全 文 ：收稿日期:2009-12-19; 修订日期:2010-05-18
基金项目:国家自然科学基金(No． 30860365) ;
大理学院药物研究所基金(No． 2008YY003)
作者简介:张 桢(1976-)，男(彝族)，云南凤庆人，现为大理学院药学院副
教授，硕士学位，主要从事抗病毒天然药物有效成分分离与分析研究工作．
* 通讯作者简介:刘光明(1953-) ，男(汉族) ，云南泸西人，现任大理学院
药学院教授，硕士学位，主要从事抗病毒天然药物研究工作．
华山松松塔中抗艾滋病病毒
活性部位多糖的含量测定
张 桢，张 鹏，韩先东，杨 敏，刘 凡，刘光明*
(大理学院·药学院，云南 大理 671000)
摘要:目的 建立华山松 Pinus armandii Franch．松塔中抗艾滋病病毒(HIV)活性部位多糖含量测定方法。方法 采用苯
酚 －硫酸法显色，在 489． 0 nm波长处用紫外分光光度法测定多糖含量。结果 回归方程为:A = 0． 011 3C － 0． 058 2，相关
系数 r = 0． 999 6，测得抗 HIV 活性部位(Ⅰ ～ Ⅲ)多糖含量分别为:64． 69%，67． 14%，71． 85%;平均加标回收率为
99． 32%，RSD为 0． 34%(n = 6)。结论 该方法快速、简便、灵敏，可作为松塔中抗 HIV活性部位的多糖含量测定方法。
关键词:多糖; 抗 HIV活性部位; 华山松; 苯酚 －硫酸法
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2010． 10． 007
中图分类号:R284． 1 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2010)10-2435-01
Content Determination of Polysaccharides in the Anti －HIV Active Sites from Pine Cone
of Pinus Armandii Franch．
ZHANG Zhen ，ZHANG Peng，HAN Xian-dong，YANG Min，LIU Fan，LIU Guang-ming*
(College of Pharmacology，Dali University，Dali，671000 ，China)
Abstract:Objective To determine the content of polysaccharides in the activity sites from pine cone of Pinus armandii Franch．
Methods Phenol － sulfuric acid method was used to determine the content of polysaccharides at 489． 0nm． Results The regres-
sion equation was A = 0． 0113C － 0． 0582，r = 0． 999 6． The contents of polysaccharides in anti － HIV active sitesⅠ －Ⅲ was 64．
69%，67． 14%，71． 85%，respectivety． The average recovery was 99． 32% and RSD was 0． 34%(n = 6)． Conclusion The meth-
od is rapid，reliable and sensitive，and it can be used to determine the contents of polysaccharides in the activity sites from pine
cone of Pinus armandii Franch．
Key words:Content determination; Polysaccharides; Anti － HIV; Active site; Pinus armandii Franch; Phenol － sul-
furic acid method
我国松科松属植物资源丰富，有 22 种，10 个变种，另引进 16
种，又 2 个变种，合计五十余种，分布极广［1］。该属植物多具药用
价值，作为天然药物在国内外都有着长期和广泛的应用，有祛痰、
止咳、平喘功效［2］。
松属的松塔主要作为农家燃料，药用开发很少。根据云南省
医学信息研究所的调查报告，国内未见松塔抗艾滋病的报道。本
论文对采集于云南省巍山县的华山松 Pinus armandii Franch． 松
塔进行研究，我们找到抗 HIV 活性显著的部位并对其活性部位
的多糖含量进行测定，为进一步研究抗 HIV药物打下基础。
1 仪器与试剂
1． 1 仪器 DHG －9075A型电热恒温鼓风干燥箱(上海一恒科技
有限公司) ，FA2004N电子天平(上海精密科学仪器有限公司) ，
超声波仪(上海声源超声波仪器设备有限公司) ，电子恒温水浴
锅(上海金桥科析仪器厂) ，T6 新世纪紫外可见分光光度计(北
京普析通用仪器有限公司)。
1． 2 试剂 葡萄糖(AR，广东汕头市西陇化工厂，0501311) ，苯酚
(AR，天津市化学试剂三厂，20061208) ，浓硫酸(AR，重庆川东化
工有限公司化学试剂厂，20070112)。
2 方法与结果
2． 1 葡萄糖标准溶液的配制 精密称取 105℃干燥至恒重的葡
萄糖 10 mg，用蒸馏水溶解并定容到 100 ml的容量瓶中，摇匀，使
成 100 μg /ml的标准溶液，备用。
2． 2 最大吸收波长的选择 精密称取 105℃干燥至恒重的葡萄
糖 5 mg，用蒸馏水溶解并定容到 100 ml 的容量瓶中，摇匀，使成
50 μg /ml的溶液。精密吸取该溶液 1 ml，加入 5%苯酚溶液 1． 50
ml，浓硫酸 6 ． 00 ml，室温放置 5 min，然后置于沸水浴中加热 15
min，取出后立即放入冷水中冷却至室温。以 1 ml 蒸馏水，1． 50
ml 5%苯酚溶液，6 ． 00 ml浓硫酸混合液做空白，用 T6 新世纪紫
外可见分光光度计在 200 ～ 600 nm波长范围内扫描，确定最大吸
收波长为 489． 0 nm［3］。
2． 3 葡萄糖标准曲线绘制 精密量取“2． 1”项中制备的葡萄糖
标准液各 0． 00，1． 00，2． 00，3． 00，4． 00，5． 00，6． 00 ml 于 25 ml 容
量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀。再用移液管分别量取这 7
种溶液 2． 00 ml于 7 支具塞试管中，依次加入 1． 50 ml 5%苯酚溶
液，摇匀，然后再迅速加入浓硫酸 6 ． 00 ml，迅速混匀，室温放置 5
min，然后置于沸水浴中加热 15 min，取出后立即放入冷水中冷却
至室温。最后以第 1 管中未加入葡萄糖的做空白对照，用 T6 新
世纪紫外可见分光光度计在 489． 0 nm 处测定其吸光度值，以吸
光度值(A)对葡萄糖浓度(C，μg /ml)做回归处理，回归方程为:A
= 0． 011 3C － 0． 058 2，相关系数 r = 0． 999 6，线性范围为:8 ～
48μg /ml［4］。
2． 4 松塔样品溶液配制 分别称取 3 种抗 HIV活性部位样品，用
蒸馏水进行溶解，定容至 100 ml。
2． 5 回收率实验 采用加标回收法，取松塔样品Ⅰ～Ⅲ溶液各 1． 00
ml分别于 6只具塞试管中，分别加入各浓度葡萄糖标准液 0． 50
ml，按“2． 2”项中的方法和步骤进行操作，测其吸光度，并计算回收
率［5］，结果见表 1。测得平均回收率为 99． 32%，RSD为0． 34%。
2． 6 稳定性实验 取松塔样品Ⅰ ～Ⅲ溶液，按“2． 2”项中的方法
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2010 VOL ． 21 NO． 10 时珍国医国药 2010 年第 21 卷第 10 期
和步骤进行操作，每隔 20 min测定 1 次吸光度。结果见表 2。结
果表明 1h内颜色变化较小，不影响测定。
表 1 加标回收实验结果
样品含量 m /
μg
加入葡萄糖量 m /
μg
实际测得量 m /
μg
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
58． 48 2 60． 30 99． 69
58． 48 4 62． 40 99． 87
58． 48 6 64． 00 99． 26 99． 32 0． 34
58． 48 8 65． 58 98． 65
58． 48 10 68． 0 99． 31
58． 48 12 69． 87 99． 13
表 2 稳定性实验结果
间隔时间 t /min 吸光度
0 0． 301
20 0． 301
40 0． 299
60 0． 297
80 0． 294
100 0． 290
2． 7 精密度实验 取松塔样品Ⅰ ～Ⅲ溶液，按“2． 2”项中的方法
和步骤进行操作，重复测定其吸光度 5 次。由实验数据得 RSD
为 0． 43%，表明该方法精密度良好。
2． 8 重复性实验 对松塔样品Ⅰ ～ Ⅲ溶液重复取样 5 次，按
“2． 2”项中的方法和步骤进行操作，分别测其吸光度。得 RSD为
0． 40%［6］。
2． 9 松塔样品中多糖含量测定 取“2． 4”项中 3 种样品液各
1． 00 ml于 25 ml 容量瓶中进行定容，摇匀，过滤。分别取滤液
1． 00 ml按“2． 2”项中的方法和步骤进行操作。测定结果见表 3。
表 3 松塔中多糖含量的测定
样品 样品质量 / g 多糖含量(%) 平均值(%)
Ⅰ 0． 152 4 63． 99
0． 153 1 66． 59 64． 69
0． 152 2 63． 49
Ⅱ 0． 136 2 66． 40
0． 137 7 68． 25 67． 14
0． 136 8 66． 76
Ⅲ 0． 146 4 2． 05
0． 144 1 71． 36 71． 85
0． 146 2 72． 15
3 讨论
本实验方法的原理为多糖在强酸作用下水解生成单糖，并迅
速脱水成糠醛，糠醛与苯酚缩合成有色物质。此实验方法简便易
行，操作方便，测定结果准确。
参考文献:
［1］ 郑万均． 中国树木志［M］． 北京:中国林业出版社，1983:148．
［2］ 中国药典委员会． 中国药典［S］． 北京:人民卫生出版社，1977:
334．
［3］ 李好枝，吕永俊，白 钢，等． 油松果多糖的含量测定［J］． 中草药，
1994，25(4) :185．
［4］ 刘 娟，杨 光，韩晓强． 玉米须多糖提取及其含量测定［J］． 黑龙
江医药科学，2005，28(5) :9．
［5］ 王 铮，李云森，李绍顺． 苯酚 －硫酸法测定白蕊草中多糖的含量
［J］．中国现代应用药学，2006，23(6) :483．
［6］ 李发美． 分析化学，第 5 版［M］． 北京:人民卫生出版社，2004:8．
收稿日期:2009-12-21; 修订日期:2010-04-21
基金项目:国家自然科学基金(No． 30870986) ;科技部国际合作基金资助项目(No． 2006DFA33530) ;贵州省科技厅项目(黔科合 J字［2007］2087，
2092)
作者简介:郭莉莉(1974-) ，女(汉族) ，贵州贵阳人，现为贵阳医学院在读博士研究生，硕士学位，主要从事老年性疾病研究工作．
* 通讯作者简介:官志忠(1951-) ，男(汉族) ，贵州贵阳人，现任贵阳医学院教授，博士研究生导师，博士学位，主要从事分子神经病理学研究工作．
灯盏细辛提取物对痴呆大鼠学习记忆能力
和胆碱酯酶活性的影响
郭莉莉，官志忠*
(贵阳医学院病理学教研室与分子生物学重点实验室，贵州 贵阳 550004)
摘要:目的 探讨灯盏细辛提取物对痴呆大鼠学习记忆能力及胆碱酯酶活性的影响。方法 Wistar大鼠 42 只，随机分为 5
组;用双侧脑室注射 β淀粉样蛋白联合腹腔注射 D －半乳糖方法建立痴呆大鼠模型。采用Morris水迷宫方法检测大鼠学
习记忆能力、比色法检测乙酰胆碱酯酶(AChE)和丁酰胆碱酯酶(BuChE)活性。结果 与正常组和假手术组相比，模型组
大鼠在定向航行和空间探索中逃避潜伏期时间和穿越平台时间延长，穿越平台次数减少(P ＜ 0． 05) ;脑组织中 AChE 和
BuChE活性升高，血浆中 AChE和 BuChE活性降低(P ＜ 0． 05) ，经过灯盏细辛治疗后痴呆大鼠学习记忆能力有所提高，胆
碱酯酶活性趋向于正常(P ＜ 0． 05)。结论 灯盏细辛能够提高痴呆大鼠学习记忆能力，促进胆碱酯酶活性趋向于正常。
关键词:灯盏细辛; 痴呆; 学习记忆能力; 胆碱酯酶; 大鼠
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2010． 10． 008
中图分类号:R284 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2010)10-2436-03
Influence of Herba Erigeromtis Extract on Learning and Memory Ability and Cholinester-
ase Activity of Rats with Dementia
GUO Li-li，GUAN Zhi-zhong*
(Dept． of Pathology and Molecular Biology，Guiyang Medical College，Guiyang 550004，China)
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时珍国医国药 2010 年第 21 卷第 10 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2010 VOL． 21 NO． 10