全 文 ：书* 基金项目: 贵州省农业攻关项目( 黔科合 NY［2011］309) 及贵州省人才团队项目( 黔科合人才团队( 2010) 4008) ．
* 通讯作者: 郁建平，男，教授，博士生导师。研究方向: 生化分离工程及天然产物化学等。E － mail: yujp666666@
163. com
收稿日期:
檰檰檰
檰
檰檰檰
檰
殕
殕殕
殕
2012 － 06 － 14
基金
论文 藤茶总黄酮抗炎及抑菌作用的实验研究
*
陈 帅，郁建平*
( 1. 贵阳中医学院药理教研室，贵州贵阳 550002; 2. 贵州大学，贵州贵阳 550025)
摘要:目的:探讨藤茶总黄酮的抗炎及抑菌作用，以验证该药材的相关药效。方法:采用二甲苯致小鼠耳廓急性炎症
法对藤茶总黄酮的抗炎作用进行研究; 采用平板打孔法测定藤茶总黄酮的抑菌效果，以试管两倍稀释法测定藤茶总黄酮
的最小抑菌浓度( MIC) 和最小杀菌浓度( MBC) 。结果:藤茶总黄酮高剂量组抗炎效果显著，低、中剂量组抑制效果不明
显; 藤茶总黄酮对 5 种供试菌均有抑菌效果，且抑制志贺氏菌效果最显著，抑制大肠杆菌效果最不显著。结论:藤茶总黄
酮具有较好的抗炎及抑菌作用。
关键词:显齿蛇葡萄; 藤茶总黄酮; 抗炎; 抑菌
Doi: 10. 3969 / j. issn. 1002 － 1108. 2013. 01. 0001
中图分类号:Ｒ 965. 2 文献标识码:A 文章编号:1002 － 1108( 2013) 01 － 0001 － 03
藤茶，学名显齿蛇葡萄 Ampelopsis grossedentata (Hand
－ Mazz)W. T. Wang，属葡萄科蛇葡萄属的一种木质藤本
植物，分布于我国云南东南部、广西、广东、福建、江西、湖
南、贵州、湖北西部［1］。藤茶是一种非常古老的传统中草
药，为我国民间广泛使用的药食两用植物，全株药用，味
甘、淡，性凉，具有清热解毒、祛风湿、强筋骨之功效，主治
皮肤癣癞、黄疸型肝炎、感冒风热、咽喉肿痛等［2］。研究发
现，藤茶中黄酮类化合物的含量最高，有文献报道藤茶中
总黄酮含量高达 40%左右，其药理活性主要与黄酮类化合
物有关。本试验采用二甲苯
致小鼠耳廓急性炎症法对藤茶总黄酮的抗炎作用进
行研究，并通过体外抑菌试验对藤茶总黄酮的抑菌活性进
行了评价，测定了藤茶总黄酮的最小抑菌浓度(MIC)和最
小杀菌浓度(MBC) ，为藤茶的临床研究提供实验依据，以
利于其进一步的研究开发。
1 材料
1. 1 实验材料 贵州藤茶干燥茎叶，2011 年 6 月采自贵
州江口梵净山太平镇，由贵州大学生命科学学院植物教研
室廖海民教授鉴定为葡萄科蛇葡萄属植物显齿蛇葡萄
(Ampelopsis grossedentata)。
实验材料干燥后粗碎(20 目) ，用 70%乙醇浸泡 30min
后进行超声提取［3］，提取液回收乙醇后加水溶解，采用
DM301 大孔树脂对藤茶黄酮提取液进行分离纯化，得到总
黄酮含量为 72% 的浸膏。抗炎试验前用蒸馏水配置成
3mg /ml、4mg /ml、5mg /ml 的水溶液，于 4℃冰箱中保存备
用;罗红霉素片，宜昌长江药业有限公司，生产批号:
20100614;复方黄连素片，湖北诺得胜制药有限公司，生产
批号:20091029;青霉素 V钾片，吉林显峰科技制药有限公
司，生产批号:20100123。
1. 2 实验试剂 无水乙醇，重庆川东化工有限公司化学试
剂厂，生产批号:20001024;二甲苯，重庆川江化学试剂厂，
生产批号:20010927。
1. 3 实验仪器 METTLEＲ AE240 电子分析天平(奥豪斯
仪器(上海)有限公司) ;GZX － 9140 电热恒温鼓风干燥箱
(上海博迅实业有限公司医疗设备厂) ;DJ － 200A 电子天
平(亚太电子天平(中外合资) ) ;S6208 － A 型手提式压力
蒸汽消毒器(中国四川省成都医疗器械厂) ;DPH781 电热
恒温培养箱(湖北省黄石市医疗器械厂) ;超净工作台(上
海市纯昱科学仪器有限公司)。
1. 4 实验动物 昆明种小鼠 50 只，雄性，体重 20 ± 2g，由
贵阳医学院实验动物研究中心提供，动物质量合格证:
SCXK(黔)2002 － 2001。
1. 5 实验菌种 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、
志贺氏菌(Shigellae)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、沙门
氏菌(Salmonella)、大肠杆菌(Escherichia coli) ，由贵州大
学生命科学学院微生物实验室提供。
2 实验方法
2. 1 采用二甲苯致小鼠耳廓急性炎症法对藤茶总黄酮的
抗炎作用进行研究;
2. 2 采用平板打孔法测定藤茶总黄酮的抑菌效果，以试管
·1·
第 35 卷 第 1 期
2013 年 1 月
贵阳中医学院学报
JGCTCM
No. 1 Vol. 35
January 2013
书两倍稀释法测定了藤茶总黄酮的最小抑菌浓度(MIC)和最
小杀菌浓度(MBC)。
3 统计学处理
对二甲苯致小鼠耳廓急性炎症试验数据进行统计分
析，各组试验数据以X ± S 表示，用 t 检验进行组间显著性
检验，P ＜ 0. 05 表示差异有统计学意义。
4 实验过程及结果
4. 1 藤茶总黄酮对二甲苯所致小鼠耳廓急性炎症的抗炎
作用［4］取体重 20 ± 2g 的雄性昆明种小鼠 50 只，随机分为
5 组，每组 10 只。分别为空白组、藤茶总黄酮低、中、高浓
度组和罗红霉素对照组，各组小鼠按 50ml /kg剂量给药，空
白组小鼠灌以相同剂量蒸馏水，1 次 /d，连续 5d。末次给药
30min后，将小鼠的右侧耳廓正反面均匀涂抹二甲苯
0. 1ml，15min后颈椎脱臼处死。用直径 6mm 的打孔器将
双耳同部位等面积切下，并立即称取左右耳片重量，计算
耳廓肿胀度和肿胀抑制率，并与对照组进行比较，结果见
(表 1)。
表 1 藤茶总黄酮对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(x ± s，n = 10)
组别 剂量(mg /kg) 肿胀度(mg) 肿胀抑制率
空白组 － 15. 21 ± 3. 84 －
罗红霉素组 35 10. 56 ± 4. 76＊＊ 30. 57
总黄酮低剂量组 150 13. 89 ± 3. 45 8. 68
总黄酮中剂量组 200 12. 56 ± 4. 17 17. 42
总黄酮高剂量组 250 11. 33 ± 4. 37* 25. 51
注:与空白对照组比较，＊＊p ＜ 0. 01;* p ＜ 0. 05
4. 2 藤茶总黄酮体外抑菌作用的研究［5］
4. 2. 1 培养基的制备 细菌培养基的配置:牛肉膏 3 ～
5g，蛋白胨 10g，NaCl 5g，蒸馏水 1000ml，调 pH 值 7. 4 ～
7. 6，加琼脂粉 20 ～ 25g。
4. 2. 2 供试菌种的活化 无菌操作下，将所有供试菌种介
入相应的试管斜面培养基上，置于 37℃恒温培养箱内培养
24 h。每种菌株取 2 支供测试用，其余注明日期，置 0 ～ 4℃
冰箱冷藏备用。
4. 2. 3 待试菌种灭菌 将试验所需的培养皿及试管用报
纸包扎好，1ml移液管、打孔器、细菌涂布器用报纸包好，试
验所需培养基及装好蒸馏水的试管(10 ml /支)放在高压蒸
汽灭菌锅中，湿热灭菌(121℃，20 min) ，备用。
4. 2. 4 供试菌株悬浮液制备 把预先进行菌种斜面活化
的各菌种分别挑取 2 环制成菌悬液。然后对每种菌取 2 支
盛有 10 ml无菌水的试管排在试管架上，稀释菌液浓度，使
其含菌体为 107 － 108CFU(菌落形成单位)/ml，即得供试
菌种，将各种菌的菌悬液贴好标签备用。
4. 2. 5 藤茶总黄酮溶液的配置 取 100mg 藤茶浸膏(总
黄酮含量 72%)溶于 20ml 蒸馏水，配成 5mg /ml 藤茶总黄
酮溶液;复方黄连素溶液的配置:取 100mg 复方黄连素药
片粉末，溶于 20ml蒸馏水中，配置成 5mg /ml 溶液;青霉素
V钾溶液的配置:取 20mg青霉素 V钾药片粉末，溶于 20ml
蒸馏水中，配制成 1mg /ml溶液。
4. 2. 6 抑菌试验 采用平板打孔法，在无菌超净工作台上
用移液枪分别吸取 0. 1ml不同菌种的菌悬液于直径为 9cm
的灭菌培养皿中，分别用细菌涂布器涂布均匀后，用外径
6mm的灭菌不锈钢打孔器在培养基上打三个等距离的孔，
分别为:1 号孔为藤茶总黄酮溶液，浓度为 5mg /ml;2 号孔
为复方黄连素溶液，5mg /ml或者青霉素 V 钾溶液，浓度为
1mg /ml;3 号孔为无菌蒸馏水。每种菌种重复三个培养皿。
加好样后，将平板置于 37℃恒温培养箱内培养 24 h。24h
后将平板取出，测量抑菌圈直径，结果见(表 2)。
表 2 藤茶总黄酮对 5 种细菌的抑菌效果
供试
菌种
抑菌圈直径(mm)
藤茶总黄酮
(5mg /ml)
复方黄连素
(5mg /ml)
青霉素 V钾
(1mg /ml)
蒸馏水
志贺氏菌 21. 73 5. 5 13. 36 5. 5
沙门氏菌 18. 73 5. 5 10. 70 5. 5
大肠杆菌 8. 49 5. 5 5. 55. 5
枯草芽孢杆菌 13. 05 10. 83 27. 35 5. 5
金黄色葡萄球菌 14. 43 11. 69 34. 68 5. 5
·2· 贵阳中医学院学报 第 35 卷
书4. 2. 7 最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)的测
定 在无菌条件下，将灭菌试管分成 5 组，每组 7 支。第 1
支试管中加入 2ml 2 倍浓度的 LB 液体培养基，第 2 ～ 5 支
试管中各加入 2ml LB 液体培养基，向第 1 支试管中加入
2ml提取液后按 2 倍稀释法，使各管药液浓度分别为 5、
2. 5、1. 25、0. 625、0. 3125mg /ml，然后分别向这 5 管中加入
0. 1ml各菌种的菌悬液，第 6 支试管中加 2ml LB液体培养
基，不加提取液作为阳性对照，第 7 支试管中加 1ml藤茶总
黄酮溶液，1ml2 倍 LB液体培养基，但不加菌悬液作为阴性
对照，将试管置于 37℃恒温培养箱内培养 24h。从以上各
试管中分别取 0. 1ml 涂布于固体 LB 培养基平板上，于
37℃恒温培养箱内培养，分别于 24h、48h 后观察，以 24 h
不长菌的总黄酮溶液浓度为最小抑菌浓度，以 48 h不长菌
的提取液浓度为最小杀菌浓度。结果见(表 3)。
表 3 藤茶总黄酮对供试菌种的
MIC和 MBC(mg /ml)
菌种 MIC MBC
志贺氏菌
沙门氏菌
大肠杆菌
枯草芽孢杆菌
金黄色葡萄球菌
0. 625
1. 25
2. 50
1. 25
2. 5
1. 25
1. 25
5. 00
2. 50
2. 50
5 讨论
藤茶总黄酮抗炎试验结果表明，藤茶总黄酮高、中、低
剂量组对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀均有抑制作用，且随着
藤茶总黄酮浓度的提高其肿胀抑制率也相应提高。藤茶
总黄酮高剂量组对小鼠耳廓肿胀的抑制效果显著，低、中
剂量组抑制效果不显著，而罗红霉素组较总黄酮高剂量组
抑制效果更显著。
藤茶总黄酮体外抑菌试验结果表明，5mg /ml藤茶总黄
酮对金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、枯草芽孢杆菌、沙门氏
菌、大肠杆菌均有抑菌效果。通过比较抑菌圈的直径可
知，5mg /ml藤茶总黄酮对这 5 种细菌的抑菌效果从高到低
依次为志贺氏菌 ＞沙门氏菌 ＞枯草芽孢杆菌 ＞金黄色葡
萄球菌 ＞大肠杆菌;供试药品中只有藤茶总黄酮对所有供
试菌都有抑菌效果，同等浓度的复方黄连素溶液对志贺氏
菌、沙门氏菌和大肠杆菌均没有抑制效果，1mg /ml 的青霉
素 V 钾溶液对大肠杆菌无抑菌效果;5mg /ml 的复方黄连
素溶液对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果不
如藤茶总黄酮明显;1mg /ml 的青霉素 V 钾溶液对志贺氏
菌和沙门氏菌的抑菌效果不如藤茶总黄酮明显，对枯草芽
孢杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果比藤茶总黄酮明显
得多;通过比较藤茶总黄酮对 5 种细菌的 MIC 和 MBC 可
知，藤茶总黄酮抑制志贺氏菌效果最显著，抑制大肠杆菌
最不显著。
参考文献
［1］ 中国科学院植物研究所 . 中国高等植物图鉴补编［M］. 第
二册 . 北京:科学出版社，1983:355 － 356．
［2］ 《全国中草药汇编》编写组 . 全国中草药汇编［M］. 下册 .
北京:人民卫生出版社，1978:788．
［3］ 陈帅，郁建平 . 藤茶总黄酮超声提取工艺研究［J］. 山地农业
生物学报，2010，29(5) :440 － 444．
［4］ 陈奇 . 中药药理研究方法学［M］. 北京:人民卫生出版社，
1993:305．
［5］ 李仪奎 . 中药药理实验方法学［M］. 上海:科学技术出版
社，1991:350．
* 基金项目: 2011 年贵阳中医学院“大学生创新性实验”课题资助．
* 通讯作者: 冯玲媚，女，教授，研究方向: 针药并用治疗心血管方面的研究．
收稿日期: 2012 － 07 － 14
针刺补泻足三里对急性胃溃疡治愈期大鼠血清
胃动分泌影响的实验研究*
代兴威1，吴 志1，范灵通1，冯玲媚* 2，冯 麟2
( 1. 贵阳中医学院针灸推拿学院 2007 本科，贵州贵阳 550002; 2. 贵阳中医学院针灸推拿学院，贵州贵阳 550002)
摘要:目的:研究大鼠实验性胃溃疡在针刺补泻下胃溃疡治愈期间血清胃动素( MTL) 、胃黏膜组织形态学变化。方
法:24 只 SD大鼠以水浸拘束法造模，造模成功后将大鼠分为模型组、足三里补法组、泻法组各 8 只、正常对照组( 8 只单独
笼养) 。足三里补法组与泻法组分别进行足三里补法、泻法针刺治疗。用 ELISA( 酶联免疫吸附法) 对血清胃动素检测表
·3·
第 35 卷 第 1 期
2013 年 1 月
贵阳中医学院学报
JGCTCM
No. 1 Vol. 35
January 2013