免费文献传递   相关文献

铁苋菜提取物对三硝基苯磺酸诱导大鼠结肠炎结肠组织的保护作用



全 文 :铁苋菜提取物对三硝基苯磺酸诱导大鼠结肠炎结肠组织的保护作用
钱 沿 1 程齐来 2 李洪亮 2 丁冶春 2
1. 赣南医学院基础医学院 (江西 赣州 341000)
2. 赣南医学院药学院 (江西 赣州 341000)
【摘 要】 目的 研究铁苋菜提取物对大鼠结肠炎组织损伤的修复保护作用及其机制。方法 建立Wistar大鼠结肠炎
模型,灌胃用药 2周后,评价大鼠结肠黏膜损伤指数(CMDI),检测结肠组织髓过氧化物酶(MPO)及超氧化物歧化酶(SOD)活
性、丙二醛(MDA)含量和细胞肿瘤因子(TNF)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-10(IL-10)水平。结果 不同剂量铁苋菜提
取物(200、400、600 mg·kg-1)灌胃均能不同程度降低模型大鼠 CMDI、MPO活性,减少 MDA含量,提高 SOD活性,降低 TNF、
IL-8、I L-10水平,且与用药剂量呈一定量效关系。结论 铁苋菜提取物通过拮抗氧化、免疫调节、损伤修复作用缓解结肠炎
大鼠炎症反应,减轻结肠损伤。
【关键词】 结肠炎;铁苋菜提取物;抗氧化作用;调节免疫;大鼠
【中图分类号】 R285.5 【文献标识码】 A 【文章编号】 1007-1334(2008)11-0085-02
[作者简介]钱沿(1960-),女,吉林汪清人,硕士生,讲师,主要从
事药学教学与科研工作。
铁苋菜(Acalypha australis.L),又称海蚌含珠,大戟科植
物,一年生草本,全草均可入药,具清热解毒、止痢、止血等功
效,民间常用于治疗肠炎、痢疾、尿血、便血等症。体外实验发
现铁苋菜的水提液对多种细菌具有杀伤作用,并对番泻叶引
起的腹泻具有拮抗作用[1]。铁苋菜的抗结肠炎作用虽有记载,
但国内相关报道极少。为观察铁苋菜对炎症性肠炎组织损伤
是否有修复保护作用,我们通过建立大鼠结肠炎模型,用不同
剂量铁苋菜提取物灌胃给药,观察其对炎症性肠炎的保护作
用及其机制,报道如下。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 动物 健康Wistar大鼠,雌雄兼用,体质量 250~270 g,
由江西中医学院实验动物中心提供(SPF级,合格证号为赣实
动管第 11号)。
1.1.2 药物和试剂 铁苋菜 500 g购于赣州市三九药店。将
药材粉碎后过 40目筛。取细粉加水浸润 3 h,然后分别加水
12倍、10倍加水煎煮 2次,第 1次 2 h,第 2次 1.5 h,抽滤,合
并滤液。浓缩到 100 ml,相当于原药材 5 g·ml-1,即为铁苋菜水
提取物(以下简称提取物)。由赣南学院药学院天然药物开发
与研究重点实验室完成。2, 4, 6一三硝基苯磺酸(TNBS),美国
Sigma公司产品;5-氨基水杨酸(5-ASA)原料药,国怡药业有
限公司提供;MPO、SOD、MDA检测试剂盒,南京建成生物工
程研究所提供;TNF、IL-8试剂盒,解放军总医院科技开发中
心放免所提供;IL-10试剂盒,深圳晶美生物工程公司提供。
1.1.3 仪器 Aeroset 09D05-01全自动生化分析仪(美国);
TL-16G型高速冷冻离心机(上海实验仪器厂生产);GC-1200
撤射免疫计数器(中国安徽科大创新股份有限公司)。
Protective Effects of Acalypha australis Extract on Colonic Tissues with Ulcerative
Colonitis Induced by Trinitrobenzene Sulfonic Acid in Rats
QIAN Yan1 CHENG Qi-lai2 LI Hong-liang2 DING Ye-chun2
1. Department of Basic Medicine, Gannan Medical College, Ganzhou,Jiangxi
2. Department of Pharmacy, Gannan Medical College,Ganzhou,Jiangxi
Abstract:
Objective To explore the protective effects of Acalypha australis water extract on the colonic tissues with ulcerative colonitis induced
by trinitrobenzene sulfonic acid(TNBS) as well as its mechanisms in rats. Methods Rat model of ulcerative colonitis was established by
clyster of TNBS. After treatment with Acalypha australis extract for 2 weeks, the colon mucosal damage index(CMDI) was evaluated. The
activity of myeloperoxidase(MPO), superoxide dismutase(SOD), the content of malondialdehyde(MDA) in colon tissues, and the levels of
tumor necrosis factor(TNF), interleukin-8(I1-8) and interleukin-10(IL-10) in serum were examined. Results Acalypha australis extract
(200, 400,600 mg·kg-1) decreased the values of CMDI, the activity of MPO, the contents of MDA, and the levels of TNF, IL-8 and IL-
10, but increased the activity of SOD in a dose-depended manner. Conclusion Acalypha australis extract can relieve the inflammatory
reaction and colonic injury in colonitis rats by immunoregulation, anti-oxidation and wound repair.
Key Words:
Colonitis; Acalypha australis extract; anti-oxidation; immunoregulation; rat
上海中医药杂志 2008 年第 42卷第 11期 SH.J.TCM Nov.,2008;Vo1.42 No.11 ·85·
DOI:10.16305/j.1007-1334.2008.11.027
1.2 方法 大鼠禁食 24 h后(饮水照常),将溶于 500 ml·l-1乙
醇的 TNBS按 100 mg·kg-1,体积 0.25 ml/只,用导管(直径 4 mm)
经肛门插人结肠内约 8 cm灌肠 1次,建立结肠炎模型[2]。实验
设正常组、模型组、阳性药物对照组(5-ASA,100 mg·kg-1)和铁
苋菜大、中、小剂量组(铁苋菜灌服剂量分别为 600 mg·kg1、
400 mg·kg-1、200 mg·kg-1),从制备模型 7 d后开始灌胃给药,
每日 1次,共 14 d。正常组与模型组均给予等量 0.9%氯化钠
溶液灌胃。实验完成后处死动物,参照文献[3]的方法及标准评
价 CMDI,评分标准为:0=无损伤;1=轻度充血,水肿,表面光
滑,无糜烂或溃疡;2=充血水肿,黏膜粗糙呈颗粒状,有糜烂
或肠豁连;3=高度充血水肿,黏膜表面有坏死及溃疡形成,溃
疡最大纵径<1 cm,肠壁增厚或表面有坏死及炎症;4=在 3分
基础上溃疡最大纵径>1 cm,或全肠壁坏死。结肠标本常规石
蜡包埋,切片,HE染色,光镜观察。尾动脉采血放免法检测
TNF,IL-8,IL-10。另取新鲜结肠组织,用预冷的生理盐水冲洗
除去血液,滤纸吸干称质量,加 9倍生理盐水,在低温(冰水)中
用玻璃研磨器研磨制成 100 ml·L-1的组织匀浆, 高速离心取上
清液低温(3℃)保存待测,MPO,MDA,SOD按试剂盒说明书进
行。
1.3 统计学方法 实验数据采用 SPSS for Windows 11.0软
件进行 t检验统计处理。
2 结果
2.1 病理学及炎症反应 模型组大鼠结肠黏膜充血水肿,大
量炎性细胞浸润,肠壁增厚,黏膜表面有明显坏死及溃疡形
成,腺体中杯状细胞减少。而不同剂量的铁苋菜提取物用药
组以上病理组织表现明显缓解。CMDI、MPO活性在模型组
大鼠升高,而铁苋菜大、中、小剂量组与 5-ASA 组不同程度
降低(P < 0.05,P < 0.01),且铁苋菜给药组呈现一定量效关系
(表 1)。
表 1 铁苋菜提取物对结肠炎大鼠炎症反应的影响(x±s,n=10)
2.2 结肠炎大鼠氧自由基和免疫功能检测 与模型组比较,
铁苋菜大、中、小剂量组与 5-ASA组均降低结肠组织中 MDA
含量,升高 SOD活性,且铁苋菜提取物给药组中、大剂量作用
显著(P < 0.01)。与对照组比较,模型组大鼠血清中 TNF,IL-8
水平明显升高,IL-10明显降低(P < 0.01);经过 2周的灌胃用
药,模型组大鼠血清 TNF,IL-8水平降低,IL-10明显升高(P
< 0.05,P < 0.01)。
组 别 剂量(mg·kg-1) CMDI MPO(nkat·g-1)
正常组 - 0.00±0.00 862.56±125.84
模型组 - 4.27±0.38△△ 2876.42±527.98△△
5-ASA组 100 1.83±0.17** 2016.12±128.56**
铁苋菜小剂量组 200 2.78±0.53* 1869.17±379.36*
铁苋菜中剂量组 400 2.02±0.32** 2267.23±432.40**
铁苋菜大剂量组 600 1.98±0.34** 2014.87±217.78**
注:与模型组比较,*P < 0.05,**P < 0.01;与对照组比较,△△P < 0.01。下同。
3 讨论
TNBS与乙醇诱发大鼠结肠炎的主要机制为乙醇破坏结
肠黏膜屏障,TNBS渗入结肠与大分子物质结合,形成全抗原
引起肠壁一系列免疫应答与炎症反应。其发病机制及病理表
现与人类炎症性肠炎非常相似[4]。
免疫异常、氧自由基作用在炎症性肠病的发病机制中占
有重要地位。本实验采用 TNBS与乙醇诱发大鼠结肠炎模型
后,发现大鼠血清中的促炎因子与抗炎因子水平变化明显,结
肠组织中 MDA含量明显升高、SOD活性降低,证明了免疫异
常与氧自由基在炎症性肠病的发病机制中起重要作用。我们
观察到,铁苋菜提取物给药组组织病理损伤程度明显缓解,缓
解炎症反应,表现出抗炎、抗损伤的保护作用。实验中铁苋菜
提取液灌胃用药能降低结肠炎模型组大鼠代谢产生的脂质
过氧化物 MDA含量,升高重要抗氧化酶 SOD活性,表现出抗
氧化特性,从而抑制结肠组织中的脂质过氧化反应,保护组织
细胞。铁苋菜提取物灌胃能明显降低模型组大鼠 TNF, IL-8
及升高 IL-10水平。总之,铁苋菜提取物通过免疫调节及抗脂
质过氧化作用,对大鼠结肠炎结肠损伤进行修复,抑制结肠炎
大鼠炎症反应,对结肠炎具有抗损伤保护作用。
参考文献:
[1]李继洪,张志蓉.咳喘清颗粒止咳平喘祛痰作用研究[J].时珍国医国药,
2006,17(5):749-750.
[2]Hibi T, Ogata H, Sakuraba A. Animal models of inflammatory bowel
disease[J].J Gastroenterol, 2002,37(6): 409-417.
[3]梅俏,于皆平,许建明,等.褪黑素对结肠炎大鼠免疫功能的影响[J].世
界华人消化杂志,2002,10(8):193-195.
[4]Millar AD, Rampton DS, Chander CL, et al. Evaluating the antioxidant
potential of new treatments for inflammatory bowel disease using a rat
model of colitis[J]. Gut ,1996,39(11):407-415.
表 2 铁苋菜提取物对结肠炎大鼠氧自由基和免疫功能的影响(x±s,n=10)
组 别 剂量(mg·kg-1) MDA(μmol·g-1) SOD(nkat·g-1) TNF(μg·l-1) IL-8(μg·l-1) IL-10(ng·l-1)
正常组 - 1.56±0.18 5008.70±528.46 1.68±0.25 0.67±0.21 79.94±11.46
模型组 - 3.42±0.72△△ 3428.40±428.40△△ 3.46±0.46△△ 1.36±0.27△△ 28.37±9.94△△
5-ASA组 100 2.96±0.48** 4880.47±320.67** 2.08±0.37** 0.92±0.18** 72.78±8.93**
铁苋菜小剂量组 200 1.98±0.34* 4267.49±509.48* 2.32±0.17* 1.11±0.24* 46.62±9.19*
铁苋菜中剂量组 400 1.87±0.56** 3629.80±520.10** 2.27±0.33** 1.07±0.05** 52.16±7.46**
铁苋菜大剂量组 600 1.70±0.49** 3543.87±318.61** 2.20±0.46** 0.98±0.02** 58.86±10.87**
编辑:季春来
收稿日期:2008-05-20
·86· 上海中医药杂志 2008 年第 42卷第 11期 SH.J.TCM Nov.,2008;Vo1.42 No.11