全 文 ：· · 中国医药工业杂志 Chinese Journal of Pharmaceuticals 2013, 44(8)798
脱氢枞酸 (1) 又称去氢枞酸或脱氢松香酸，是
一种含有苯环的三环二萜类化合物，是歧化松香的
主要化学成分，也是松塔的主要成分之一。其化学
结构中存在多个手性中心和共轭双键，对其分子结
构中的羧基、芳环进行结构改造，或通过某些微生
物或细菌催化转化所得化合物，具有明显的抗菌、
抗氧化、抗肿瘤、抗病毒和抗溃疡等多种生物活
性 [1-9]，在医药领域具有广阔的应用前景。
松塔 Pine cone系松科松属 Pinaceae Pinus植物
的球果，又名松果，其植物来源有华山松、云南松、
不同采摘时间云南松松塔中脱氢枞酸的 HPLC法测定
严文静1，李春艳2，杨永寿2，刘光明2，肖培云2*
(1. 大理学院护理学院，云南大理 671000；2. 大理学院药学与化学学院，云南大理 671000)
摘要：建立了高效液相色谱法测定云南松松塔中脱氢枞酸的含量，采用 Phenomenex Gemini-NX C18 110A型色谱柱，以乙
腈 -0.3％磷酸 (58︰ 42) 为流动相，检测波长 214 nm。并考察不同采收时间云南松松塔中脱氢枞酸含量的动态变化。结
果显示，不同采收季节云南松松塔中脱氢枞酸的含量有显著差异，5月含量最高。
关键词：云南松松塔；脱氢枞酸；高效液相色谱；测定
中图分类号：R284 文献标志码：A 文章编号：1001-8255(2013)08-0798-04
收稿日期：2012-03-11
基金项目：国家自然科学基金资助项目(81260632)
作者简介：严文静(1977-)，女，讲师，从事儿科教学及科研研
究。
通信联系人：肖培云(1970-)，女，教授，从事药品质量标准研
究。
Tel：0872-2257415，015808729786
E-mail：xpy990120@126.com
Determination of Dehydroabietic Acid in Pine Cones of Pinus yunnanensis Franch at
Different Collection Time by HPLC
YAN Wenjing1, LI Chunyan2, YANG Yongshou2, LIU Guangming2, XIAO Peiyun2*
(1. College of Nursing, Dali University, Dali 671000; 2. College of Pharmacy and Chemistry, Dali University, Dali 671000)
ABSTRACT: An HPLC method was established for the determination of dehydroabietic acid in pine cones of
Pinus yunnanensis Franch. A Phenomenex Gemini-NX C18 column was used with the mobile phase of acetonitrile-0.3％
phosphoric acid (58︰42) at the detection wavelength of 214 nm. The results showed that the content of dehydroabietic
acid from pine cones of Pinus yunnanensis Franch was varied with different collection time and the highest appeared in
May.
Key Words: pine cone of Pinus yunnanensis Franch; dehydroabietic acid; HPLC; determination
红松、油松及思茅松等。其中分布在云南的云南松
Pinus yunnanensis Franch资源十分丰富，其松塔主
要当作燃料。本研究建立了测定云南松松塔中 1含
量的 HPLC法，并对其动态变化进行研究，为云南
松松塔药材的采摘和开发利用提供参考。
1 仪器与材料
1100型高效液相色谱仪，包括 G1315A/B DAD检测
器，G1313A ALS自动进样器，1100型色谱工作站 (美国
Agilent公司 )。
1对照品 (International Lab. USA NO. 349806，纯度≥
99％ )；云南松松塔 (采自云南省大理市巍山县者嬷山，由
大理学院药用植物学教研室周浓副教授鉴定为云南松 )；乙
腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 溶液配制
对照品溶液：精密称取经五氧化二磷干燥至恒
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重的 1对照品 28 mg，置 25 ml量瓶中，加甲醇溶
解并定容，制得 1.12 mg/ml的对照品贮备液。精密
移取上述贮备液 1 ml于 10 ml量瓶中，加甲醇定容，
即得 112 g/ml的对照品溶液。
供试品溶液：精密称取云南松松塔细粉 1 g( 自
然干燥后粉碎，过 2号筛；下同 )，置 50 ml圆底
烧瓶中，精密加入甲醇 15 ml, 称重，超声 (45 Hz，
250 W)提取 40 min，冷却后用甲醇补重，以 0.45 μm
微孔滤膜过滤，取续滤液即得。
2.2 色谱条件
色谱柱 Phenomenex Gemini-NX C18 110A型
色谱柱 (4.6 mm×250 mm，5 m) ；流动相 乙腈 -
0.3％磷酸 (58︰ 42) ；流速 1.0 ml/min；检测波长
214 nm；柱温 25 ℃；进样量 10 l。
取“2.1”项下对照品溶液和供试品溶液各
10 l，按上述色谱条件进样测定，记录色谱图 (图
1)。结果显示，理论塔板数按 1峰计大于 6 000，1
与各杂质峰完全分离。
1-1
图 1 对照品溶液 (A)和供试品溶液 (B)的HPLC谱图
2.3 波长的选择
取“2.1”项下对照品溶液和供试品溶液各
10 l，按“2.2”项进样测定，并用高效液相色谱
仪系统软件检测得对照品溶液和供试品溶液中 1的
紫外吸收光谱图 ( 图 2)。可知 1最大吸收波长为
214 nm，故选 214 nm作检测波长。
2.4 提取溶剂的考察
精密称取云南松松塔细粉 1 g，共 3份，分别
精密加入甲醇、乙酸乙酯、石油醚各 15 ml，按“2.1”
项制备供试品溶液，并按“2.2”项测定 1含量，结
果见表 1。结果表明甲醇的提取效果最好，故选用
甲醇。
表 1 提取溶剂的考察 (n=3)
溶剂 含量/mg·g-1 RSD/％
石油醚 1.563 1.58
甲醇 1.701 1.05
乙酸乙酯 1.602 1.96
2.5 物料比的考察
精密称取云南松松塔细粉 1 g，共 18份，平均
分为 6组，分别精密加入甲醇 10、15、20、25、30
和 35 ml，按“2.1”项制备供试品溶液，并按“2.2”
项测定 1含量。结果表明甲醇用量在 15～ 35 ml时，
1含量无显著差异，故甲醇用量选择 15 ml。
2.6 提取时间的考察
精密称取云南松松塔细粉 1 g，共 21份，分别
精密加入甲醇 15 ml，平均分为 7组，各超声提取
15、20、30、40、50、60、70 min，按“2.1”项制
备供试品溶液，并按“2.2”项测定 1含量。结果表
明超过 40 min后 1含量无显著差异，故选择提取时
间为 40 min。
2.7 方法学考察
2.7.1 线性关系考察
取 1对照品贮备液和 1对照品溶液适量，分别
配制成浓度为 0.011 2、0.056、0.112、0.224、0.56
和 1.12 g/ml的系列溶液，进样 20 l，以进样量 X
为横坐标，峰面积 Y为纵坐标，绘制标准曲线，得
回归方程 Y=1 814.5X+51.928，r=0.999 9，表明 1在
0.224～ 22.4 g范围内线性关系良好。配制浓度
为 1.12 g/ml的 1对照品溶液，取 5 l进样测定，
以 S/N=3计，检测限为 5.6 ng，RSD=2.68％。取上
A B
图 2 对照品溶液 (A)和供试品溶液 (B)中 1的
紫外吸收光谱
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述溶液 20 l进样测定，以 S/N=10计，定量限为
22.4 ng，RSD=1.17％ (n=3)。
2.7.2 精密度试验
精密吸取 0.112 g/ml的 1对照品溶液 10 l，
按“2.2”项重复进样 6次，计算得其峰面积的 RSD
为 0.34％ (n=6)，表明精密度良好。
2.7.3 稳定性试验
精密吸取供试品溶液 10 l，分别于配制后 0、2、
4、6、8、10及 12 h进样测定，测得其含量的 RSD
为 0.61％ (n=6)，表明被测组分在 12 h内稳定。
2.7.4 重复性试验
取同批云南松松塔细粉 1 g，按“2.1”项平行
制备 6份供试品溶液，按“2.2”项分别测定 1含
量，得 1含量的平均值为 1.709 mg/g，RSD为 2.78％
(n=6)。
2.7.5 回收率试验
精密称取 9份已知 1含量 (1.709 mg/g) 的云
南松松塔细粉样品适量，平均分为 3组，分别精
密加入 1对照品贮备液 (1.12 mg/ml)0.9、0.75和
0.6 ml，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，并按“2.2”
项测定 1含量，计算得平均回收率为 98.21％，RSD
为 1.70％ (n=9)。
2.8 不同采摘时间云南松松塔中 1的含量测定
精密称取不同月份采摘的云南松松塔细粉 1 g，
按“2.1”项制备供试品溶液，并按“2.2”项测定 1
含量，得不同月份云南松松塔中 1的含量，结果见
表 3，色谱图见图 3。结果表明，5月云南松松塔中
1的含量最高。
表 3 不同采摘时期云南松松塔中 1的含量 1)(n=3)
月份 含量/ mg·g-1 RSD/％ 月份 含量/mg·g-1 RSD/％
3 3.073 2.15 8 1.064 2.21
4 4.106 2.44 9 1.126 2.44
5 5.246 1.78 10 1.014 2.58
6 2.370 1.96 11 0.751 2.61
7 1.709 2.13 12 0.844 2.32
注：1)1、2月份松塔刚结果，无法采样
3 讨论
考察了超声和回流两种提取方法，结果表明用
超声提取的效果较好，所以选用超声提取法。
考察了流动相的组成和比例，分别选用甲醇 -
0.1％冰乙酸、乙腈 -0.1％冰乙酸、甲醇 -0.3％磷酸、
乙腈 -0.3％磷酸为流动相，结果发现流动相为乙
腈 -0.3％磷酸 (58∶ 42) 时，保留时间适宜，色谱
峰对称性好，故选用乙腈 -0.3％磷酸 (58∶ 42) 作
流动相。
由于药材中主要成分在不同生长时期的含量有
所不同，故对不同采摘时间的云南松松塔中 1的含
量进行测定。从测得的 10个月云南松松塔中 1含
量可知，若以 1为目标提取物，则每年 5月是最佳
采收季节。
参考文献：
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New route to 15-hydroxy dehydroabietic acid derivatives:
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图 3 不同采摘时间云南松松塔的色谱图
中国医药工业杂志 Chinese Journal of Pharmaceuticals 2013, 44(8) · ·801
and nor-abietane type terpenoids [J]. Tetrahedron Lett, 2006,
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物研究进展 [J]. 化工进展 , 2007, 26(4): 490-495.
药用丁基胶塞作为直接接触药品的包装材料，
为药品质量提供了可靠的保障。但是在对药用丁基
胶塞中挥发性成分的考察中发现，抗氧化剂 2,6-二
叔丁基对甲基苯酚 (BHT) 的含量较高 [1]。研究表
明 BHT对肺、肝等组织有直接损害作用，并有可
能促进肿瘤发生。瑞典、澳大利亚等国家已禁止
BHT作为食品添加剂，美国在部分食品中也禁止加
入 BHT[1]。
采用 GC-MS/MS法测定药用丁基胶塞中的
药用丁基胶塞中 BHT的 GC-MS/MS法测定
周 劼，殷 果，刘洪伟，刘 尧，王晓炜
(深圳市药品检验所，广东深圳 518057)
摘要：建立了气相色谱串联质谱法测定药用丁基胶塞中的 2,6-二叔丁基对甲基苯酚 (BHT)。采用 Agilent HP-5色谱柱，
程序升温，顶空进样，多离子反应监测模式。BHT在 1～ 80 g/ml浓度范围内线性关系良好，回收率为 98.2％。
关键词：药用丁基胶塞；2,6-二叔丁基对甲基苯酚；气相色谱串联质谱；测定
中图分类号：O657.7+1 文献标志码：A 文章编号：1001-8255(2013)08-0801-03
收稿日期：2013-02-21
作者简介：周 劼(1975-)，女，主管药师，从事无源医疗器械产品
及药包材的质量分析及质量标准研究。
Tel：013902909818
E-mail：402293882@qq.com
Determination of BHT in Butyl Rubber Closures by GC-MS/MS
ZHOU Jie, YIN Guo, LIU Hongwei, LIU Yao, WANG Xiaowei
(Shenzhen Institute for Drug Control, Shenzhen 518057)
ABSTRACT: A GC-MS/MS method was established for the determination of 2,6-di-tert-butyl-4-methylphenol (BHT)
in butyl rubber closures. An Agilent HP-5 column was used, with temperature programming, headspace sampling, and MRM
mode. It was linear in the concentration range of 1 - 80 g/ml. The average recovery was 98.2％.
Key Words: butyl rubber closure; BHT; GC-MS/MS; determination
BHT，前处理过程简单，灵敏度和准确性大大提高。
本研究建立了 GC-MS/MS法测定 4种胶塞 (共 35
批 )中的 BHT，对药用丁基胶塞的质量进行评价。
1 仪器与材料
气相色谱 -质谱联用仪 (7890A+7000 GC/MS Triple
Quad Agilent，美国 Agilent公司 )，MassHunter工作站。
BHT( 美国 Sigma公司，含量 99.5％ )，正己烷为分析纯。
本研究共涉及国内外 6个胶塞生产企业，4个胶塞品种
(注射液用溴化丁基橡胶塞、注射用无菌粉末用卤化丁基橡
胶塞、药用溴化丁基橡胶塞和冷冻干燥用溴化丁基胶塞 )，
7个规格，35个批次，均为生产企业自检合格入库的样品。
2 方法与结果
2.1 色谱与质谱条件
