全 文 ：书华山松松塔提取物抗 HIV活性部位中铅含量的测定
张 桢1，孙帮燕1，郭贵唐1，罗建蓉2*
(1． 昆明医科大学附属儿童医院 /昆明市儿童医院检验科中心实验室，云南昆明 650028;2．大理大学药学与化学学院，云南大理 671000)
摘要 ［目的］为了分析华山松松塔提取物抗 HIV活性部位中铅含量。［方法］应用石墨炉原子吸收光谱法，参照中华人民共和国药典
2010版［附录Ⅸ B 铅、镉、砷、汞、铜测定法(一部)］测定活性部位中铅含量。［结果］活性部位中铅含量在中华人民共和国对外经济贸
易合作部《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》和《中国药典》规定范围(Pb≤5． 0 mg /kg )之内，没有超标。［结论］该方法简单、方
便、快速、灵敏，为抗 HIV活性部位重金属铅含量测试提供一种可靠的方法。
关键词 含量测定;铅;抗 HIV活性部位;华山松;石墨炉原子吸收光谱法
中图分类号 S791． 241 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2015)11 －001 －02
Determination of Lead Content in anti-HIV Active Sites from Pine Cone of Pinus armandii Franch．
ZHANG Zhen1，SUN Bang-yan1，GUO Gui-tang1，LUO Jian-rong2* (1． Centeral Lab of Clinical Laboratory of Kunming Children’s
Hospital，Affiliated Children’s Hospital of Kunming Medical University，Kunming，Yunnan 650028;2． College of Pharmaceutical Science，
Dali University，Kunming，Yunnan 671000)
Absttract Objective［Objective］The research aimed to determine lead content in the activity sites from pine cone of Pinus armandii Franch．
［Method］Graphite furnace atomic absorption spectrometry was used to determine lead in the activity sites．［Ｒesult］According to standards of
Ministry of Foreign Trade and Economic and Pharmacopoeia of China，the lead in three extracts were lower than the limited standard levels．
［Conclusion］The method is simple，quick with high sensitivity，and it can be used to determine lead content in the activity sites from pine
cone of Pinus armandii Franch．
Key words Content determination;Lead;Anti-HIV active site;Pinus armandii;Graphite furnace atomic absorption spectrometry
基金项目 国家自然科学基金(81102350) ;云南省教育厅重点项目
(2011Z049) ;云南省医学学科带头人(D-201254)基金。
作者简介 张桢(1976 －) ，男，彝族，云南凤庆人，副教授，硕士，从事抗
病毒天然药物有效成分分离与分析和血药浓度方面的研
究。* 通讯作者，副教授，硕士，从事天然药物化学成分的
分离鉴定、教学工作。
收稿日期 2015-03-09
病原体为人免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency vi-
rus，HIV)的疾病，临床上称其为获得性免疫缺陷综合症
(Acquiredimmune deficiency syndrome /AIDS)。如果机体感染
HIV，那么机体的免疫细胞功能将会衰退且免疫细胞数量会
衰退，导致机体增加恶性肿瘤发生机率或感染，最终导致感
染者死亡。HIV不仅严重威胁着人类的健康，而且阻碍全球
经济和社会的发展［1］。目前，尽管美国批准上市的 HIV的药
物有 20多种，但是价格昂贵、毒副作用大，作用环节单一，易
出现耐药性［2 －3］。
松科松属植物资源丰富，全世界约 100多种。我国松属
植物分布极广，合计 50 余种(有 22 种，10 个变种，引进 16
种，2个变种)［4］。据《本草纲目》记载，松塔具有祛痰、祛风、
止咳平喘、安神和润肠等功效［5］。在我国，已有 13种被列入
药用的松属植物，其能入药部位主要为松塔及松子、松针、松
脂、松节等。从目前松塔研究报道中发现，松塔中含有多糖、
酚类、木质素类、萜类、黄酮类多种化学成分，且发现松塔药
理活性具有抗病毒、抗肿瘤、抗菌、增强免疫力等作用［6 －8］。
尽管中华人民共和国药典把 13 种松属植物列入药用，
但目前报道松属的松塔药用开发不是很多，尤其关于松塔抗
HIV药用的研究报道很少［9］。为此，笔者对采集于云南省巍
山县的华山松(Pinus armandii Franch．)松塔进行研究，测定
松塔提取物中(抗 HIV 治疗指数 ＞ 30)铅的含量，为进一步
研究抗 HIV药物质量标准打下基础。
1 材料与方法
1． 1 试验材料 取干燥的华山松(P． armandii Franch．)松
塔(生药学马晓宽教授鉴定)5 kg，粉碎，用一定浓度的乙醇
(90%)在室温条件下提取 2 次(2 × 9 L) ，每次 12 h。过滤，
残渣用水浸泡提取，过滤后残渣中加碱液(浓度 4%氢氧化
钠)浸泡提取，过滤，向得到的碱性滤液加入酸(用乙酸调
pH) ，浓缩到适量体积，加入乙醇混匀，静置 12 h，过滤得到粗
提取物Ⅰ;在滤液中继续加醇液，静置12 h，过滤得到粗提取物
Ⅱ;滤液中再加醇液，静置 12 h，过滤得到粗提取物Ⅲ。
1． 2 试验方法
1． 2． 1 测定条件。波长为 283． 1 nm［5］;背景校正为塞曼效
应;狭缝 0． 7 nm;样品进样量 17 μl，0． 5%基体改进剂硝酸镁
和硝酸钯的混合液 3 μl，高纯氩气为保护气(250 ml /min)。
升温程序(表 1):第 1次干燥温度 110 ℃，坡升时间 1 s，持
续时间 30 s;第 2次干燥温度 130 ℃，坡升时间 15 s，持续时
间 30 s;灰化温度 850 ℃，坡升时间 10 s，持续时间 20 s;原子
化温度 1 600 ℃，坡升时间 0 s，持续 5 s;净化温度 2 450 ℃，
坡升时间 1 s，持续时间 3 s。
表 1 升温程序
序号 步骤
温度
℃
坡升时
间∥s
内部流量
ml /min
气体类型
持续时
间∥s
1 干燥 110 1 250 高纯氩气 30
2 干燥 130 15 250 高纯氩气 30
3 灰化 850 10 250 高纯氩气 20
4 原子化 1 600 0 0 高纯氩气 5
5 净化 2 450 1 250 高纯氩气 3
1． 2． 2 铅标准储备液和标准使用液的制备。精密量取铅单
元素标准液(GB08619)适量，用浓度 2%硝酸溶液稀释，即得
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2015，43(11) :1 － 2 责任编辑 刘月娟 责任校对 李岩
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2015.11.134
1 μg /ml铅标准储备溶液，冰箱中 0 ～5 ℃保存［5］。精密量取
铅标准储备液适量，用浓度 2%硝酸溶液稀释，配制 400
ng /ml标准使用液(用时现配)。
1． 2． 3 标准曲线的制备。分别精密量取铅标准使用液 0、
0． 312、0． 625、1． 250、2． 500、5． 000、10． 000 ml于 25 ml容量瓶
中，用浓度 2%硝酸溶液定容至刻度，摇匀，即得 0、5、10、20、
40、80、160 ng /ml的溶液。按“1． 2． 1”用自动进样器自动进
样，于石墨炉原子吸收光谱仪上测试。扣除试剂空白，以吸
光度值(A)对铅浓度(C，ng /ml)做线性回归处理，回归方程
为:A =0． 002 85C +0． 003 93，相关系数(r)=0． 999 0，线性范
围为 0 ～200 ng /ml。
1． 2． 4 样品测定。参照中华人民共和国药典［2010 版附录
Ⅸ B 铅、镉、砷、汞、铜测定法(一部)(B法) ］处理标本［5］，分
别精密称取 3 种抗 HIV 活性部位(治疗指数 ＞ 30)［4］样品
0． 20 g，置三角瓶中，加硝酸 /高氯酸(4∶1)10 ml，瓶口加一小
漏斗，浸泡过夜，在通风厨里置电热板上加热消解，保持微
沸，直至浓烟散尽，消解液呈透明，再加去离子水，待白烟散
尽，定容至 25 ml。同时，制备空白液，按测定条件进行测定。
2 结果与分析
2． 1 方法学考察
2． 1． 1 精密度试验。取松塔样品Ⅰ～Ⅲ，按“1． 2． 4”项中的方
法和步骤进行操作，重复测定吸光度 6 次。表 2 表明，样品Ⅰ
～ⅢＲSD分别为 1． 50%、1． 77%、1． 53%，说明该方法精密度
良好。
表 2 精密度试验
测定次数 Ⅰ浓度∥ng /ml Ⅱ浓度∥ng /ml Ⅲ浓度∥ng /ml
1 26． 92 21． 89 23． 06
2 27． 02 21． 73 23． 61
3 27． 52 21． 01 23． 99
4 27． 01 21． 75 23． 21
5 27． 99 21． 59 23． 26
6 27． 21 22． 16 23． 11
ＲSD∥% 1． 50 1． 77 1． 53
2． 1． 2 稳定性试验。取松塔样品Ⅰ～Ⅲ，按“ 1． 2． 4”项中的
方法和步骤进行操作，每隔 20 min测定一次吸光度。表 3表
明，2 h内颜色变化较小，不影响测定。
表 3 稳定性试验
间隔时间
min
Ⅰ浓度
ng /ml
Ⅱ浓度
ng /ml
Ⅲ浓度
ng /ml
0 27． 51 21． 29 23． 71
20 27． 62 21． 79 23． 47
40 27． 71 21． 61 23． 5
60 27． 19 21． 71 23． 55
80 27． 37 21． 01 23． 37
100 27． 13 21． 23 23． 24
120 27． 03 21． 60 23． 21
2． 1． 3 回收率试验。采用加标回收法，取松塔样品Ⅰ～Ⅲ，加
入 0． 5 ～2． 0倍标准品，按“1． 2． 4”项中的方法和步骤进行操
作，测定其吸光度，并且计算回收率。表 4表明，平均回收率
为 99． 79%，ＲSD为 4． 45%。
表 4 回收率试验结果
编号
本底
ng
标准加入
量∥ng
测得量
ng
回收率
%
平均回
收率∥%
ＲSD
%
1 682 400 1 075 98． 25 99． 79 4． 45
2 542 600 1 120 96． 33
3 584 1 000 1 632 104． 80
2． 1． 4 方法检出限。参照中华人民共和国对外经济贸易合
作部《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》［10］，该法检出
限为 5． 0 μg /kg。
2． 1． 5 评价结果。采用《中国药典》［5］(2010 年版)和中华
人民共和国对外经济贸易合作部《药用植物及制剂进出口绿
色行业标准》［10］重金属最高限定的标准评价。结果表明，提
取物Ⅰ～Ⅲ铅含量分别为3． 41、2． 71、2． 92 mg /kg，低于中华人
民共和国对外经济贸易合作部《药用植物及制剂进出口绿色
行业标准》(Pb≤5． 0 mg /kg)和《中国药典》(2010年版)重金
属最高限定的标准(Pb≤5． 0 mg /kg) ;超标率为 0。
3 讨论
在取样和样品消解过称中，所有玻璃仪器均需以
16． 67%硝酸浸泡过夜，用水反复冲洗，最后用去离子水冲
洗，以免污染试样。石墨炉原子吸收光谱分析法是一种灵敏
度高、适合测定铅的测试技术，但是存在基体干扰严重等缺
点，故在石墨炉原子吸收分光光度分析工作中，应注意背景
和其他原因引起的对测定结果的干扰。如，仪器工作原子化
条件可能影响仪器的灵敏度、稳定程度。试验中，选择塞曼
效应为背景校正系统［7］。该研究表明，浓度 0． 5%硝酸镁和
硝酸钯是一种良好的基体改进剂，因此在校准曲线和标本测
试过程中，设置自动进样器同时加入改进剂，就可以满足测
定需要，减少测试步骤，避免基体干扰测试结果。按提取工
艺对采自于云南省巍山县的华山松(Pinus armandii Franch．)
松塔进行处理，得到抗 HIV活性部位铅含量没有超标。
参考文献
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2 安徽农业科学 2015 年