物 7. 5 36. 83 ± 20. 78 46. 62 53. 46
与模型组相比 * P <0. 05,** P <0. 01(下同)
2. 3 对小鼠血液 MDA 含量、SOD 活性、GSH-Px 活性的影响
与空白组相比,模型组 MDA 含量显著增加,SOD 活性显著降
低,GSH-Px活性显著降低,证明实验用老龄小鼠造模成功。与
模型组相比,红葱乙醇提取物中剂量组 MDA 含量明显降低;高
剂量组、中剂量组的 SOD活性明显升高;高剂量组、中剂量组的
GSH-Px活性明显升高,结果见表 2。
表 2 各组小鼠血液 MDA含量、SOD活性、GSH-Px活性(珋x ± s,n =
10 )
组别
剂量
(g /kg)
MDA含量
(U/ml)
SOD活性
(U/gHb)
GSH-Px活性
(U/ml)
空白对照 313 ± 199* 9217 ± 2008** 627 ± 117*
模型对照 457 ± 191 6134 ± 2017 480 ± 86
维生素 E 0. 1 262 ± 171 22148 ± 3683 741 ± 128
红葱乙醇提取物 37. 5 413 ± 243 21184 ± 178** 691 ± 259*
红葱乙醇提取物 18. 75 137 ± 160** 14757 ± 65234 160 ± 104**
红葱乙醇提取物 7. 5 546 ± 179 15310 ± 8448 412 ± 227
2. 4 对小鼠肝组织 MDA 含量、SOD 活性、GSH-Px 活性的影响
与空白组相比,模型组 MDA含量显著增加,SOD 活性显著降
低,GSH-Px活性显著降低,证明实验用老龄小鼠造模成功。与
模型组相比,肝组织中红葱乙醇提取物高剂量组、中剂量组、低
剂量组的 MDA含量明显降低;高剂量组、中剂量组的 SOD活性
明显升高;低剂量组的 GSH-Px活性明显升高,结果见表 3。
表 3 各组小鼠肝组织中 MDA 含量、SOD 活性、GSH-Px 活性(珋x ±
s,n = 10 )
组别
剂量
(g /kg)
MDA含量
(U/mg·prot)
SOD活性
(U/mg·prot)
GSH-Px活性
(U/mg·prot)
空白对照 24. 57 ± 13. 21* 91. 51 ± 26. 14* 169. 46 ± 57. 22*
模型对照 39. 06 ± 14. 92 66. 73 ± 22. 18 104. 87 ± 65. 69
维生素 E 0. 1 12. 42 ± 5. 83 403. 06 ± 86. 63 255. 15 ± 116. 28
红葱乙醇提取物 37. 5 18. 96 ± 19. 39* 293. 93 ± 75. 03** 209. 28 ± 177. 92
红葱乙醇提取物 18. 75 17. 83 ± 7. 70** 144. 69 ± 54. 52** 179. 59 ± 42. 93
红葱乙醇提取物 7. 5 10. 58 ± 12. 86** 84. 95 ± 49. 04 67. 82 ± 20. 83**
2. 5 小鼠存活情况 24 小时内间隔 6 小时连续给药 3 次,其
间小鼠活动正常,未发现中毒症状及死亡情况。连续对小鼠观
察 14 天,没有出现因为药物而引起的死亡例数。给药组小鼠粪
便在给药 36 小时内显暗红色,36 小时后与对照组无异。尿液
无异常。小鼠于给药后 14 天处死进行尸检,肉眼观察小鼠主要
脏器,无病理改变。给药组与对照组比较四组小鼠体重差异均
无统计学差异。
3 讨论
09 中药药理与临床 2013;29(6)
3. 1 胃溃疡损伤实验 西咪替丁作阳性药(150mg /kg),其对
无水乙醇致大鼠胃黏膜损伤的保护作用弱于红葱提取液,原因
可能是西咪替丁给药剂量过低,未达到作用浓度或者未达到作
用时间,而且与红葱乙醇提取物对无水乙醇致大鼠胃黏膜损伤
保护作用的机制也可能不同。从实验结果看,红葱乙醇提取物
高剂量组对胃黏膜损伤的保护作用弱于中剂量组,原因可能是
红葱提取液中的乙醇尚未挥干,使配制的高剂量供试物中含有
乙醇,以致给药过程中,大鼠持续受乙醇刺激,造成胃溃疡效果
更明显。另外,采用无水乙醇诱导大鼠胃黏膜损伤的造模方法
对大鼠个体有差异性。
3. 2 抗氧化实验 本实验结果显示,与模型组比较,红葱乙醇
提取物中剂量组能显著降低血液中 MDA 含量,增强 SOD 活性
及 GSH-Px活性;红葱乙醇提取物高剂量组能显著增强血液中
SOD活性及 GSH-Px活性;红葱乙醇提取物高剂量组、中剂量组
能明显降低肝组织中 MDA含量,增强 SOD活性;低剂量组能明
显降低肝组织中 MDA 含量,增强 GSH-Px 活性,表明红葱提取
物具有一定的抗氧化的作用。
3. 3 急性毒性试验 该急毒实验剂量为每日 112. 5g /kg,相当
于人(体重为 60kg)日服用量的 15 倍。可初步评价红葱乙醇提
取物对实验动物无明显的急性毒性反应及不良反应。
参考文献
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Protective effects on gastric mucosal lesion and antioxidation of ethanol extracts from Eleutherine plicata
Dai Jiaojiao1,Min Qingxi1,Zhong Caihong1,Zhu Quanhong1,Wang Hongxing2
(1 School of Chinese Medicines,Southern Medical University,Guangzhou 510515;
2 Guangzhou Baiyun Huanan Bio-Tech Co.,Ltd,Guangzhou 510545)
Objective:To study the protective effects of ethanol extracts from Eleutherine plicata on experimental gastric mucosal lesion in rats,an-
tioxidation and acute toxicity. Methods:The ulcer index were measured in each group of gastric ulcer injury rats induced by absolute ethanol.
The content of MDA,SOD activity and GSH-Px activity were also measured in hepatic tissue and blood. The toxic reaction,death number and
weight growth of mice were observed after administrating the extracts three times a day with the maximum tolerance dosage method and breed-
ing for 14 days under the conventional condition. Results:Compared with model group,middle-dose group (18. 75g /kg BW)could significant-
ly reduce the ulcer area(P < 0. 05)and the content of MDA and strengthen SOD and GSH-Px activity in blood. Large-dose group of ethanol
extracts from Eleutherine plicata could also strengthen SOD and GSH-Px activity in blood. In addition,large-dose group and middle-dose
group could reduce the content of MDA and strengthen SOD activity in hepatic tissue while low-dose group could reduce the content of MDA
and strengthen GSH-Px activity. No any abnormal reactions were observed in 14 days after administrating 112. 5g /kg of the maximum dosage
within 1 day to mice. Conclusion:Eleutherine plicata extracts showed significant protective effect to gastric mucosal injury rats and antioxida-
tion,and no obvious toxicity reactions were observed by preliminary acute toxicity experiment.
Key words Eleutherine plicata(红葱);ethanolic extract;gastric mucosa injury protection;mechanisms;acute toxicity
19中药药理与临床 2013;29(6)